Name: Voorbereiding en live beeldvorming van regenererende hydra-sferoïden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-20T14:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Leer hoe je regenererende Hydra-sferoïden genereert en beeldt met tijdopname-microscopie. Dit protocol toont montagetechnieken en live imaging voor het bestuderen van morfogenetische processen in ontwikkelingsbiologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Bode, P. M., Bode, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+pattern+in+regenerating+tissue+pieces+of+hydra+attenuata%3A+I.+Head-body+proportion+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Formation of pattern in regenerating tissue pieces of hydra attenuata: I. Head-body proportion regulation.</a> Dev Biol. 78 (2), 484-496 (1980).</li>
<li>Fütterer, C., Colombo, C., Jülicher, F., Ott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenetic+oscillations+during+symmetry+breaking+of+regenerating+hydra+vulgaris+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Europhys+Lett%22%5BJournal%5D)">Morphogenetic oscillations during symmetry breaking of regenerating hydra vulgaris cells.</a> Europhys Lett. 64 (1), 137(2003).</li>
<li>Weevers, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanochemical+patterning+localizes+the+organizer+of+a+luminal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Mechanochemical patterning localizes the organizer of a luminal epithelium.</a> Sci Adv. 11 (26), eadu2286(2025).</li>
<li>Oreopoulos, J., Berman, R., Browne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+9+-+Spinning-disk+confocal+microscopy%3A+present+technology+and+future+trends%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 9 - Spinning-disk confocal microscopy: present technology and future trends.</a> Meth Cell Biol. 123, 153-175 (2014).</li>
<li>Stelzer, E. H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+sheet+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Meth+Primers%22%5BJournal%5D)">Light sheet fluorescence microscopy.</a> Nat Rev Meth Primers. 1 (1), 73(2021).</li>
<li>Moos, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open-top+multisample+dual-view+light-sheet+microscope+for+live+imaging+of+large+multicellular+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Meth%22%5BJournal%5D)">Open-top multisample dual-view light-sheet microscope for live imaging of large multicellular systems.</a> Nat Meth. 21 (5), 798-803 (2024).</li>
<li>Soriano, J., Colombo, C., Ott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydra+molecular+network+reaches+criticality+at+the+symmetry-breaking+axis-defining+moment%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Rev+Lett%22%5BJournal%5D)">Hydra molecular network reaches criticality at the symmetry-breaking axis-defining moment.</a> Phys Rev Lett. 97 (25), 258102(2006).</li>
<li>Livshits, A., Shani-Zerbib, L., Maroudas-Sacks, Y., Braun, E., Keren, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+inheritance+of+the+actin+cytoskeletal+organization+determines+the+body+axis+in+regenerating+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Structural inheritance of the actin cytoskeletal organization determines the body axis in regenerating hydra.</a> Cell Rep. 18 (6), 1410-1421 (2017).</li>
<li>Hanson, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+monitoring+of+neural+activity+with+single-cell+resolution+in+behaving+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Sc+Rep%22%5BJournal%5D)">Automatic monitoring of neural activity with single-cell resolution in behaving hydra.</a> Sc Rep. 14 (1), 5083(2024).</li>
<li>Escobar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Terminal+differentiation+precedes+functional+circuit+integration+in+the+peduncle+neurons+in+regenerating+hydra+vulgaris%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">Terminal differentiation precedes functional circuit integration in the peduncle neurons in regenerating hydra vulgaris.</a> Neural Dev. 19 (1), 18(2024).</li>
<li>Ferenc, J., Tsiairis, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+Mechanical+Oscillations+During+Whole-Body+Regeneration+in+Hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Whole-Body+Regenerat%22%5BJournal%5D)">Studying Mechanical Oscillations During Whole-Body Regeneration in Hydra.</a> Whole-Body Regenerat. 2450, 619-633 (2022).</li>
<li>Bossert, P., Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+use+hydra+as+a+model+system+to+teach+biology+in+the+classroom%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">How to use hydra as a model system to teach biology in the classroom.</a> Int J Dev Biol. 56 (6-8), 637-652 (2012).</li>
<li>Jemielita, M., Taormina, M. J., Delaurier, A., Kimmel, C. B., Parthasarathy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+phototoxicity+during+the+development+of+a+zebrafish+craniofacial+bone+using+confocal+and+light+sheet+fluorescence+microscopy+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Comparing phototoxicity during the development of a zebrafish craniofacial bone using confocal and light sheet fluorescence microscopy techniques.</a> J Biophotonics. 6 (11-12), 920-928 (2013).</li>
