Name: Colorimetrische beoordeling van deiodinase 1-activiteit in menselijke levermicrosomen met behulp van de Sandell-Kolthoff-reactie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T13:05:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Leer een colorimetrische beoordeling van deiodinase 1-activiteit in menselijke levermicrosomen met de Sandell-Kolthoff-reactie. Deze methode identificeert stoffen die de schildklierhormoonhomeostase verstoren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kabir, E. R., Rahman, M. S., Rahman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+endocrine+disruptors+and+their+possible+impacts+on+human+health%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A review on endocrine disruptors and their possible impacts on human health.</a> Environ Toxicol Pharmacol. 40 (1), 241-258 (2015).</li>
<li>Yue, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+exposure+to+a+mixture+of+endocrine+disruptors+and+serum+levels+of+thyroid+hormones%3A+a+cross-sectional+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Environ+Sci%22%5BJournal%5D)">Human exposure to a mixture of endocrine disruptors and serum levels of thyroid hormones: a cross-sectional study.</a> J Environ Sci. 125, 641-649 (2023).</li>
<li>Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+deiodinase+family%3A+selenoenzymes+regulating+thyroid+hormone+availability+and+action%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The deiodinase family: selenoenzymes regulating thyroid hormone availability and action.</a> Cell Mol Life Sci. 57 (13), 1853-1863 (2000).</li>
<li>Zhang, J., Lazar, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+action+of+thyroid+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">The mechanism of action of thyroid hormones.</a> Annu Rev Physiol. 62 (1), 439-466 (2000).</li>
<li>França, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+type+1+iodothyronine+deiodinase+%28DIO1%29+mutations+cause+abnormal+thyroid+hormone+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Human type 1 iodothyronine deiodinase (DIO1) mutations cause abnormal thyroid hormone metabolism.</a> Thyroid. 31 (2), 202-207 (2020).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+predictivity+of+the+DIO1-SK+assay+to+investigate+DIO1+inhibition+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the predictivity of the DIO1-SK assay to investigate DIO1 inhibition in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 9 (2), 44-59 (2023).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+method+to+study+thyroid+hormone+disruption%3A+optimization+and+standardization+of+an+assay+to+assess+the+inhibition+of+DIO1+enzyme+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A new approach method to study thyroid hormone disruption: optimization and standardization of an assay to assess the inhibition of DIO1 enzyme in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 8 (3), 67-82 (2022).</li>
<li>Renko, K., Hoefig, C. S., Hiller, F., Schomburg, L., Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+iopanoic+acid+as+substrate+of+type+1+deiodinase+by+a+novel+nonradioactive+iodide-release+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Identification of iopanoic acid as substrate of type 1 deiodinase by a novel nonradioactive iodide-release assay.</a> Endocrinology. 153 (5), 2506-2513 (2012).</li>
<li>Renko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+nonradioactive+screening+method+identifies+genistein+and+xanthohumol+as+potent+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">An improved nonradioactive screening method identifies genistein and xanthohumol as potent inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Thyroid. 25 (8), 962-968 (2015).</li>
<li>Olker, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+the+ToxCast+phase+1%2C+phase+2%2C+and+e1k+chemical+libraries+for+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Screening the ToxCast phase 1, phase 2, and e1k chemical libraries for inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Toxicol Sci. 168 (2), 430-442 (2019).</li>
<li>Sane, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+highly+potent+and+isoenzyme-selective+inhibitors+of+deiodinase+type+I+via+a+nonradioactive+high-throughput+screening+method%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of highly potent and isoenzyme-selective inhibitors of deiodinase type I via a nonradioactive high-throughput screening method.</a> Thyroid. 35 (5), 576-589 (2025).</li>
<li>Visser, T. J., Van Overmeeren, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Binding+of+radioiodinated+propylthiouracil+to+rat+liver+microsomal+fractions%3A+stimulation+by+substrates+for+iodothyronine+5%E2%80%B2-deiodinase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Binding of radioiodinated propylthiouracil to rat liver microsomal fractions: stimulation by substrates for iodothyronine 5′-deiodinase.</a> Biochem J. 183 (1), 167-169 (1979).</li>
<li>Hindrichs, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+fast+online+SPE-LC-MS%2FMS+method+to+quantify+thyroid+hormone+metabolites+in+rat+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Res+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A novel and fast online SPE-LC-MS/MS method to quantify thyroid hormone metabolites in rat plasma.</a> Chem Res Toxicol. 37 (1), 33-41 (2024).</li>
<li>Kolthoff, I. M., Sandell, E. B., Lingane, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+persulfate-arsenite+method+for+manganese%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">A modified persulfate-arsenite method for manganese.</a> Anal Chem. 8 (1), 73-73 (1936).</li>
<li>Stefanidis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+robustness+and+accuracy+of+the+deiodinase+1+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay%3A+a+comparative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the robustness and accuracy of the deiodinase 1 Sandell–Kolthoff assay: a comparative analysis.</a> Appl Vitro Toxicol. 10 (4), 80-90 (2024).</li>
