ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol>
	<li>Hussein, R. S., Bin Dayel, S., Abahussein, O., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influences+on+skin+and+intrinsic+aging:+biological,+environmental,+and+therapeutic+insight.">Influences on skin and intrinsic aging: biological, environmental, and therapeutic insight.</a> J Cosmet Dermatol. 24, e16688 (2025).</li><li>Dorf, N., Maciejczyk, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+senescence-from+basic+research+to+clinical+practice.">Skin senescence-from basic research to clinical practice.</a> Front Med (Lausanne). 11, 1484345 (2024).</li><li>Grenier, A., Morissette, M. C., Rochette, P. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+combination+of+cigarette+smoke+and+solar+rays+causes+effects+similar+to+skin+aging+in+a+bilayer+skin+model.">The combination of cigarette smoke and solar rays causes effects similar to skin aging in a bilayer skin model.</a> Sci Rep. 13, 17969 (2023).</li><li>Varani, J., Dame, M. K., Rittie, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+collagen+production+in+chronologically+aged+skin:+roles+of+age-dependent+alteration+in+fibroblast+function+and+defective+mechanical+stimulation.">Decreased collagen production in chronologically aged skin: roles of age-dependent alteration in fibroblast function and defective mechanical stimulation.</a> Am J Pathol. 168, 1861-1868 (2006).</li><li>Zhang, S., Duan, E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fighting+against+skin+aging:+the+way+from+bench+to+bedside.">Fighting against skin aging: the way from bench to bedside.</a> Cell Transplant. 27, 729-738 (2018).</li><li>Hussen, N. H. a., Abdulla, S. K., Ali, N. M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+antioxidants+in+skin+aging+and+the+molecular+mechanism+of+ROS:+a+comprehensive+review.">Role of antioxidants in skin aging and the molecular mechanism of ROS: a comprehensive review.</a> Aspects Mol Med. 5, 100063 (2025).</li><li>Addor, F. A. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+photoaging:+additional+factors+involved+in+the+process+of+skin+aging.">Beyond photoaging: additional factors involved in the process of skin aging.</a> Clin Cosmet Investig Dermatol. 11, 437-443 (2018).</li><li>Mucha, M., Skrzydlewska, E., GÄ™gotek, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+protection+against+oxidative+stress+in+human+skin+melanocytes.">Natural protection against oxidative stress in human skin melanocytes.</a> Commun Biol. 8, 1283 (2025).</li><li>Hughes, B. K., Bishop, C. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+understanding+of+the+role+of+senescent+melanocytes+in+skin+ageing.">Current understanding of the role of senescent melanocytes in skin ageing.</a> Biomedicines. 10, 3111 (2022).</li><li>Kami&#324;ski, K., Kazimierczak, U., Kolenda, T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+in+melanogenesis+and+melanoma+development.">Oxidative stress in melanogenesis and melanoma development.</a> Contemp Oncol (Pozn). 26, 1-7 (2022).</li><li>Jim&#233;nez-Cervantes, C., Mart&#237;nez-Esparza, M., P&#233;rez, C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+melanogenesis+in+response+to+oxidative+stress:+transient+downregulation+of+melanocyte+differentiation+markers+and+possible+involvement+of+microphthalmia+transcription+factor.">Inhibition of melanogenesis in response to oxidative stress: transient downregulation of melanocyte differentiation markers and possible involvement of microphthalmia transcription factor.</a> J Cell Sci. 114, 2335-2344 (2001).</li><li>Da&#324;czak-Pazdrowska, A., Gornowicz-Porowska, J., Pola&#324;ska, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+senescence+in+skin-related+research:+targeted+signaling+pathways+and+naturally+occurring+therapeutic+agents.">Cellular senescence in skin-related research: targeted signaling pathways and naturally occurring therapeutic agents.