Name: Recombinante productie en zuivering van hydrofobine SC16 uit Escherichia coli en monitoring van zelfassemblage met fluorescentietests (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: Leer de recombinante productie en zuivering van hydrofobine SC16 uit Escherichia coli met fluorescerende zelfassemblagemonitoring. Dit protocol levert ≥5 mg opgeschoond eiwit voor biotechnologische toepassingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (MES)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>145224-94-8</td><td>Buffer component voor zelfassemblage assays</td></tr><tr><td>5 mL ronde bodem polystyreen buis</td><td>Falcon</td><td>352054</td><td>Gebruikt voor zelfassemblage assays met lage doorvoer</td></tr><tr><td>96-well zwarte polystyreen microplaat</td><td>Grenier</td><td>655076</td><td>Gebruikt voor fluorescentiemetingen in microplaat reader</td></tr><tr><td>Acrylamide/Bis-acrylamide (29:1) oplossing (40%)</td><td>BioShop</td><td>ACR004.500</td><td>Gebruikt om SDS-PAGE gels voor te bereiden</td></tr><tr><td>Agar</td><td>BioShop</td><td>AGR002.1</td><td>Agar gebruikt om ampicilline-resistente LB platen te maken</td></tr><tr><td>Ampicilline</td><td>IBI Scientific</td><td>IB02040</td><td>Antibioticum gebruikt in LB-agar platen</td></tr><tr><td>2.8 L Fernbach kolven met baffles</td><td>Fisher Scientific</td><td>955239</td><td>Gebruikt voor grootschalige bacteriecultuurgroei</td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoethanol</td><td>TCI Chemicals</td><td>60-24-2</td><td>Reducerend middel gebruikt in SDS-PAGE monstervoorbereiding</td></tr><tr><td>Kolom (1.5 cm diameter zwaartekracht kolom)</td><td>Bio-Rad</td><td>7371522</td><td>Gebruikt voor nikkel affiniteitszuivering</td></tr><tr><td>Dialyse slang (3500 kDa MWCO)</td><td>BioDesign</td><td>D302</td><td>Gebruikt voor bufferuitwisseling tijdens zuivering</td></tr><tr><td>Emissiefilter</td><td>Edmund Optics</td><td>84080</td><td>Gebruikt voor ThT assays (494 nm, bandpass 20 nm)</td></tr><tr><td>Excitatifilter</td><td>Edmund Optics</td><td>67012</td><td>Gebruikt voor ThT assays (438 nm, bandpass 24 nm)</td></tr><tr><td>Fluorescentie microplaat reader</td><td>Tecan</td><td>Infinite F200 Pro</td><td>Gebruikt om ThT fluorescentie intensiteit te meten</td></tr><tr><td>Hotplate</td><td>Lab Fish</td><td>HS5C</td><td>Gebruikt voor waterbad opstelling met temperatuurmonitoring</td></tr><tr><td>Zoutzuur (HCl)</td><td>Fisher Chemical</td><td>A144-212</td><td>Gebruikt voor pH aanpassing van buffers</td></tr><tr><td>Imidazool</td><td>TCI Chemicals</td><td>288-32-4</td><td>Gebruikt in IMAC zuivering (was en elutie buffers)</td></tr><tr><td>Isopropyl &beta;-D-1-thiogalactopyranosid (IPTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>367-93-1</td><td>Induceert eiwit expressie in E. coli</td></tr><tr><td>LB bouillon (Lennox)</td><td>BioShop</td><td>LBL405.5</td><td>Groeimedium voor bacteriecultuur</td></tr><tr><td>Laagsnelheid gekoelde centrifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td>360291</td><td>Gebruikt om cellen te pelleteren voor opslag</td></tr><tr><td>Nikkel NTA agarose kralen</td><td>GoldBio</td><td>H-350-50</td><td>Resin gebruikt voor affiniteitszuivering van His-getagde eiwitten</td></tr><tr><td>SC16 plasmide</td><td>BioBasic</td><td>N/A</td><td>Custom DNA construct coderend voor H-GB1-SC16 fusie-eiwit</td></tr><tr><td>SHuffle T7 Express competente E. coli</td><td>New England Biolabs</td><td>C3029J</td><td>Gaststam gebruikt voor recombinante eiwitexpressie</td></tr><tr><td>Natriumchloride (NaCl)</td><td>BioShop</td><td>SOD001.5</td><td>Buffer component en ionisatorische sterkte regulator</td></tr><tr><td>Natriumhydroxide (NaOH)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS255-1</td><td>Gebruikt voor pH aanpassing van buffers</td></tr><tr><td>Natriumfosfaat</td><td>BioShop</td><td>SPD579.1</td><td>Buffer component voor pH handhaving</td></tr><tr><td>Spectrofotometer</td><td>Pharmacia Biotech</td><td>5096</td><td>Gebruikt voor kwantificering van SC16</td></tr><tr><td>Thioflavine T (ThT)</td><td>Acros Organics</td><td>2390-54-7</td><td>Fluorescente kleurstof gebruikt om eiwit zelfassemblage te monitoren</td></tr><tr><td>Trombiine protease</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>04-04-9002</td><td>Gebruikt voor splitsing van H-GB1-SC16 fusie-eiwit</td></tr><tr><td>Tris(hydroxymethyl)aminomethaan (Tris)</td><td>BioShop</td><td>TRS001.5</td><td>Buffer gebruikt in zuivering en assay oplossingen</td></tr><tr><td>Hogesnelheid gekoelde centrifuge</td><td>Sorvall</td><td>46915</td><td>Gebruikt om lysate te klaren na cel lysis</td></tr><tr><td>SDS-PAGE opstelling</td><td>Bio-Rad</td><td>1658000EDU</td><td>Gebruikt om SDS-PAGE gels voor te bereiden en te draaien</td></tr></tbody></table>

