Name: Een protocol voor het oogsten van single-cel suspensie uit muizenhoornvliezen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T12:33:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: Leer een protocol voor het oogsten van single-cel suspensies uit muizenhoornvliezen met enzymatische digestie. Deze methode levert levende cellen met hoge RNA-integriteit voor scRNA-seq en flowcytometrie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Eghrari, A. O., Riazuddin, S. A., Gottsch, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+the+cornea%3Astructure%2C+function%2C+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Overview of the cornea:structure, function, and development.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 134, 7-23 (2015).</li>
<li>Delmonte, D. W., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+physiology+of+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Anatomy and physiology of the cornea.</a> J Cataract Refract Surg. 37 (3), 588-598 (2011).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+management%3Atargeting+the+ocular+surface+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Dry eye management:targeting the ocular surface microenvironment.</a> Int J Mol Sci. 18 (7), 1398(2017).</li>
<li>Dou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+identity+of+human+limbal+heterogeneity+involved+in+corneal+homeostasis+and+privilege%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Molecular identity of human limbal heterogeneity involved in corneal homeostasis and privilege.</a> Ocul Surf. 21, 206-220 (2021).</li>
<li>Adan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry%3Abasic+principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry:basic principles and applications.</a> Crit Rev Biotechnol. 37 (2), 163-176 (2017).</li>
<li>Hwang, B., Lee, J. H., Bang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+sequencing+technologies+and+bioinformatics+pipelines%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA sequencing technologies and bioinformatics pipelines.</a> Exp Mol Med. 50 (8), 1-14 (2018).</li>
<li>Altshuler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrete+limbal+epithelial+stem+cell+populations+mediate+corneal+homeostasis+and+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Discrete limbal epithelial stem cell populations mediate corneal homeostasis and wound healing.</a> Cell Stem Cell. 28 (7), 1248-1261.e8 (2021).</li>
<li>Kaplan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+transcriptome+helps+define+the+limbal%2Fcorneal+epithelial+stem%2Fearly+transit+amplifying+cells+and+how+autophagy+affects+this+population%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA transcriptome helps define the limbal/corneal epithelial stem/early transit amplifying cells and how autophagy affects this population.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 60 (10), 3570-3583 (2019).</li>
<li>Collin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+cell+atlas+of+human+cornea+that+defines+its+development%2C+limbal+progenitor+cells+and+their+interactions+with+the+immune+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">A single cell atlas of human cornea that defines its development, limbal progenitor cells and their interactions with the immune cells.</a> Ocul Surf. 21, 279-298 (2021).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+method+for+achieving+a+single-cell+suspension+from+mouse+corneas%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Optimization of method for achieving a single-cell suspension from mouse corneas.</a> Exp Eye Res. 233, 109544(2023).</li>
<li>Espana, E. M., Birk, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition%2C+structure+and+function+of+the+corneal+stroma%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Composition, structure and function of the corneal stroma.</a> Exp Eye Res. 198, 108137(2020).</li>
