Name: Snelle productie van recombinante menselijke SLFN14-ribonuclease en stoichiometrische analyse door massafotometrie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-20T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 20 s
Description: Leer de snelle productie van recombinante menselijke SLFN14-ribonuclease met HEK293-cellen en stoichiometrische analyse door massafotometrie. Deze methode faciliteert biochemisch onderzoek naar genregulatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Pisareva, V. P., Muslimov, I. A., Tcherepanov, A., Pisarev, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+novel+ribosome-associated+endoribonuclease+slfn14+from+rabbit+reticulocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of novel ribosome-associated endoribonuclease slfn14 from rabbit reticulocytes.</a> Biochemistry. 54 (21), 3286-3301 (2015).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+schlafen+14+cleavage+of+short+double-stranded+rnas+underpins+its+antiviral+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci+%28Weinh%29%22%5BJournal%5D)">Human schlafen 14 cleavage of short double-stranded rnas underpins its antiviral activity.</a> Adv Sci (Weinh). 12 (37), e01727(2025).</li>
<li>Seong, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+14+%28slfn14%29+is+a+novel+antiviral+factor+involved+in+the+control+of+viral+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">Schlafen 14 (slfn14) is a novel antiviral factor involved in the control of viral replication.</a> Immunobiology. 222 (11), 979-988 (2017).</li>
<li>Jo, U., Pommier, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural%2C+molecular%2C+and+functional+insights+into+schlafen+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Structural, molecular, and functional insights into schlafen proteins.</a> Exp Mol Med. 54 (6), 730-738 (2022).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Velcrin-induced+selective+cleavage+of+trna%28leu%29%28taa%29+by+slfn12+causes+cancer+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Velcrin-induced selective cleavage of trna(leu)(taa) by slfn12 causes cancer cell death.</a> Nat Chem Biol. 19 (3), 301-310 (2023).</li>
<li>Murai, J., Thomas, A., Miettinen, M., Pommier, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+11+%28slfn11%29%2C+a+restriction+factor+for+replicative+stress+induced+by+DNA-targeting+anti-cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Schlafen 11 (slfn11), a restriction factor for replicative stress induced by DNA-targeting anti-cancer therapies.</a> Pharmacol Ther. 201, 94-102 (2019).</li>
<li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+11+triggers+innate+immune+responses+through+its+ribonuclease+activity+upon+detection+of+single-stranded+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Schlafen 11 triggers innate immune responses through its ribonuclease activity upon detection of single-stranded DNA.</a> Sci Immunol. 9 (96), eadj5465(2024).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Codon-usage-based+inhibition+of+hiv+protein+synthesis+by+human+schlafen+11%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Codon-usage-based inhibition of hiv protein synthesis by human schlafen 11.</a> Nature. 491 (7422), 125-128 (2012).</li>
<li>Valenzuela, C., Saucedo, S., Llano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen14+impairs+hiv-1+expression+in+a+codon+usage-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Schlafen14 impairs hiv-1 expression in a codon usage-dependent manner.</a> Viruses. 16 (4), (2024).</li>
<li>Metzner, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanistic+understanding+of+human+slfn11%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mechanistic understanding of human slfn11.</a> Nat Commun. 13 (1), 5464(2022).</li>
<li>Garvie, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+pde3a-slfn12+complex+reveals+requirements+for+activation+of+slfn12+rnase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Structure of pde3a-slfn12 complex reveals requirements for activation of slfn12 rnase.</a> Nat Commun. 12 (1), 4375(2021).</li>
<li>Kugler, M., Metzner, F. J., Witte, G., Hopfner, K. P., Lammens, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation-mediated+conformational+change+regulates+human+slfn11%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation-mediated conformational change regulates human slfn11.</a> Nat Commun. 15 (1), 10500(2024).</li>
