Name: Een techniek voor het stabiliseren van membraaneiwitten in nanodiscs (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-30T13:20:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Leer een protocol voor het stabiliseren van membraaneiwitten in nanodiscs met behulp van membraanscaffold-eiwitten en fosfolipiden. Deze methode verbetert de stabiliteit en homogeniteit van eiwitten voor cryo-EM-structuuranalyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Rask-Andersen, M., Almén, M. S., Schiöth, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+the+exploitation+of+novel+drug+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Trends in the exploitation of novel drug targets.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 10 (8), 579-590 (2011).</li>
<li>Cheng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-particle+cryo-EM-How+did+it+get+here+and+where+will+it+go%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Single-particle cryo-EM-How did it get here and where will it go.</a> Science. 361 (6405), 876-880 (2018).</li>
<li>Dodd, R., Schofield, D. J., Wilkinson, T., Britton, Z. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+therapeutic+monoclonal+antibodies+to+complex+multi-spanning+membrane+targets%3A+overcoming+the+antigen+challenge+and+enabling+discovery+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Generating therapeutic monoclonal antibodies to complex multi-spanning membrane targets: overcoming the antigen challenge and enabling discovery strategies.</a> Methods. 180, 111-126 (2020).</li>
<li>Hutchings, C. J., Colussi, P., Clark, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+channels+as+therapeutic+antibody+targets%5BTitle%5D)+AND+%22MAbs%22%5BJournal%5D)">Ion channels as therapeutic antibody targets.</a> MAbs. 11 (2), 265-296 (2019).</li>
<li>Kotov, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+stability+screening+for+detergent-solubilized+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">High-throughput stability screening for detergent-solubilized membrane proteins.</a> Sci. Rep. 9 (1), 10379(2019).</li>
<li>Barrera, N. P., Zhou, M., Robinson, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+lipids+in+defining+membrane+protein+interactions%3A+insights+from+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The role of lipids in defining membrane protein interactions: insights from mass spectrometry.</a> Trends Cell Biol. 23 (1), 1-8 (2013).</li>
<li>Bayburt, T., Grinkova, Y., Sligar, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembly+of+discoidal+phospholipid+bilayer+nanoparticles+with+membrane+scaffold+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Self-assembly of discoidal phospholipid bilayer nanoparticles with membrane scaffold proteins.</a> Nano Lett. 2 (8), 853-856 (2002).</li>
<li>Carlson, J. W., Jonas, A., Sligar, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+and+manipulation+of+high-density+lipoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Imaging and manipulation of high-density lipoproteins.</a> Biophys. J. 73 (3), 1184-1189 (1997).</li>
<li>Bayburt, T. H., Sligar, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembly+of+single+integral+membrane+proteins+into+soluble+nanoscale+phospholipid+bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Self-assembly of single integral membrane proteins into soluble nanoscale phospholipid bilayers.</a> Protein Sci. 12 (11), 2476-2481 (2003).</li>
<li>Vinogradova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanodiscs+and+solution+nuclear+magnetic+resonance%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Struct.+Biol%22%5BJournal%5D)">Nanodiscs and solution nuclear magnetic resonance.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 93, 103067(2025).</li>
<li>Popot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphipols%2C+nanodiscs%2C+and+fluorinated+surfactants%3A+three+nonconventional+approaches+to+studying+membrane+proteins+in+aqueous+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Amphipols, nanodiscs, and fluorinated surfactants: three nonconventional approaches to studying membrane proteins in aqueous solutions.</a> Annu. Rev. Biochem. 79, 737-775 (2010).</li>
<li>Li, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detergents+and+alternatives+in+cryo-EM+studies+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochim.+Biophys.+Sin%22%5BJournal%5D)">Detergents and alternatives in cryo-EM studies of membrane proteins.</a> Acta Biochim. Biophys. Sin. 54 (8), 1049-1056 (2022).</li>
<li>Vilela, F., Sauvanet, C., Bezault, A., Volkmann, N., Hanein, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+transmembrane+protein+assemblies+in+nanodiscs+for+structural+studies%3A+a+comprehensive+manual%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Optimizing transmembrane protein assemblies in nanodiscs for structural studies: a comprehensive manual.</a> Bio Protoc. 14 (21), e5099(2024).</li>
<li>Efremov, R. G., Gatsogiannis, C., Raunser, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+nanodiscs+as+a+tool+for+high-resolution+structure+determination+of+membrane+proteins+by+single-particle+cryo-EM%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Lipid nanodiscs as a tool for high-resolution structure determination of membrane proteins by single-particle cryo-EM.</a> Methods Enzymol. 594, 1-30 (2017).</li>
<li>Grant, A. J., Schmidt-Krey, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanodisc-reconstitution+for+single+particle+cryo-EM+structure+determination+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Struct.+Biol%22%5BJournal%5D)">Nanodisc-reconstitution for single particle cryo-EM structure determination of membrane proteins.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 93, 103072(2025).</li>