<li>Topouzi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+isolation+and+3D+culture+of+dermal+papilla+cells+from+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Methods for the isolation and 3D culture of dermal papilla cells from human hair follicles.</a> Exp Dermatol. 26 (6), 491-496 (2017).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+amniotic+membrane+de-epithelialization+method+on+its+biological+properties+and+ability+to+promote+limbal+epithelial+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of amniotic membrane de-epithelialization method on its biological properties and ability to promote limbal epithelial cell culture.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (4), 3072-3081 (2013).</li>
<li>Hewett, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+endothelial+cells+from+micro-+and+macro-vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human endothelial cells from micro- and macro-vessels.</a> Methods Mol Biol. 1430, 61-76 (2016).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Existence+of+small+slow-cycling+Langerhans+cells+in+the+limbal+basal+epithelium+that+express+ABCG2%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Existence of small slow-cycling Langerhans cells in the limbal basal epithelium that express ABCG2.</a> Exp Eye Res. 84 (4), 626-634 (2007).</li>
<li>Song, Z., Tsai, C. H., Mei, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+different+methods+to+isolate+mouse+limbal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of different methods to isolate mouse limbal epithelial cells.</a> Exp Eye Res. 212, 108767(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 594 donkey anti-rabbit</td><td>Abcam</td><td>ab150064</td><td></td></tr><tr><td>Antikeratin</td><td>Abcam</td><td>ab230175</td><td></td></tr><tr><td>Anti-pancytokeratin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AE1/AE3, Alexa FluorTM 488</td><td></td></tr><tr><td>Autoclaaf sterilisator</td><td>An Shen</td><td>LDZH-100KBS</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumine V</td><td>Solarbio</td><td>A8020</td><td></td></tr><tr><td>Celfilter</td><td>NEST</td><td>258369</td><td>40 &mu;m</td></tr><tr><td>Centrifugemachine</td><td>Eppendorf AG</td><td>22331 Hamburg</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase A</td><td>Roche</td><td>10103578001</td><td></td></tr><tr><td>Confocale microscoop</td><td>&nbsp;Oberkochen</td><td>Zeiss LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>Tellplaat</td><td>MARIENFELD</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugebuis</td><td>NEST</td><td>620611</td><td>2 mL, 50mL</td></tr><tr><td>Dekglas</td><td>MARIENFELD</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Solarbio</td><td>C0065</td><td></td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Carl ZEISS</td><td>VISU150</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12&nbsp; media</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Solarbio</td><td>D8371</td><td></td></tr><tr><td>Fetaal&nbsp; bovien&nbsp; serum</td><td>Gibco</td><td>16140071</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortison</td><td>Solarbio</td><td>IH0100</td><td></td></tr><tr><td>ITS</td><td>Gibco</td><td>23337619</td><td></td></tr><tr><td>Muis epidermaal groeifactor</td><td>Invitrogen</td><td>PMG8041</td><td></td></tr><tr><td>Oogchirurgische forceps</td><td>Dumot</td><td>0208-5-PO</td><td></td></tr><tr><td>Oogchirurgische schaar</td><td>FST</td><td>15021-15</td><td></td></tr><tr><td>Oven</td><td>AISITE</td><td>DH6000 II</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline &amp;Streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15070063</td><td>100mL</td></tr><tr><td>Petrischaal</td><td>NEST</td><td>705201</td><td>60mm</td></tr><tr><td>Fosfaat gebufferde saline</td><td>Solarbio</td><td>P1010</td><td></td></tr><tr><td>Thermostaat incubator</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3111</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blauw&nbsp;</td><td>Solarbio</td><td>T8070</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin/EDTA&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>R001100</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-reinigingstafel</td><td>You Qi</td><td>VS-840-2</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldehyde</td><td>Solarbio</td><td>P1110</td><td></td></tr></tbody></table>