<li>Van Riper, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryoem+structure+of+the+slfn14+endoribonuclease+reveals+insight+into+rna+binding+and+cleavage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Cryoem structure of the slfn14 endoribonuclease reveals insight into rna binding and cleavage.</a> Nat Commun. 16 (1), 5848(2025).</li>
<li>Luo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+characterization+of+human+slfn14%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Structural and functional characterization of human slfn14.</a> Nucleic Acids Res. 53 (10), (2025).</li>
<li>Schellenberg, M. J., Maheshwari, S., Pillon, M. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSchellenberg%2C+MJ+%22Encyclopedia+of+cell+biology%22">Encyclopedia of cell biology</a>. Vol. 1, Elsevier. 57-73 (2022).</li>
<li>Hutchinson, A., Seitova, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+recombinant+prmt+proteins+using+the+baculovirus+expression+vector+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of recombinant prmt proteins using the baculovirus expression vector system.</a> J Vis Exp. (173), e62510(2021).</li>
<li>Ojha, R., Timin, E., Szirovicza, L., Xu, W., Hepojoki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+comparison+of+in-house+prepared+transfection+reagents+in+the+delivery+of+mrna+or+DNA+to+a+wide+range+of+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A systematic comparison of in-house prepared transfection reagents in the delivery of mrna or DNA to a wide range of cultured cells.</a> J Biol Chem. 301 (12), 110742(2025).</li>
<li>Subedi, G. P., Johnson, R. W., Moniz, H. A., Moremen, K. W., Barb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+yield+expression+of+recombinant+human+proteins+with+the+transient+transfection+of+hek293+cells+in+suspension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High yield expression of recombinant human proteins with the transient transfection of hek293 cells in suspension.</a> J Vis Exp. (106), e53568(2015).</li>
<li>Piccinini, F., Tesei, A., Arienti, C., Bevilacqua, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+counting+and+viability+assessment+of+2d+and+3d+cell+cultures%3A+Expected+reliability+of+the+trypan+blue+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Proced+Online%22%5BJournal%5D)">Cell counting and viability assessment of 2d and 3d cell cultures: Expected reliability of the trypan blue assay.</a> Biol Proced Online. 19, 8(2017).</li>
<li>Pace, C. N., Vajdos, F., Fee, L., Grimsley, G., Gray, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+measure+and+predict+the+molar+absorption+coefficient+of+a+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">How to measure and predict the molar absorption coefficient of a protein.</a> Protein Sci. 4 (11), 2411-2423 (1995).</li>
<li>Glasel, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validity+of+nucleic+acid+purities+monitored+by+260nm%2F280nm+absorbance+ratios%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Validity of nucleic acid purities monitored by 260nm/280nm absorbance ratios.</a> Biotechniques. 18 (1), 62-63 (1995).</li>
<li>Li, X., Ben-Dov, I. Z., Mauro, M., Williams, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lowering+the+quantification+limit+of+the+qubittm+rna+hs+assay+using+rna+spike-in%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Lowering the quantification limit of the qubittm rna hs assay using rna spike-in.</a> BMC Mol Biol. 16, 9(2015).</li>
<li>Swiech, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+transfection+of+serum-free+suspension+hek+293+cell+culture+for+efficient+production+of+human+rfviii%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Transient transfection of serum-free suspension hek 293 cell culture for efficient production of human rfviii.</a> BMC Biotechnol. 11, 114(2011).</li>
<li>Gu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction%3A+Advances+in+the+structures%2C+mechanisms+and+targeting+of+molecular+chaperones%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Correction: Advances in the structures, mechanisms and targeting of molecular chaperones.</a> Signal Transduct Target Ther. 10 (1), 117(2025).</li>
<li>Bernhard, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+spliced+leader+rna+recognition+by+the+trypanosoma+brucei+cap-binding+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Structural basis of spliced leader rna recognition by the trypanosoma brucei cap-binding complex.</a> Nat Commun. 16 (1), 685(2025).</li>