</a> Aging Cell. 22, e13845 (2023).</li><li>Green, K. J., Pokorny, J., Jarrell, B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dangerous+liaisons:+loss+of+keratinocyte+control+over+melanocytes+in+melanomagenesis.">Dangerous liaisons: loss of keratinocyte control over melanocytes in melanomagenesis.</a> Bioessays. 46, e2400135 (2024).</li><li>Ali, L., Al Niaimi, F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+melasma+explained.">Pathogenesis of melasma explained.</a> Int J Dermatol. 64, 1201-1212 (2025).</li><li>Low, E., Alimohammadiha, G., Smith, L. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+good+is+the+evidence+that+cellular+senescence+causes+skin+ageing.">How good is the evidence that cellular senescence causes skin ageing.</a> Ageing Res Rev. 71, 101456 (2021).</li><li>Chin, T., Lee, X. E., Ng, P. Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+cellular+senescence+in+skin+aging+and+age-related+skin+pathologies.">The role of cellular senescence in skin aging and age-related skin pathologies.</a> Front Physiol. 14, 1297637 (2023).</li><li>Gerasymchuk, M., Robinson, G. I., Kovalchuk, O., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+of+the+senescence-associated+phenotype+in+human+skin+fibroblasts.">Modeling of the senescence-associated phenotype in human skin fibroblasts.</a> Int J Mol Sci. 23, 7124 (2022).</li><li>Zimmermann, T., Pommer, M., Kluge, V., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+cellular+senescence+in+human+primary+melanocytes+and+malignant+melanoma+cells+in+vitro.">Detection of cellular senescence in human primary melanocytes and malignant melanoma cells in vitro.</a> Cells. 11, 1489 (2022).</li><li>Tang, J., Li, Q., Cheng, B., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+of+human+face+skin+melanocytes+for+the+study+of+hyperpigmentation.">Primary culture of human face skin melanocytes for the study of hyperpigmentation.</a> Cytotechnology. 66, 891-898 (2014).</li><li>Ku&#269;era, O., Endlicher, R., Rou&#353;ar, T., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+tert-butyl+hydroperoxide-induced+oxidative+stress+on+lean+and+steatotic+rat+hepatocytes+in+vitro.">The effect of tert-butyl hydroperoxide-induced oxidative stress on lean and steatotic rat hepatocytes in vitro.</a> Oxid Med Cell Longev. 2014, 752506 (2014).</li><li>Wedel, S., Martic, I., Hrapovic, N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=tBHP+treatment+as+a+model+for+cellular+senescence+and+pollution-induced+skin+aging.">tBHP treatment as a model for cellular senescence and pollution-induced skin aging.</a> Mech Ageing Dev. 190, 111318 (2020).</li><li>Rabin, D. M., Rabin, R. L., Blenkinsop, T. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+oxidative+stress+upregulates+drusen-related+protein+expression+in+adult+human+RPE+stem+cell-derived+RPE+cells:+a+novel+culture+model+for+dry+AMD.">Chronic oxidative stress upregulates drusen-related protein expression in adult human RPE stem cell-derived RPE cells: a novel culture model for dry AMD.</a> Aging (Albany NY). 5, 51-66 (2013).</li><li>Shakel, Z., Costa Lima, S. A., Reis, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+to+make+human+skin+models+based+on+cellular+senescence+for+ageing+research.">Strategies to make human skin models based on cellular senescence for ageing research.</a> Ageing Res Rev. 100, 102430 (2024).</li><li>Mort, R. L., Jackson, I. J., Patton, E. E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+melanocyte+lineage+in+development+and+disease.">The melanocyte lineage in development and disease.</a> Development. 142, 620-632 (2015).</li><li>Goff, P. S., Castle, J. T., Kohli, J. S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture,+and+transfection+of+melanocytes.">Isolation, culture, and transfection of melanocytes.</a> Curr Protoc. 3, e774 (2023).