<li>Satya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidance+document+on+standardised+test+guidelines+for+evaluating+chemicals+for+endocrine+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22OECD+Environ+Health+Saf+Publ%22%5BJournal%5D)">Guidance document on standardised test guidelines for evaluating chemicals for endocrine disruption.</a> OECD Environ Health Saf Publ. 150, (2012).</li>
<li>Joseph, O., Eberle, M., Lieberman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolites+in+urine+that+interfere+with+the+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay+for+urinary+iodine%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Trace+Elem+Res%22%5BJournal%5D)">Metabolites in urine that interfere with the Sandell–Kolthoff assay for urinary iodine.</a> Biol Trace Elem Res. 202 (2), 466-472 (2024).</li>
<li>May, W., Wu, D., Eastman, C., Bourdoux, P., Maberly, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+automated+urinary+iodine+methods%3A+problems+of+interfering+substances+identified%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Evaluation of automated urinary iodine methods: problems of interfering substances identified.</a> Clin Chem. 36 (6), 865-869 (1990).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Thio-&beta;-D-glucose sodium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6375-1G</td><td>CAS 10593-29-0</td></tr><tr><td>3,3&rsquo;,5&rsquo;-triiodothyronine (rT3)&nbsp;</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-209692</td><td>CAS 5817-39-0</td></tr><tr><td>6-Propyl-2-thiouracil (6PTU)</td><td>Supelco</td><td>P3755-10G</td><td>CAS 51-52-5</td></tr><tr><td>Azijnzuur</td><td>Thermo Fisher</td><td>9526-33</td><td>CAS 64-19-7</td></tr><tr><td>Analytische weegschaal</td><td>NA</td><td>NA</td><td>in staat om nauwkeurig te wegen tot 30 g met 0,1 mg leesbaarheid</td></tr><tr><td>Arseen natriumoxide (NaAsO2)</td><td>Thermo Fisher</td><td>041533.AP</td><td>CAS 7784-46-5</td></tr><tr><td>Testplaten (96-well formaat)</td><td>Merck</td><td>Z707902-108EA</td><td>bijv. weefselkweek platen, 96-well plate, platte bodem, polystyreen, 0,34 cm2, steriele, 108/cs, TPP</td></tr><tr><td>Aurothioglucose (ATG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0606-5MG</td><td>CAS 12192-57-3</td></tr><tr><td>Centrifugebuizen 15 en 50&nbsp;mL</td><td>Merck</td><td>Z707724-800EA, Z707716-320EA</td><td>bijv. TPP centrifugebuizen, volume 15 en 50 mL, polypropyleen,&nbsp;</td></tr><tr><td>Centrifuge met uitklapbare rotor voor microtiter platen</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Moet hoog genoeg zijn om een 96-deep well plate met 96-well filter plate erop te passen (minstens ongeveer 6 cm hoog)</td></tr><tr><td>Cerium (IV) ammoniumsulfaat (Ce(NH4)4(SO4)4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22269-100G-F</td><td>CAS 10378-47-9</td></tr><tr><td>CO2 Incubator</td><td>NA</td><td>NA</td><td>in staat om temperaturen van 37&deg;C, 5% CO2 en &ge;90% luchtvochtigheid te handhaven</td></tr><tr><td>Deep well platen (96-well formaat)</td><td>Supelco</td><td>575653-U</td><td>bijv. SPE 96-Deep Square Well Collection Plate, well volume 2 mL, polypropyleen</td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxide (DMSO)</td><td>AppliChem</td><td>A3672,0250</td><td>CAS 67-68-5</td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779-1G</td><td>CAS 3483-12-3</td></tr><tr><td>Ethyleendiaminetetraazijnzuur (EDTA)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>APO456787707-500G</td><td>CAS 6381-92-6</td></tr><tr><td>Filter platen (96-well formaat)</td><td>Merck</td><td>WHA77002810</td><td>bijv. Micro-Plates, 96-well, helder polystyreen, 800 &micro;L, DNA Binding, Whatman</td></tr><tr><td>Gasdicht afdichtende platen</td><td>Thermo Fisher</td><td>232698</td><td>bijv. Afdichtingstape, polyester, steriele, Sealing tape, polyester, steriele, Nunc</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Pan Biotech</td><td>P05-01100</td><td>CAS 7365-45-9</td></tr><tr><td>Menselijke lever microsomen</td><td>Biovit</td><td>X008070</td><td>bijv. INVITROCYP 150-Donor Pooled Human Liver Liver Microsomes</td></tr><tr><td>Jodide (IC standaard)</td><td>Supelco</td><td>41271-100ML</td><td>bijv. Jodide standaard voor IC, 1000 mg/L in water, Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>Ionenwisselaarhars zoals Dowex 50WX2</td><td>Roth</td><td>334.4</td><td>CAS 12612-37-2; Mesh 100-200</td></tr><tr><td>Microcentrifugebuizen 1,5&nbsp;mL</td><td>Merck</td><td>EP0030120086-1PAK</td><td>bijv. Eppendorf&reg; Safe-Lock microcentrifugebuizen, volume 1,5 mL, natuurlijk</td></tr><tr><td>Multikanaals dispenser in staat om 50 tot 300&nbsp;&micro;L per stap te leveren</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Multikanaals pipet in staat om 10 tot 100&nbsp;&micro;L per stap te leveren</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>pH meter met elektrode en kalibratie buffers</td><td>NA</td><td>NA</td><td>in staat om +/- 0,1 pH eenheden te lezen</td></tr><tr><td>Fotometer voor absorptiemeting</td><td>Tecan Trading AG</td><td>NA</td><td>bijv. Sunrise Absorbance Reader, INSTSUN-3</td></tr><tr><td>Pipetten in staat om 1 tot 10&nbsp;&micro;L te leveren</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipetten in staat om 10 tot 100&nbsp;&micro;L te leveren</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipetten in staat om 100 tot 1000&nbsp;&micro;L te leveren</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipetten voor hogere volumes</td><td>NA</td><td>NA</td><td>serologische pipetten, bijv. 10, 25, 50 mL</td></tr><tr><td>Plate shaker</td><td>Thermo Fisher</td><td>NA</td><td>bijv. Thermo Scientific H+P MONOSHAKE VORTEXER microtiter plate, direct bediend</td></tr><tr><td>Repeaterpipet</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Natriumchloride (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888-25G</td><td>CAS: 7647-14-5, bijv. natriumchloride, ACS reagent, &ge;99,0 %</td></tr><tr><td>Statistiek software</td><td>NA</td><td>NA</td><td>In staat om regressieanalyse uit te voeren die de testkenmerken weerspiegelen en in staat om remmingsconcentraties te berekenen, bijv. GraphPad Prims 8, GraphPad</td></tr><tr><td>Zwavelzuur (H2SO4)&nbsp;</td><td>Supelco</td><td>1007311000</td><td>CAS 7664-93-9</td></tr><tr><td>Volumetrische kolf</td><td>NA</td><td>NA</td><td>gecertificeerd met gedefinieerd volume</td></tr></tbody></table>