<li>Lai, S. H., Tamara, S., Heck, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-particle+mass+analysis+of+intact+ribosomes+by+mass+photometry+and+orbitrap-based+charge+detection+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Single-particle mass analysis of intact ribosomes by mass photometry and orbitrap-based charge detection mass spectrometry.</a> iScience. 24 (11), 103211(2021).</li>
<li>Liu, H., May, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disulfide+bond+structures+of+igg+molecules%3A+Structural+variations%2C+chemical+modifications+and+possible+impacts+to+stability+and+biological+function%5BTitle%5D)+AND+%22MAbs%22%5BJournal%5D)">Disulfide bond structures of igg molecules: Structural variations, chemical modifications and possible impacts to stability and biological function.</a> MAbs. 4 (1), 17-23 (2012).</li>
<li>Marenchino, M., Armbruster, D. W., Hennig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+efficient+purification+of+rna-binding+proteins%3A+Application+to+hiv-1+rev%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Expr+Purif%22%5BJournal%5D)">Rapid and efficient purification of rna-binding proteins: Application to hiv-1 rev.</a> Protein Expr Purif. 63 (2), 112-119 (2009).</li>
<li>Smith, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+proteoform+project%3A+Defining+the+human+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">The human proteoform project: Defining the human proteome.</a> Sci Adv. 7 (46), eabk0734(2021).</li>
<li>Carrasco-Zanini, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+biological+influences+on+the+human+plasma+proteome+beyond+the+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Metab%22%5BJournal%5D)">Mapping biological influences on the human plasma proteome beyond the genome.</a> Nat Metab. 6 (10), 2010-2023 (2024).</li>
<li>Adhikari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-stringency+blueprint+of+the+human+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A high-stringency blueprint of the human proteome.</a> Nat Commun. 11 (1), 5301(2020).</li>
<li>Liao, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rbpworld+for+exploring+functions+and+disease+associations+of+rna-binding+proteins+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Rbpworld for exploring functions and disease associations of rna-binding proteins across species.</a> Nucleic Acids Res. 53 (D1), D220-D232 (2025).</li>
<li>Gebauer, F., Schwarzl, T., Valcarcel, J., Hentze, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rna-binding+proteins+in+human+genetic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Rna-binding proteins in human genetic disease.</a> Nat Rev Genet. 22 (3), 185-198 (2021).</li>
<li>Poodts, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+expression+of+sars-cov-2+spike+rbd+using+the+insect+cell-baculovirus+system%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Improved expression of sars-cov-2 spike rbd using the insect cell-baculovirus system.</a> Viruses. 14 (12), (2022).</li>
<li>Mckenzie, E. A., Abbott, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+recombinant+proteins+in+insect+and+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Expression of recombinant proteins in insect and mammalian cells.</a> Methods. 147, 40-49 (2018).</li>
<li>Shi, X., Jarvis, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+n-glycosylation+in+the+baculovirus-insect+cell+system%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Protein n-glycosylation in the baculovirus-insect cell system.</a> Curr Drug Targets. 8 (10), 1116-1125 (2007).</li>
</ol>

```html
<table><tbody><tr><td>2-mercaptoethanol (b-Me)</td><td>Sigma</td><td>M3148-500ML</td><td>14,3 M oplossing stock</td></tr><tr><td>AcquireMP 2024 R2</td><td>Refeyn</td><td>/</td><td>data acquisitie software</td></tr><tr><td>Adenosine-5'-trifosfaat dinatriumzout trihydraat (ATP)</td><td>Chem-Impex International</td><td>00015-100G</td><td>los oplossing pH 7,0 aanpassen</td></tr><tr><td>Anti-Flag M2 affiniteitsgel</td><td>Millipore</td><td>A2220</td><td>anti-flag affiniteitshars</td></tr><tr><td>Benzamidinehydrochloride hydraat</td><td>Sigma</td><td>B6506-25G</td><td>proteaseremmer</td></tr><tr><td>Breed scala van eiwitstandaarden (10-250 kDa)</td><td>Bio-Rad</td><td>P7719S</td><td>voorgekleurde