</li><li>Martic, I., Wedel, S., Jansen-DÃ¼rr, P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+to+investigate+UVB-induced+cellular+senescence+and+pigmentation+in+melanocytes.">A new model to investigate UVB-induced cellular senescence and pigmentation in melanocytes.</a> Mech Ageing Dev. 190, 111322 (2020).</li><li>Victorelli, S., Lagnado, A., Halim, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+human+melanocytes+drive+skin+ageing+via+paracrine+telomere+dysfunction.">Senescent human melanocytes drive skin ageing via paracrine telomere dysfunction.</a> EMBO J. 38, e101982 (2019).</li><li>Zhang, H., Davies, K. J. A., Forman, H. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+response+and+Nrf2+signaling+in+aging.">Oxidative stress response and Nrf2 signaling in aging.</a> Free Radic Biol Med. 88, 314-336 (2015).</li><li>Birch, J., Gil, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence+and+the+SASP:+many+therapeutic+avenues.">Senescence and the SASP: many therapeutic avenues.</a> Genes Dev. 34, 1565-1576 (2020).</li><li>Kang, H. Y., Ortonne, J. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+should+be+considered+in+treatment+of+melasma.">What should be considered in treatment of melasma.</a> Ann Dermatol. 22, 373-378 (2010).</li><li>Davalli, P., Mitic, T., Caporali, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS,+cell+senescence,+and+novel+molecular+mechanisms+in+aging+and+age-related+diseases.">ROS, cell senescence, and novel molecular mechanisms in aging and age-related diseases.</a> Oxid Med Cell Longev. 2016, 3565127 (2016).</li><li>Almeida, F. V., Douglass, S. M., Fane, M. E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bad+company:+microenvironmentally+mediated+resistance+to+targeted+therapy+in+melanoma.">Bad company: microenvironmentally mediated resistance to targeted therapy in melanoma.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 32, 237-247 (2019).</li><li>Brenner, M., Hearing, V. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+protective+role+of+melanin+against+UV+damage+in+human+skin.">The protective role of melanin against UV damage in human skin.</a> Photochem Photobiol. 84, 539-549 (2008).</li><li>L&#243;pez-Ot&#237;n, C., Blasco, M. A., Partridge, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hallmarks+of+aging.">The hallmarks of aging.</a> Cell. 153, 1194-1217 (2013).</li><li>Videira, I. F., Moura, D. F., Magina, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+melanogenesis.">Mechanisms regulating melanogenesis.</a> An Bras Dermatol. 88, 76-83 (2013).</li><li>Ratz-&#321;yko, A., Arct, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+as+an+active+ingredient+for+cosmetic+and+dermatological+applications:+a+review.">Resveratrol as an active ingredient for cosmetic and dermatological applications: a review.</a> J Cosmet Laser Ther. 21, 84-90 (2019).</li><li>Xu, M., Pirtskhalava, T., Farr, J. N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senolytics+improve+physical+function+and+increase+lifespan+in+old+age.">Senolytics improve physical function and increase lifespan in old age.</a> Nat Med. 24, 1246-1256 (2018).</li><li>Ogrodnik, M., Evans, S. A., Fielder, E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+senescent+cell+clearance+alleviates+age-related+brain+inflammation+and+cognitive+impairment+in+mice.">Whole-body senescent cell clearance alleviates age-related brain inflammation and cognitive impairment in mice.</a> Aging Cell. 20, e13296 (2021).</li><li>Hernandez-Segura, A., de Jong, T. V., Melov, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unmasking+transcriptional+heterogeneity+in+senescent+cells.">Unmasking transcriptional heterogeneity in senescent cells.</a> Curr Biol. 27, 2652-2660.e4 (2017).