colorimetrische beoordeling van deiodinase 1-activiteit in menselijke levermicrosomen met behulp van de sandell-kolthoff-reactie

Colorimetric Assessment of Deiodinase 1 Activity in Human Liver Microsomes Using the Sandell-Kolthoff Reaction

Colorimetrische beoordeling van deiodinase 1-activiteit in menselijke levermicrosomen met behulp van de Sandell-Kolthoff-reactie

This method enables the identification of test substances that inhibit DIO1 activity and may thus interfere with thyroid hormone homeostasis. The protocol ...

colorimetric-assessment-deiodinase-1-activity-human-liver-microsomes

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

De activiteit van de induceerbare lysine decarboxylase wordt gecontroleerd door de reactie van het substraat L-lysine en het product cadaverine met 2,4,6-trinitrobenzensulfonic zuur te adducten dat differentiële oplosbaarheid hebben in tolueen vorm.

Een test voor het meten van de activiteit van de Escherichia coli Induceerbare Lysine Decarboxyase

In this video, we describe a colorimetric-based method to determine non-heme iron content in mouse liver tissue. Bathophenanthroline sulfonate is used as the chromogenic substrate in the presence of a reducing agent, which converts ferric iron to chelatable ferrous iron.

Bathophenanthroline Sulfonate-Based Colorimetric Assay: A Simple and Rapid Method for Quantitation of Non-Heme Iron in Mouse Liver Tissue

In dit artikel wordt een microscopie-werkstroom voor hoge inhoud voor gelijktijdige kwantificering van intracellulaire ROS-niveaus aangeboden, evenals mitochondriale membraanpotentiaal en morfologie - gezamenlijk aangeduid als mitochondriale morfofunctie - in levend aanhechtende cellen met behulp van de celdoorlatende fluorescerende reportermoleculen 5- (en- 6) -chloormethyl-2 ', 7'-dichloordihydrofluoresceendiacetaat, acetylester (CM-H2 DCFDA) en tetramethylrhodamine methylester (TMRM).