eiwitstandaarden</td></tr><tr><td>Countess 3</td><td>Invitrogen</td><td>A49862</td><td>geautomatiseerde celteller</td></tr><tr><td>DiscoverMP v2024 R2</td><td>Refeyn</td><td>/</td><td>data analyse software</td></tr><tr><td>Dulbecco's fosfaatgebufferde zoutoplossing</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td>1x oplossing stock</td></tr><tr><td>DYKDDDDK peptide</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A36805</td><td>3xFlag peptide</td></tr><tr><td>FreeStyle 293-F Cellen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R79007</td><td>zoogdiersuspensiecellen</td></tr><tr><td>Geniust M nuclease DMF veld</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-391121B</td><td>universele nuclease</td></tr><tr><td>HyClone CDM4HEK293 media</td><td>Cytiva</td><td>SH3085802</td><td>serumvrij groeimedium</td></tr><tr><td>HyClone SFM4Transfx-293 media</td><td>Cytiva</td><td>SH3086002</td><td>transient transfectiemedium</td></tr><tr><td>Immersol 518F</td><td>Zeiss</td><td>4Y00-R0DY-1007-3BF3</td><td>immersieolie</td></tr><tr><td>Isopropyl alcohol</td><td>Macron Fine Chemicals</td><td>3032-02</td><td></td></tr><tr><td>Laemmli monsterbuffer</td><td>Bio-Rad</td><td>1610737</td><td>2x oplossing stock</td></tr><tr><td>Leupeptine</td><td>VWR</td><td>J580-25MG</td><td>proteaseremmer</td></tr><tr><td>Magnesiumchloride hexahydraat (MgCl2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>M33-500</td><td></td></tr><tr><td>MassFerence P1&nbsp;</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-41033</td><td>500x calibratie stock</td></tr><tr><td>MassGlass UC monstervoorbereidingskit</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-21022</td><td>schuif en pakking</td></tr><tr><td>Micro bio-spin kolom</td><td>Bio-Rad</td><td>7326204</td><td>lege polypropyleen spin kolom</td></tr><tr><td>Milli-Q IQ 7000 systeem</td><td>Millipore</td><td>ZIQ7000T0C</td><td>Type I ultrapuur water</td></tr><tr><td>Mini-Protean TGX stain-free gels</td><td>Bio-Rad</td><td>4568086</td><td>4-15% SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Minitron met vochtigheid, koeling en CO2</td><td>Infors</td><td>72175</td><td>incubator shaker</td></tr><tr><td>MP uitlijningskit</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-21019</td><td>uitlijningstool, soft tip pincet, magneet</td></tr><tr><td>Nanophotometer</td><td>Implen</td><td>NP80</td><td>UV-vis spectrofotometer</td></tr><tr><td>Nutator</td><td>Clay Adams Brand</td><td>421105</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatine A</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-45036B</td><td>proteaseremmer</td></tr><tr><td>Fenylmethylsulfonylfluoride (PMSF)</td><td>Research Products International</td><td>P20270-25.0</td><td>proteaseremmer</td></tr><tr><td>Polycarbonaat schudkolf&nbsp;</td><td>Duran Wheaton Kimble</td><td>WPFBC1000S</td><td>ontluchtingsfles met gekartelde basis</td></tr><tr><td>Polyethylenimine (PEI) MW 40.000</td><td>Polysciences</td><td>24765</td><td>transfectiereagens</td></tr><tr><td>Qubit 4 Fluorometer</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q33226</td><td></td></tr><tr><td>Qubit RNA hoge gevoeligheid assay kit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q32852</td><td>kwantificering met RNA-specifieke kleurstof</td></tr><tr><td>SimplyBlue SafeStain</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>LC6065</td><td>Coomassie G-250</td></tr><tr><td>SLFN14 expressie plasmide DNA</td><td>Origene</td><td>RC226257</td><td>menselijke getagged ORF clone</td></tr><tr><td>Natriumchloride (NaCl)</td><td>Millipore</td><td>1.37017</td><td></td></tr><tr><td>Tris, pH 7,4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J60202.K2</td><td>1 M gebufferde oplossing stock</td></tr><tr><td>Tris (2-carboxyethyl) fosfine hydrochloride (TCEP)</td><td>Gold Biotechnology</td><td>TCEP10</td><td>TCEP</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>VWR</td><td>M143-1L</td><td>detergens</td></tr><tr><td>Trypanblauwe kleurstof</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T10282</td><td>0,4% oplossing stock</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>VWR</td><td>0777-1L</td><td>detergens</td></tr><tr><td>TwoMP</td><td>Refeyn</td><td>MP-PRO-00001</td><td>massa fotometer</td></tr><tr><td>Zeba 40K Desaltin Kolom</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A57759</td><td>exclusiechromatografie op basis van grootte</td></tr></tbody></table>
```