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>0.22 &micro;m membrane filter</td><td>Merck&nbsp;</td><td>SLGVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>1 M citroenzuur&nbsp;</td><td>Merck&nbsp;</td><td>K91567844</td><td>bereid in aq. dest.</td></tr><tr><td>1 M MgCl2</td><td>Merck</td><td>A649033</td><td>bereid in aq. dest.</td></tr><tr><td>1 M Na2HPO4</td><td>Merck</td><td>K56036736</td><td>bereid in aq. dest.</td></tr><tr><td>10 M NaOH</td><td>Lab Honeywell</td><td>30620</td><td>bereid in aq. dest.</td></tr><tr><td>37% formaldehyde</td><td>Sigma</td><td>252549</td><td></td></tr><tr><td>4% paraformaldehyde</td><td>CarlRoth</td><td>0335.3</td><td></td></tr><tr><td>5 M natriumchloride&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S3014</td><td>bereid in aq. dest.</td></tr><tr><td>50% glutaraldehyde</td><td>Sigma</td><td>G6403</td><td></td></tr><tr><td>5-Brom-4-Chlor-3-indolyl-&beta;-D-Galactopyranosid (X-Gal)</td><td>Sigma</td><td>B9146</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor-geconjugeerd secundair antilichaam 2 mg/mL</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td></td></tr><tr><td>BSA (runderserumalbumine)</td><td>Sigma</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>Chemiluminescent substraat</td><td>Sigma</td><td>WBKLS0500</td><td></td></tr><tr><td>Costar CellLifter&nbsp;</td><td>Corning</td><td>3008</td><td></td></tr><tr><td>Dekvlakken voor celkweek/microscopie</td><td>Epredia</td><td>CB00200RA120MNZ0</td><td></td></tr><tr><td>DermaLife basaal medium</td><td>CellSystems</td><td>LM-0004</td><td></td></tr><tr><td>DermaLife M melanocytkit&nbsp;</td><td>CellSystems</td><td>LS-1041</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's fosfaatbuffer met zout&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Menselijke neonatale melanocyten</td><td>CellSystems</td><td>FC-0023</td><td></td></tr><tr><td>LaminB1 antilichaam (konijn)</td><td>Abcam</td><td>AB16048</td><td>Verdunning 1:1000 in 5% BSA</td></tr><tr><td>Montagemiddel met DAPI</td><td>Abcam</td><td>AB104139</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline-streptomycine oplossing&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Polyacrylamide-gradiëntgels</td><td>Bio-Rad</td><td>456-8095</td><td></td></tr><tr><td>Poly-D-Lysine, 0.1 mg/mL&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>A38904-01</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumferricyanide</td><td>Sigma</td><td>P8131</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumferrocyanide</td><td>Sigma</td><td>P-9387</td><td></td></tr><tr><td>pRB antilichaam (konijn)</td><td>CellSignalling</td><td>93085</td><td>Verdunning 1:1000 in 5% BSA</td></tr><tr><td>Protease-remmercocktail</td><td>zelf bereid</td><td>N/A</td><td>500 mM NaF; 2 &micro;g/ml Aprotinine; 1 mM PMSF; 1 mM geactiveerde Na-Orthovanadate</td></tr><tr><td>RIPA-buffer&nbsp;</td><td>zelf bereid</td><td>N/A</td><td>bevat: 50 mM Tris-HCl; 1% NP-40; 0.5% Na-deoxycholaat; 0.1% SDS; 150 mM NaCl; 2 mM EDTA</td></tr><tr><td>RLT-buffer</td><td>Qiagen</td><td>1015762</td><td>Inbegrepen in RNeasy Mini Kit&nbsp;</td></tr><tr><td>RNeasy Mini Kit</td><td>Qiagen</td><td>74106</td><td></td></tr><tr><td>Magermelkpoeder (voor 5% melk in TBS-T)</td><td>Sigma</td><td>70166</td><td></td></tr><tr><td>Natriumcitraat (voor 0,1% oplossing)</td><td>Sigma</td><td>S4641</td><td></td></tr><tr><td>Sojatrypsine-remmer, 0.5 mg/mL&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>17075-029</td><td></td></tr><tr><td>tert-Butylhydroperoxide (tBHP)</td><td>Sigma</td><td>458139</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100 (voor 0,3% oplossing)</td><td>Sigma</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA-oplossing</td><td>Sigma</td><td>T3924</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoethanol</td><td>CarlRoth</td><td>4227.3</td><td></td></tr><tr><td>&gamma;H2AX antilichaam (konijn)</td><td>CellSignalling</td><td>2577S</td><td>Verdunning 1:200&nbsp;</td></tr></tbody></table>