Cellular Redox Profiling Met High-Content Microscopy

Metabole competentie van in vitro systemen is een belangrijke voorwaarde voor de biotransformatie en dispositie van drugs en toxische stoffen. In dit protocol beschrijven we de toepassing van referentie- metabole probes fase I metabolisme in celkweken beoordelen.

Massaspectrometrie en luminogene gebaseerde benaderingen voor karakteriseren Fase I Metabolic competentie van<em&gt; In Vitro</em&gt; Cell Cultures

Hier presenteren we een protocol dat kan worden gebruikt om microscopisch visualiseren en kwantificeren van de activiteit van dehydrogenases in cellen en weefsels en kinetiek, functie en subcellular localisatie.

Metabole Mapping: Kwantitatieve enzym cytochemie en histochemie te bepalen van de activiteit van Dehydrogenases in cellen en weefsels

We beschrijven een protocol voor het toewijzen van de ruimtelijke spreiding van enzymatische activiteit voor enzymen die nicotinatmide adenine dinucleotide-fosfaat (NAD(P)H) + H + rechtstreeks in weefselmonsters genereren.

Toewijzing metabolisme: Bewakingsactiviteit lactaat Dehydrogenase rechtstreeks in weefsel

Hier is een eenvoudig en goed gevalideerde protocol voor het meten van de bulk autophagic sekwester activiteit in zoogdiercellen wordt beschreven. De methode is gebaseerd op het kwantificeren van het aandeel van lactaat dehydrogenase (LDH) in sedimentable cel breuken in vergelijking met de totale cellulaire LDH niveaus.

De lactaat Dehydrogenase Sequestration test — Een eenvoudige en betrouwbare methode om te bepalen van de Bulk Autophagic Sequestration activiteit in zoogdiercellen

Hier wordt een protocol voor het meten van het niet-heemijzergehalte in dierlijke weefsels verstrekt, met behulp van een eenvoudige, gevestigde colorimetrische test die gemakkelijk in de meeste laboratoria kan worden geïmplementeerd.

Meting van weefsel non-heem ijzergehalte met behulp van een bathofenanthroline-gebaseerde colorimetrische assay

Meercellige 3D-tumorsferoïden werden bereid met longadenocarcinoomcellen, fibroblasten en monocyten, gevolgd door de isolatie van kanker-geassocieerde fibroblasten (CAFs) uit deze sferoïden. Geïsoleerde CAFs werden vergeleken met normale fibroblasten om de mitochondriale gezondheid te beoordelen door het mitochondriale transmembraanpotentieel, reactieve zuurstofsoorten en enzymatische activiteiten te bestuderen.

Beoordeling van mitochondriale gezondheid in kankergeassocieerde fibroblasten geïsoleerd uit 3D meercellige longtumorenferoïden

Hier presenteren we een compilatie van testen om de mitochondriale functie in zoogdiercellen direct te meten, onafhankelijk van hun vermogen om moleculaire zuurstof te consumeren.

Zuurstofonafhankelijke assays om de mitochondriale functie bij zoogdieren te meten

Dit protocol beschrijft een nieuwe methode om intracellulaire reactieve zuurstofsoorten (ROS) te kwantificeren met behulp van dihydroethidium (DHE) als fluorescentiekleurstofsonde met behulp van een high-throughput screeningbenadering. Het protocol beschrijft de methoden voor kwantitatieve beoordeling van intracellulaire reactieve zuurstofsoorten (ROS) in de drie verschillende hepatocellulaire carcinoomcellijnen.

High Throughput Screening Assessment van het genereren van reactieve zuurstofsoorten (ROS) met behulp van dihydroethidium (DHE) fluorescentiekleurstof

Leer een colorimetrische beoordeling van deiodinase 1-activiteit in menselijke levermicrosomen met de Sandell-Kolthoff-reactie. Deze methode identificeert stoffen die de schildklierhormoonhomeostase verstoren.

Colorimetrische beoordeling van deiodinase 1-activiteit in menselijke levermicrosomen met behulp van de Sandell-Kolthoff-reactie (Video) | JoVE Journal

Colorimetrische beoordeling van deiodinase 1-activiteit in menselijke levermicrosomen met behulp van de Sandell-Kolthoff-reactie

Meer video's verkennen