een protocol voor het oogsten van single-cel suspensie uit muizenhoornvliezen

A Protocol for Harvesting Single-cell Suspension from Mouse Corneas

Een protocol voor het oogsten van single-cel suspensie uit muizenhoornvliezen

As the outermost layer of the eyeball, the cornea plays a critical role in maintaining ocular surface homeostasis and vision. Recent advances in ...

a-protocol-for-harvesting-single-cell-suspension-from-mouse-corneas

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Deze video beschrijft een eenvoudige, tijdsbesparende techniek voor automatische weefsel dissociatie met behulp van de gentleMACS Dissociator naar single-cell suspensies van de muis splenocyten voor te bereiden.

Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse Spleen met de gentleMACS Dissociator

Dissociëren cellen van specifiek weefsel soorten vereist specifieke parameters voor weefsel aggitation het verkrijgen van een hoog volume van levensvatbare, kweekbare cellen. De Miltenyi gentleMACS Dissociator optimaliseert deze taak met een eenvoudige, praktische protocol. In deze publicatie het gebruik van dit apparaat op nerual weefsel wordt uitgelegd.

Generatie van de Single-celsuspensies van Mouse Neural Tissue

In deze video, zullen we laten zien hoe je netvlies stamcellen uit het ciliaire epitheel van de muis oog te isoleren en te groeien ze in cultuur tot klonale netvlies bollen te vormen. De bollen die zijn geïsoleerd beschikken over de kardinale eigenschappen van stamcellen: self-vernieuwing en multipotentiality.

Isolatie van het netvlies stamcellen van de muis Eye

This video demonstrates the culturing of Müller glial (MG) cells isolated from mouse retinas. Retinas are dissociated into a single-cell suspension using digestive enzymes. Cells are then grown in a medium with a growth factor that promotes MG cell proliferation and neuronal cell mortality. Dead neuronal cells are removed while passaging, and MG cells are grown for further analysis.

Establishing a M&#252;ller Glial Cell Culture Obtained from Mouse Retinas

This video demonstrates the procedure for isolating murine primary retinal ganglion cells (RGCs) by using flow cytometry. This method allows for the future study of RGCs, with the goal of better understanding the major decline in visual acuity that results from the loss of functional RGCs in neurodegenerative diseases.

Isolating Murine Retinal Ganglion Cells Using Fluorescence-Activated Cell Sorting

De huid is de thuisbasis van een complex netwerk van immuuncellen. We beschrijven een efficiënte methodologie voor het verteren van muizenhuid, uit verschillende delen van het lichaam van het dier, om een enkele celsuspensie te verkrijgen en de verschillende leukocytenpopulaties die in de huid aanwezig zijn te analyseren door middel van flowcytometrie.

Voorbereiding van de Single-cell Charms voor Cytofluorimetric Analyse van verschillende Mouse Skin Regio

Miljoenen mensen lijden aan retinale degeneratieve ziekten die leiden tot onomkeerbare blindheid. Een gemeenschappelijk element van veel van deze ziekten is het verlies van retinale ganglioncellen (RGC's). Dit gedetailleerde protocol beschrijft de isolatie van primaire murine RGC's door positieve en negatieve selectie met flowcytometrie.

Isolatie van Primaire Murine Retinale Ganglioncellen (RGC&#39;s) door Flow Cytometry

De retinale pigment epitheel (RPE) is een multi-functionele epitheel van het oog. Hier presenteren we een protocol om primaire celculturen afgeleid van de lymfkliertest RPE.

Primaire celculturen van de muis retinale Pigment epitheel

Het doel van dit protocol is het isoleren van epidermale keratinocyten uit de rughuid van volwassen muizen voor een verscheidenheid aan downstreamtoepassingen zoals moleculaire biologie, biochemie, fluorescentie geactiveerde celsortering en primair in vitro gebruik (bijv. clonogene keratinocyten).

Isolatie van muizen epidermale keratinocyten en hun in vitro Clonogene cultuur

Dit protocol beschrijft een methode voor de isolatie van muriene postnatale retinale endotheelcellen die zijn geoptimaliseerd voor celopbrengst, zuiverheid en levensvatbaarheid. Deze cellen zijn geschikt voor next-generation sequencing benaderingen.

Isolatie van murine retinale endotheelcellen voor next-generation sequencing

Retinaal pigmentepitheel (RPE) fungeert als een cruciale barrière tussen het vaatvlies en het netvlies en bevordert de gezondheid en functie van retinale celtypen, zoals fotoreceptoren. Hierin beschrijven we een eenvoudig en effectief protocol voor het isoleren en kweken van RPE van volwassen muizen.

Een vereenvoudigde methode voor isolatie en kweek van retinale pigmentepitheelcellen van volwassen muizen

Leer een protocol voor het oogsten van single-cel suspensies uit muizenhoornvliezen met enzymatische digestie. Deze methode levert levende cellen met hoge RNA-integriteit voor scRNA-seq en flowcytometrie.

Een protocol voor het oogsten van single-cel suspensie uit muizenhoornvliezen

Meer video's verkennen