een gestandaardiseerd protocol voor het induceren van door stress veroorzaakte voortijdige veroudering in primaire menselijke melanocyten met behulp van tert-butylhydroperoxide

A Standardized Protocol for Inducing Stress-Induced Premature Senescence in Primary Human Melanocytes Using Tert-butyl Hydroperoxide

Een gestandaardiseerd protocol voor het induceren van door stress veroorzaakte voortijdige veroudering in primaire menselijke melanocyten met behulp van tert-butylhydroperoxide

Environmental stressors, including UV radiation, air pollution, or cigarette smoke, drive extrinsic skin aging. Exposure to these extrinsic aging factors ...

Ons onderzoek richt zich op het bestuderen van het senescentie-fenotype van melanocyten en de bijdrage hiervan aan extrinsieke huidveroudering. Bestaande senescentiemodellen maken gebruik van fibroblasten en slagen er niet in om de melanocytspecifieke biologie vast te leggen. Dit protocol induceert tBHP-gemedieerde oxidatieve stress in primaire humane melanocyten.Begin met het verzamelen van de benodigde reagentia. Nadat de melanocyten zijn ontdooid en drie dagen de tijd hebben gehad om te herstellen, moet worden gecontroleerd of de cellen op de dag van het uitzaaien een confluentie van 80 tot 90% hebben bereikt. Aspireer het medium uit de kolf.Was de cellen twee keer met DPBS. Voeg twee milliliters trypsine-EDTA-oplossing toe om de cellen los te maken. Plaats de kolf gedurende vijf minuten in de incubator bij 37 °C met 5% koolstofdioxide.Tik voorzichtig tegen de kolf. Observeer de cellen onder de microscoop om volledige loslating te bevestigen. Voeg 1,5 keer het volume trypsineremmer toe om de reactie te stoppen.Breng de celsuspensie over naar een conische buis van 15 milliliter. Verdun de suspensie met DPBS tot een eindvolume van 10 milliliter. Centrifugeer de celsuspensie bij een relatieve centrifugalkracht van 100 gedurende vijf minuten.Zuig het supernatant af en resuspendeer de celpellet in medium tot het gewenste volume. Zaai 600.000 cellen per schaal van 10 centimeter voor de platen behandeld met tert-butylhydroperoxide, of tBHP. Zaai 400.000 cellen per plaat voor de controleplaten.Bereid een werkoplossing van 10 millimolar voor vanuit de tBHP-voorraad met behulp van DPBS of medium. Voeg 100 micromolar tBHP toe aan de cellen gedurende één uur per behandeling. Beweeg de plaat heen en weer om de tBHP gelijkmatig over het medium te verdelen.Plaats de cellen precies één uur in de incubator bij 37 °C met 5% koolstofdioxide. Aspireer het medium om de tBHP-behandeling te beëindigen. Was de platen twee keer met voorverwarmde DPBS bij 37 °C.Voeg het juiste volume vers medium toe aan de platen. Plaats de platen in de incubator en laat de cellen ten minste vier uur herstellen voor de volgende behandeling. Herhaal de behandelingsprocedure later op dezelfde dag voor de tweede behandeling.Zet het behandelingsschema voort tot dag vier en houd de cellen vervolgens in cultuur tot dag negen om de senescentiemarkers te beoordelen. Tel de tBHP-behandelde cellen en de controlecellen. Zaai ze opnieuw uit bij dezelfde initiële dichtheid, of indien er minder dan 