<li>Icha, J., Weber, M., Waters, J. C., Norden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phototoxicity+in+live+fluorescence+microscopy%2C+and+how+to+avoid+it%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">Phototoxicity in live fluorescence microscopy, and how to avoid it.</a> Bioessays. 39 (8), 1700003(2017).</li>
<li>Ravichandran, Y., Vogg, M., Kruse, K., Pearce, D. J. G., Roux, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topology+changes+of+hydra+define+actin+orientation+defects+as+organizers+of+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Topology changes of hydra define actin orientation defects as organizers of morphogenesis.</a> Sci Adv. 11 (3), eadr9855(2025).</li>
<li>Maroudas-Sacks, Y., Garion, L., Suganthan, S., Popović, M., Keren, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confinement+modulates+axial+patterning+in+regenerating+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22PRX+Life%22%5BJournal%5D)">Confinement modulates axial patterning in regenerating hydra.</a> PRX Life. 2 (4), 043007(2024).</li>
<li>Bailles, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisotropic+stretch+biases+the+self-organization+of+actin+fibers+in+multicellular+hydra+aggregates%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Anisotropic stretch biases the self-organization of actin fibers in multicellular hydra aggregates.</a> Proc Natl Acad Sci. 122 (32), e2423437122(2025).</li>
<li>Luu, P., Fraser, S. E., Schneider, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((More+than+double+the+fun+with+two-photon+excitation+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Comm+Biol%22%5BJournal%5D)">More than double the fun with two-photon excitation microscopy.</a> Comm Biol. 7 (1), 364(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>20&times;/0.8 Plan-Apochromat objectief</td><td>Zeiss</td><td>440640-9903-000</td><td>Voor spinning disk confocale microscopie</td></tr><tr><td>20x/1.0 W Plan-Apochromat water dompelobjectief</td><td>Zeiss</td><td>421452-9700-000</td><td>Gebruikt als detectieobjectief in de Zeiss Lightsheet 7</td></tr><tr><td>3D-geprinte houder voor FEP-kamerbevestiging</td><td></td><td></td><td>op maat gemaakt</td></tr><tr><td>4-well glazen bodem beeldplaat (#1.5H)</td><td>Ibidi</td><td>80427</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Carl Roth</td><td>3810.4</td><td></td></tr><tr><td>Aluminium mal voor FEP-kamer</td><td></td><td></td><td>op maat gemaakt</td></tr><tr><td>Calciumchloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Ingeblikte lucht</td><td>Durable</td><td>POWERCLEAN STANDARD 400</td><td></td></tr><tr><td>Celcultuurplaat (6 cm)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>150288</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8769</td><td></td></tr><tr><td>FEP folie (127 &mu;m dikte)</td><td>Adtech Polymer Engineering</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FluoSpheres carboxylaat-gemodificeerd (0.2 &mu;m, donker rood)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F8807</td><td></td></tr><tr><td>Glazen capillair</td><td>Brand</td><td>701904</td><td></td></tr><tr><td>Glazen Pasteur pipet (150 mm)</td><td>VWR</td><td>612-1701</td><td></td></tr><tr><td>Hydra vulgaris</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Beeldvormingssoftware</td><td>Visitron</td><td>VisiView</td><td>Voor spinning disk confocale microscopie</td></tr><tr><td>Omgekeerd lichtmicroscoop</td><td>Zeiss</td><td>Axio observer 7</td><td>Voor spinning disk confocale microscopie</td></tr><tr><td>Lichtbladmicroscoop</td><td>Leica</td><td>Viventis Deep LS2</td><td></td></tr><tr><td>Lichtbladmicroscoop</td><td>Zeiss</td><td>Lightsheet 7</td><td></td></tr><tr><td>Laag smeltpunt Agarose</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R0801</td><td></td></tr><tr><td>Magnesiumchloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>Magnesiumsulfaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2643</td><td></td></tr><tr><td>Microscalpel</td><td>pfm medical</td><td>200300745</td><td></td></tr><tr><td>Pipetbalg</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zuigerstang transferpettor</td><td>Brand</td><td>701932</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumchloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Veiligheid Bunsen-brander</td><td>INTEGRA Biosciences</td><td>FIREBOY plus</td><td></td></tr><tr><td>sCMOS camera's</td><td>Photometrics</td><td>Prime 95B</td><td>Voor spinning disk confocale microscopie</td></tr><tr><td>Natriumbicarbonaat</td><td>Fluka Analytical, Sigma-Aldrich</td><td>71630</td><td></td></tr><tr><td>Natriumcitraat dihydraat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W302600</td><td></td></tr><tr><td>Natriumpyruvaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>Spinning disk confocale scaneenheid (50 &mu;m pinholes)</td><td>Yokogawa</td><td>CSU-W1</td><td>Voor spinning disk confocale microscopie</td></tr><tr><td>Stereoscoop</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>TES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1375</td><td></td></tr><tr><td>Thermoformer</td><td>Yuyao Jintai Machine Factory</td><td>Jintai JT-18</td><td></td></tr><tr><td>Weefselkweekschaal (10 cm)</td><td>VWR</td><td>734-2321</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl buffer</td><td>Roche Diagnostics</td><td>10812846001</td><td></td></tr></tbody></table>