<li>Yokogawa, M., Fukuda, M., Osawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanodiscs+for+structural+biology+in+a+membranous+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Pharm.+Bull%22%5BJournal%5D)">Nanodiscs for structural biology in a membranous environment.</a> Chem. Pharm. Bull. 67 (4), 321-326 (2019).</li>
<li>Denisov, I. G., Sligar, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanodiscs+for+structural+and+functional+studies+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Struct.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Nanodiscs for structural and functional studies of membrane proteins.</a> Nat. Struct. Mol. Biol. 23 (6), 481-486 (2016).</li>
<li>Enyedi, P., Czirják, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+background+of+leak+K%2B+currents%3A+two-pore+domain+potassium+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Molecular background of leak K+ currents: two-pore domain potassium channels.</a> Physiol. Rev. 90 (2), 559-605 (2010).</li>
<li>Reyes, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+expression+of+a+novel+pH-sensitive+two+pore+domain+K%2B+channel+from+human+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Cloning and expression of a novel pH-sensitive two pore domain K+ channel from human kidney.</a> J. Biol. Chem. 273 (47), 30863-30869 (1998).</li>
<li>Notti, R. Q., Walz, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native-like+environments+afford+novel+mechanistic+insights+into+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem.+Sci%22%5BJournal%5D)">Native-like environments afford novel mechanistic insights into membrane proteins.</a> Trends Biochem. Sci. 47 (7), 561-569 (2022).</li>
<li>Pocanschi, C. L., Kleinschmidt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+thermodynamic+stability+of+membrane+proteins+in+micelles+and+lipid+bilayers+investigated+with+the+ferrichrom+receptor+FhuA%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Membr.+Biol%22%5BJournal%5D)">The thermodynamic stability of membrane proteins in micelles and lipid bilayers investigated with the ferrichrom receptor FhuA.</a> J. Membr. Biol. 255 (4-5), 485-502 (2022).</li>
<li>Hiotis, G., Notti, R. Q., Bao, H., Walz, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanodiscs+remain+indispensable+for+cryo-EM+studies+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Struct.+Biol%22%5BJournal%5D)">Nanodiscs remain indispensable for cryo-EM studies of membrane proteins.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 92, 103042(2025).</li>
<li>Nakao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Home+is+where+the+lipids+are%3A+a+comparison+of+MSP+and+DDDG+nanodiscs+for+membrane+protein+research%5BTitle%5D)+AND+%22Soft+Matter%22%5BJournal%5D)">Home is where the lipids are: a comparison of MSP and DDDG nanodiscs for membrane protein research.</a> Soft Matter. 21 (33), 6596-6602 (2025).</li>
<li>Dalal, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+nanodisc+scaffold+and+size+alter+the+structure+of+a+pentameric+ligand-gated+ion+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Lipid nanodisc scaffold and size alter the structure of a pentameric ligand-gated ion channel.</a> Nat. Commun. 15 (1), 25(2024).</li>
<li>Knowles, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+proteins+solubilized+intact+in+lipid+containing+nanoparticles+bounded+by+styrene+maleic+acid+copolymer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Membrane proteins solubilized intact in lipid containing nanoparticles bounded by styrene maleic acid copolymer.</a> J. Am. Chem. Soc. 131 (22), 7484-7485 (2009).</li>
<li>Tao, X., Zhao, C., MacKinnon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+protein+isolation+and+structure+determination+in+cell-derived+membrane+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Membrane protein isolation and structure determination in cell-derived membrane vesicles.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 120 (18), e2302325120(2023).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-step+construction+of+circularized+nanodiscs+using+SpyCatcher-SpyTag%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">One-step construction of circularized nanodiscs using SpyCatcher-SpyTag.</a> Nat. Commun. 12 (1), 5451(2021).</li>
<li>Ren, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DeFrND%3A+detergent-free+reconstitution+into+native+nanodiscs+with+designer+membrane+scaffold+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">DeFrND: detergent-free reconstitution into native nanodiscs with designer membrane scaffold peptides.</a> Nat. Commun. 16 (1), 7973(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Bio-beads</td><td>Bio-rad</td><td>1523920</td><td></td></tr><tr><td>Cholesteryl hemisuccinate</td><td>Anatrace</td><td>CH210</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Sinoreagent</td><td></td><td>Gebruik in een afzuigpunt</td></tr><tr><td>DOPE</td><td>Avanti</td><td>850725P</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sinoreagent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>n-Dodecyl-beta-D-maltoside</td><td>Anatrace</td><td>D310</td><td></td></tr><tr><td>n-pentane</td><td>Adamas</td><td></td><td>Gebruik in een afzuigpunt</td></tr><tr><td>POPC</td><td>Avanti</td><td>850457P</td><td></td></tr><tr><td>POPS</td><td>Avanti</td><td>840034P</td><td></td></tr><tr><td>SEC</td><td>Bio-rad</td><td></td><td>Volg het protocol van de fabrikant voor correct gebruik</td></tr><tr><td>SnakeSkin Dialysis Tubing</td><td>Thermo</td><td>68011</td><td></td></tr><tr><td>Superose&nbsp;6 Increase10/300 GL</td><td>Cytiva</td><td>29091596</td><td></td></tr><tr><td>Ultrafiltration Spin Columns Amicon Ultra-15</td><td>Millipore</td><td>UFC905008</td><td></td></tr></tbody></table>