600, 000 cellen van de tBHP-behandelde platen zijn verkregen, zaai dan alle verzamelde cellen opnieuw uit.Tel de cellen op dag vier, negen en 15 van de cultuur. Was de cellen op dag negen tweemaal met PBS. Fixeer de cellen met 2% formaldehyde en 0,4% glutaraldehyde.Was de gefixeerde cellen tweemaal met PBS. Incubeer de gefixeerde cellen in een kleuringsoplossing bij pH 6. Dek de plaat af om deze tegen licht te beschermen en incubeer ze vervolgens gedurende 18 uur bij 37 °C in afwezigheid van kooldioxide.Was de cellen twee keer met PBS. Beeld de blauw gekleurde cellen af en tel het aantal cellen met behulp van lichtmicroscopie. Deel dit getal door het totale aantal cellen in hetzelfde gezichtsveld.Druk de resultaten uit als het percentage positieve cellen. Na inductie van oxidatieve stress verminderde de tBHP-behandeling de proliferatie van melanocyten significant in vergelijking met de controles. De behandelde cellen bereikten tegen dag negen slechts 1,4 cumulatieve populatieverdubbelingen, of cPDL, terwijl de controles 3,1 cPDL bereikten.Tegen dag 15 bereikten de behandelde cellen een plateau bij 1,9 cPDL, terwijl de controlecellen uitbreidden tot 5,1 cPDL. Melanocyten behandeld met tBHP vertoonden een vergroot celoppervlak vergeleken met de controles op alle gemeten tijdstippen, waarbij de vergroting vorderde tot dag 15, wat consistent is met de vergrote en afgeplatte morfologie van senescente cellen. tBHP-behandelde melanocyten vertoonden een toename in senescence-geassocieerde bèta-galactosidase, of SA-bèta-galactosidase-activiteit, met 32% positieve cellen vergeleken met 3% in de controles.De stijging in SA-beta-galactosidase-positiviteit was consistent met een senescent fenotype. Immunofluorescentie-analyse toonde verhoogde gamma-H2AX-niveaus aan in tBHP-behandelde melanocyten vergeleken met de controles. De behandelde cellen vertoonden een sterker gamma-H2AX-signaal dan de controles.Real-time kwantitatieve polymerasekettingreactie-analyse toonde een verhoogde expressie van factoren van het senescentie-geassocieerde secretieprofiel aan, waarbij interleukine-8 de grootste toename vertoonde. Interleukine-6 en matrixmetalloproteïnase-1 vertoonden matige toenames. Western blot-analyse bevestigde de inductie van senescentie.Lamine B1 vertoonde een significante afname in tBHP-behandelde melanocyten in vergelijking met de controlegroep. De spiegels van gefosforyleerd retinoblastoomproteïne waren verlaagd in tBHP-behandelde melanocyten vergeleken met de controlegroep. Behandeling met tBHP verhoogde de transcriptionele expressie van p16 en p21 in melanocyten.Dit model stelt onderzoekers in staat om te bestuderen hoe senescente melanocyten de pigmentatie beïnvloeden en communiceren met omringende cellen via SASP-inflammatoire factoren. De uitdaging in dit protocol is de nauwkeurige timing. tBHP moet tweemaal daags worden toegediend met een interval van ten minste vier uur.Door dit protocol te volgen, kan senescentie worden gekenmerkt met behulp van senescence-geassocieerde bèta-galactosidase-kleuring, immunofluorescentie, RT-qPCR en Western blotting van gevestigde senescentiemarkers.