voorbereiding en live beeldvorming van regenererende hydra-sferoïden

Preparation and Live Imaging of Regenerating Hydra Spheroids

Voorbereiding en live beeldvorming van regenererende hydra-sferoïden

Hydra is renowned for its exceptional regenerative capacity. Remarkably, small regenerating fragments of Hydra tissue, called Hydra spheroids, can ...

preparation-and-live-imaging-of-regenerating-hydra-spheroids

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

This video demonstrates a technique to establish a three-dimensional culture of glial cells. Rat-brain-derived glial cells are encapsulated within a photocrosslinkable polymer matrix containing extracellular matrix components. Upon incubating in a growth medium, the glial cells proliferate within the supporting matrix to create a three-dimensional culture.

Establishing a Three-Dimensional Culture of Rat Brain-Derived Glial Cells

Stabel transgenetische Hydra worden gemaakt door micro-injectie van plasmide DNA in embryo's, gevolgd door willekeurige genomische integratie en aseksuele voortplanting om een uniforme lijn te vestigen. Transgenetische Hydra worden gebruikt om celbewegingen te volgen, genen overexpresseren, promotorfunctie te bestuderen, of genexpressie te onderdrukken met behulp van RNAi.

Generatie van transgene Hydra Door Embryo Microinjection

Hier beschrijven we een methode voor het genereren van driedimensionale sferoïde culturen van menselijke nasale epitheliale cellen. Spheroïden worden dan gestimuleerd naar station Cystic Fibrosis Transmembrane huidgeleiding Regulator (CFTR)-afhankelijk van de ion en vloeistof secretie, kwantificeren van de verandering in de sferoïde luminal grootte als een proxy voor CFTR-functie.

Generatie van menselijke nasale epitheliale cel spheroïden voor geïndividualiseerde Cystic Fibrosis Transmembrane huidgeleiding Regulator studie

Driedimensionaal co-Culture spheroid-systeem voor angiogenese is ontworpen om de fysiologische angiogenese na te bootsen. Co-Culture sferoïden worden gevormd door twee humane vasculaire celprecursoren, ecfcs en MSCS, en ingebed in collageen gel. Het nieuwe systeem is effectief voor het evalueren van angiogene modulatoren en verschaft relevantere informatie aan de in vivo studie.