een techniek voor het stabiliseren van membraaneiwitten in nanodiscs

A Technique for Stabilizing Membrane Proteins in Nanodiscs

Een techniek voor het stabiliseren van membraaneiwitten in nanodiscs

Many membrane proteins exhibit poor stability, loss of activity, and sample heterogeneity when extracted in detergent-based environments, posing ...

a-technique-for-stabilizing-membrane-proteins-in-nanodiscs

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Nanodiscs zijn kleine discoïde deeltjes die membraaneiwitten te nemen in een klein stukje van de fosfolipide dubbellaag. We een visuele protocol dat de stap-voor-stap opname van de MalFGK2 transporter in een schijf toont.

Een stap-voor-stap methode voor de Reconstructie van een ABC-transporter in nanodisc lipide deeltjes

β-vat buitenmembraaneiwitten (OMP's) hebben veel functies binnen de buitenmembraan van gramnegatieve bacteriën, mitochondriën en chloroplasten. Hier hopen we een bekende knelpunt in structurele studies te verlichten door protocollen te presenteren voor de productie van β-vat OMP's in voldoende hoeveelheden voor structuurbepaling door röntgenkristallografie of NMR-spectroscopie.

Van Constructen naar Crystals - Naar Structuur Bepaling van β-barrel Outer Membrane Proteins

Wij presenteren een protocol glas functionaliseren met nanometrische eiwit pleisters omgeven door een vloeibare lipide dubbellaag. Deze substraten zijn compatibel met geavanceerde optische microscopie en zullen naar verwachting om te dienen als platform voor celadhesie en migratie studies.

Ligand Nano-cluster Arrays in een ondersteunde lipide dubbellaag

Veel eiwitten voeren hun functie uit wanneer ze aan membraanoppervlakken zijn gehecht. De binding van extrinsieke eiwitten op nanodisc-membranen kan indirect worden afgebeeld door transmissie-elektronenmicroscopie. We laten zien dat de karakteristieke stapelvorming (rouleau) van nanodiscs, veroorzaakt door de negatieve kleuring natriumfosfowolframaat, wordt voorkomen door de binding van extrinsiek eiwit.

Methode om te visualiseren en te analyseren Membrane interagerende eiwitten door Transmission Electron Microscopy

Dit protocol laat zien hoe een model met een lage resolutie ab initio en structurele details van een wasmiddel-ontbindend membraan eiwit in small-angle neutron scattering met contrast-matching van het detergent oplossing te verkrijgen.

Contrast-Matching wasmiddel in Small-Angle Neutron Scattering experimenten voor membraan eiwit structurele analyse en modellering van de Ab Initio

We presenteren een methode die membraan eiwit zuivering en reconstitutie in peptidiscs combineert in een enkele chromatografische stap. Biotinyated steigers worden gebruikt voor directe oppervlakte bevestiging en meting van eiwit-ligand interacties via biolayer interferometrie.

PeptiQuick, een in één stap incorporatie van membraan eiwitten in Biotinylated Peptidiscs voor gestroomlijnde eiwit binding assays

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor de bepaling van oligomere toestand van membraaneiwitten dat gebruik maakt van een inheems celmembraan nanodeeltjessysteem in combinatie met elektronenmicroscopie.

Native Cell Membrane Nanodeeltjes Systeem voor Membraan Eiwit-Eiwit Interactie Analyse

Co-translationele insertie in voorgevormde nanodiscs maakt het mogelijk om celvrije gesynthetiseerde membraaneiwitten te bestuderen in gedefinieerde lipideomgevingen zonder contact met detergentia. Dit protocol beschrijft de voorbereiding van essentiële systeemcomponenten en de kritieke parameters voor het verbeteren van de expressie-efficiëntie en monsterkwaliteit.

Co-translationele insertie van membraaneiwitten in voorgevormde nanodiscs

Hier wordt een protocol beschreven voor het genereren van lichtgereguleerde en omkeerbare eiwitpatronen met hoge spatiotemporele precisie bij kunstmatige lipidemembranen. De methode bestaat uit de gelokaliseerde fotoactivering van het eiwit iLID (verbeterd lichtinduceerbaar dimeer) geïmmobiliseerd op modelmembranen dat, onder blauw licht, bindt aan zijn partnereiwit Nano (wildtype SspB).

Dynamische door licht geïnduceerde eiwitpatronen bij modelmembranen

We presenteren een protocol voor het reconstitueren van membraaneiwitten en het inkapselen van enzymen en andere in water oplosbare componenten in lipideblaasjes van submicrometer en micrometer grootte.

Constructie van metabolische netwerken uit evenwicht in blaasjes ter grootte van nano- en micrometer

Leer een protocol voor het stabiliseren van membraaneiwitten in nanodiscs met behulp van membraanscaffold-eiwitten en fosfolipiden. Deze methode verbetert de stabiliteit en homogeniteit van eiwitten voor cryo-EM-structuuranalyse.

Een techniek voor het stabiliseren van membraaneiwitten in nanodiscs

Meer video's verkennen