a-standardized-protocol-for-inducing-stress-induced-premature

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video describes a method to measure UV sensitivity in a humanized mouse model—a mouse model that mimics human skin. We determine the minimal erythematous dose (MED) of UV radiation that can cause erythema or edema on the skin. The method can help to find out the efficacy of drugs used to reduce UV sensitivity.

Minimum Erythematous Dose Assay: A Method for Measuring UV Sensitivity in Mouse Models

Epidermale melanine wordt geïnduceerd door topische applicatie van forskolin in een muizenmodel van de lichte huid UV-gevoelige mens. Farmacologische manipulatie van cAMP niveaus in de huid en epidermale donkerder sterk tegen UV-gemedieerde inflammatie (zonnebrand) zoals gemeten door de minimale erythemateuze dosis (MED) assay.

Farmacologische Inductie van epidermale melanine en bescherming tegen zonnebrand in een gehumaniseerd muismodel

Dit werk beschrijft een in vitro differentiatie protocol bij gepigmenteerde, volwassen melanocyten uit menselijke pluripotente stamcellen te produceren via een neurale en melanoblast tussenstap met behulp van een feeder-vrij, 25 dagen protocol.

Feeder-vrij Afleiding van melanocyten uit menselijke pluripotente stamcellen

Hier bespreken we een serie van protocollen voor de inductie en validatie van cellulaire senescentie in gekweekte cellen. Wij richten op verschillende senescentie-inducerende prikkels en de kwantificering van gemeenschappelijke senescentie-geassocieerde markers te beschrijven. Wij bieden technische details met behulp van fibroblasten als een model, maar de protocollen kunnen worden aangepast aan verschillende cellulaire modellen.

Inductie en validatie van cellulaire senescentie in primaire menselijke cellen

De volgende procedure beschrijft een methode voor ruimtelijke en temporele controle van melanocytische tumor initiatie in muizen dorsale huid, met behulp van een genetisch gemanipuleerde muismodel. Dit protocol beschrijft macroscopische en microscopische cutane melanoom initiatie.

Ruimtelijke en temporele controle van muizen melanoom initiatie van mutant melanocyt stamcellen

Het doel van dit protocol is om voorbijgaande in vivo productie van niet-dodelijke niveaus van reactieve zuurstofsoorten (ROS) in de huid van muizen te induceren, waardoor fysiologische reacties in het weefsel verder worden bevorderd.

Stimulatie van stamcelniches en weefselregeneratie in muizenhuid door schakelbare protoporfyrine IX-afhankelijke fotogeneratie van reactieve zuurstofsoorten in situ

Dit document meldt dat de toevoeging van Y-27632 aan TIVA medium de opbrengst van melanocyten uit volwassen huidweefsels aanzienlijk kan verhogen.

Y-27632 verrijkt de opbrengst van menselijke melanocyten uit volwassen huidweefsels

We presenteren een protocol voor de ontwikkeling en het gebruik van een oxidatieve stress-model door retinale pigmentepitheelcellen te behandelen met H2O2, waarbij celmorfologie, levensvatbaarheid, dichtheid, glutathion en UCP-2-niveau worden geanalyseerd. Het is een nuttig model om het antioxiderende effect te onderzoeken van eiwitten die worden uitgescheiden door getransfecteerde cellen om neuroretinale degeneratie te behandelen.

Inductie en analyse van oxidatieve stress in doornroosje Transposon-getransfecteerde menselijke retinale pigmentepitheelcellen

Hier beschrijven we een geoptimaliseerd direct herprogrammeringssysteem voor melanocyten en een zeer efficiënt, geconcentreerd virusverpakkingssysteem dat zorgt voor een soepele directe herprogrammering.

Directe herprogrammering van muisfibroblasten in melanocyten

Deze methode bestudeert hoe senescente huidfibroblasten gezonde fibroblasten beïnvloeden. Senescentie wordt geïnduceerd door UVB-blootstelling, en het geconditioneerde medium wordt toegepast op normale fibroblasten. Het helpt bij het evalueren van bioactieve verbindingen die gericht zijn op veranderde cel-tot-cel communicatie bij huidveroudering.

Nieuwe combinatie van antioxidanten om gezonde intercellulaire communicatie te herstellen in een in vitro model met behulp van een geconditioneerd medium uit senescente cellen

Universität Innsbruck.  Een gestandaardiseerd protocol voor het induceren van voortijdige veroudering in HNM met behulp van tBHP, gestandaardiseerde protocollen voor het analyseren van belangrijke senescentiemarkers, waaronder groeistop, SA-β-galactosidase-activiteit en SASP-factoren.

Een gestandaardiseerd protocol voor het induceren van door stress veroorzaakte voortijdige veroudering in primaire menselijke melanocyten met behulp van tert-butylhydroperoxide

Meer video's verkennen