Driedimensionaal angiogenese-assay systeem met co-Culture Spheroids gevormd door endotheliale kolonie vormende cellen en mesenchymale stamcellen

Extracellulaire matrix liganden kunnen worden Gedessineerd op polyacrylamidehydrogels om de cultuur van menselijke embryonale stamcellen in kleine kolonies op conforme ondergronden mogelijk te maken. Deze methode kan worden gecombineerd met tractiekracht microscopie en biochemische testen om de wisselwerking tussen weefsel geometrie, door cellen gegenereerde krachten en de specificatie van het lot te onderzoeken.

Patroon van de geometrie van menselijke embryonale stamcel kolonies op conforme ondergronden om de mechanismen van Weefselniveau te beheersen

Müller glia primaire culturen verkregen uit het netvlies van muizen vormen een zeer robuust en betrouwbaar hulpmiddel om de gliale omzetting in retinale voorlopercellen na microRNA-behandeling te bestuderen. Afzonderlijke moleculen of combinaties kunnen worden getest voordat ze vervolgens in vivo worden toegepast.

Primaire celculturen om het regeneratiepotentieel van Murine Müller Glia na microRNA-behandeling te bestuderen

De huidige studie beschrijft methodologieën voor het kweken, bevriezen, ontdooien, verwerken, kleuren, labelen en onderzoeken van volledige sferoïden en organoïden onder verschillende microscopen, terwijl ze intact blijven in een hydrogel in een multifunctioneel apparaat.

Kweken, invriezen, verwerken en afbeelden van volledige organoïden en sferoïden terwijl ze nog in een hydrogel zitten

Hier presenteren we een protocol dat snelle, robuuste en goedkope fabricage van tumorsferoïden mogelijk maakt, gevolgd door hydrogel-inkapseling. Het is breed toepasbaar omdat er geen gespecialiseerde apparatuur voor nodig is. Het zou met name nuttig zijn voor het onderzoeken van sferoïde-matrixinteracties en het bouwen van in vitro weefselfysiologische of pathologiemodellen.

Fabricage en inkapseling van tumorsferoïden in polyethyleenglycolhydrogels voor het bestuderen van sferoïde-matrixinteracties

Hier beschrijven we verschillende methoden voor de vorming van meercellige sferoïden om follow-up multi-parameter live celmicroscopie uit te voeren. Met behulp van fluorescentie lifetime imaging microscopie (FLIM), cellulaire autofluorescentie, kleuringskleurstoffen en nanodeeltjes wordt de benadering voor analyse van celmetabolisme, hypoxie en celdood in levende driedimensionale (3D) kanker en van stamcellen afgeleide sferoïden gedemonstreerd.

Productie en multi-parameter live cell fluorescentie lifetime imaging microscopie (FLIM) van meercellige sferoïden

Deze studie presenteert de tweedimensionale (2D) kraswondmigratietest en de driedimensionale (3D) sferoïde kiemtest, samen met hun respectievelijke stroomafwaartse analysemethoden, waaronder RNA-extractie en immunocytochemie, als geschikte tests om angiogenese in vitro te bestuderen.

Onderzoek naar angiogenese op functioneel en moleculair niveau door gebruik te maken van de Scratch Wound Migration Assay en de Spheroid Sprouting Assay

We presenteren een 3D-glioblastoommigratiemodel met behulp van door patiënten afgeleide magnetische gliomasferen, gegenereerd uit nieuw gediagnosticeerde en terugkerende tumoren. Dit platform maakt het mogelijk om patiëntspecifieke migratiedynamiek te visualiseren en de therapeutische effectiviteit te beoordelen. De assay kan na migratie worden gemultiplexed om eiwitlokalisatie en expressiepatronen te evalueren.

Reproducerbare 3D glioblastoom migratietest met magnetische nanodeeltjesgemedieerde sferoidlokalisatie onder hypoxische omstandigheden

Leer hoe je regenererende Hydra-sferoïden genereert en beeldt met tijdopname-microscopie. Dit protocol toont montagetechnieken en live imaging voor het bestuderen van morfogenetische processen in ontwikkelingsbiologie.

Voorbereiding en live beeldvorming van regenererende hydra-sferoïden

Meer video's verkennen