snelle productie van recombinante menselijke slfn14-ribonuclease en stoichiometrische analyse door massafotometrie

Rapid Production of Recombinant Human SLFN14 Ribonuclease and Stoichiometric Analysis by Mass Photometry

Snelle productie van recombinante menselijke SLFN14-ribonuclease en stoichiometrische analyse door massafotometrie

Ribonucleases are a specialized class of RNA binding proteins that catalyze RNA cleavage and contribute to diverse biological processes including gene ...

rapid-production-recombinant-human-slfn14-ribonuclease-stoichiometric

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Een nieuwe werkwijze die kwantitatieve analyse van FRET (Förster Resonance Energy Transfer) signalen is beschreven voor het bestuderen enzymkinetiek.

Kwantitatieve FRET (Förster Resonance Energy Transfer) Analyse voor SENP1 Protease Kinetics Bepaling

Totaal cellulair RNA verschaft een slechte template voor het bestuderen korte termijn veranderingen in RNA synthese en verval en de kinetiek van RNA processing. We beschrijven hier metabolisch merken van nieuw getranscribeerde RNA met 4-thiouridine gevolgd door thiol-specifieke biotinylering en zuivering van nieuw getranscribeerde RNA waardoor deze beperkingen te overwinnen.

Metabole Labeling van Nieuw Transcribed RNA voor hoge resolutie genexpressieprofilering van RNA synthese, verwerking en Decay in Cell Culture

Exonucleasen spelen een cruciale rol bij het waarborgen van de stabiliteit van het genoom. Verlies van de WRN-exonucleasefunctie resulteert in voortijdige veroudering. Het bestuderen van substraten en andere vereisten van de nuclease in vitro kan helpen bij het verduidelijken van zijn rol in vivo. Hier demonstreren we een snelle en reproduceerbare fluorescentie-gebaseerde assay om zijn nuclease-activiteit te meten.

Een fluorescentie-gebaseerde Exonuclease Assay te karakteriseren DmWRNexo, ortholoog van Human Progeroid WRN Exonuclease, en de toepassing ervan op andere Nucleasen

Dit protocol beschrijft hoe absolute kwantificeringsanalyses van doeleiwitten binnen complexe biologische monsters kunnen worden uitgevoerd met behulp van geselecteerde reactiebewaking. Het werd gebruikt om eiwitten van de muis macrofaag chemotaxis signaleringsroute nauwkeurig te kwantificeren. Selectie van doelpeptiden, ontwikkeling van analyses en kwalitatieve en kwantitatieve analyses worden in detail beschreven.

Geselecteerde Reaction Monitoring Massaspectrometrie voor Absolute Protein kwantificering

Dit protocol beschrijft het combinatorische gebruik van ChIP-seq, 4sU-seq en totaal RNA-seq ribosoom profilering voor cellijnen en primaire cellen. Hierdoor wijzigingen bijhouden in transcriptiefactor bindend, DOVO transcriptie, RNA-verwerking, omzet en vertaling na verloop van tijd, en de algemene gang van zaken in geactiveerd en/of snel veranderende cellen weer te geven.

Real-time analyse van transcriptiefactor bindend, transcriptie, vertaling en omzet globale u gebeurtenissen wilt weergeven tijdens de activatie van de cellulaire

Beschrijven we een methode voor het genereren van en sturen genetisch gemodificeerde respiratoir syncytieel virussen (RSVs) en een geoptimaliseerde plaque assay voor RSVs. We illustreren dit protocol door het creëren van twee recombinante virussen die respectievelijk toestaan kwantificering van RSV replicatie en live analyse van RSV opneming organen en integratie-organen-geassocieerde korrels dynamiek.

Generatie, versterking en titratie van recombinante respiratoir syncytieel virussen

Hier beschrijven we een gedetailleerd protocol voor een LC-MS-gebaseerde sequencingmethode die kan worden gebruikt als een directe methode om kort RNA (&lt;35 nt per run) te sequencen zonder een cDNA-tussenproduct, en als een algemene methode om verschillende nucleotidemodificaties te sequencen in een enkele studie met precisie op één base.

2D-HELS MS Seq: Een algemene LC-MS-gebaseerde methode voor directe en de novo sequencing van RNA-mengsels met verschillende nucleotidemodificaties

Single molecule fluorescentie energieoverdracht is een methode die de tRNA-dynamiek volgt tijdens ribosomale eiwitsynthese. Door individuele ribosomen te volgen, worden inhomogene populaties geïdentificeerd, die licht werpen op mechanismen. Deze methode kan worden gebruikt om biologische conformatieveranderingen in het algemeen te volgen om dynamisch-functierelaties in vele andere complexe biosystemen te onthullen. Single molecule-methoden kunnen niet-snelheidsbeperkende stappen en laagbevolkte...

Single Molecule Fluorescence Energy Transfer Study van ribosoom eiwitsynthese

Een gedetailleerd protocol voor het synthetiseren van lipide nanodeeltjes (LNP's) met behulp van CIJ-mixertechnologieën (Confined Impinging Jet), waaronder een CIJ met twee stralen en een vortexmixer met vier stralen met meerdere inlaten (μMIVM), wordt gedemonstreerd. De CIJ-mengers genereren reproduceerbare, turbulente micromengomgevingen, wat resulteert in de productie van monodisperse LNP's.

Het synthetiseren van lipide nanoparticles door turbulente stroming in besloten botsende straalmixers

We presenteren een geactualiseerd protocol voor de productie van het OnePot 'Protein synthesis Using Recombinant Elements' (PURE)-systeem en ruwe ribosomen voor celvrije eiwitsynthese, met de nadruk op het beheersen van celgroei om batch-tot-batchvariaties te minimaliseren.

Verfijning van de productie van OnePot PURE en ruwe ribosomen voor reproduceerbare celvrije eiwitsynthese

Dit protocol beschrijft de recombinante productie en zuivering van hydrofobine SC16 uit Escherichia coli en biedt fluorescentie-gebaseerde assays om de zelfassemblage te monitoren.

Recombinante productie en zuivering van hydrofobine SC16 uit Escherichia coli en monitoring van zelfassemblage met fluorescentietests

Leer de snelle productie van recombinante menselijke SLFN14-ribonuclease met HEK293-cellen en stoichiometrische analyse door massafotometrie. Deze methode faciliteert biochemisch onderzoek naar genregulatie.

Snelle productie van recombinante menselijke SLFN14-ribonuclease en stoichiometrische analyse door massafotometrie

Meer video's verkennen