recombinante productie en zuivering van hydrofobine sc16 uit escherichia coli en monitoring van zelfassemblage met fluorescentietests

Recombinant Production And Purification of Hydrophobin SC16 From Escherichia coli And Monitoring of Its Self-Assembly Using Fluorescence Assays

Recombinante productie en zuivering van hydrofobine SC16 uit Escherichia coli en monitoring van zelfassemblage met fluorescentietests

Hydrophobins are small amphipathic proteins that self-assemble at hydrophobic&#8211;hydrophilic interfaces to form stable waterproof coatings over fungal ...

recombinant-production-purification-hydrophobin-sc16-from-escherichia

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

In de post-humane genomics-tijdperk, de beschikbaarheid van recombinante eiwitten in de moedertaal van conformaties is cruciaal voor structurele, functionele en therapeutisch onderzoek en ontwikkeling. Hier beschrijven we een test-en grootschalige eiwitexpressie systeem humane embryonale nier 293T cellen die kunnen worden gebruikt om een ​​verscheidenheid van recombinante eiwitten.

Een handig en algemene uitdrukking platform voor de productie van de uitgescheiden eiwitten uit menselijke cellen

Een protocol voor de kwantitatieve, high throughput screening expressie en analytische zuivering van fusie-eiwitten uit kleinschalige Escherichia coli culturen wordt beschreven en toegepast om de expressie van disulfide-rijke dierlijke gif eiwit targets.

High Throughput Screening Kwantitatieve Expressie en zuivering Toegepast op Recombinant Disulfide-rijke Venom eiwitten die in<em&gt; E. coli</em

Elastine-achtige polypeptiden zijn stimulus-responsieve biopolymeren met toepassingen variërend van recombinant eiwit zuivering naar drug delivery. Dit protocol beschrijft de zuivering en karakterisering van elastine-polypeptiden en hun peptide of eiwit fusies uit Escherichia coli met hun lagere kritische oplostemperatuur faseovergang gedrag als eenvoudig alternatief voor chromatografie.

Niet-chromatografische zuivering van recombinant elastine-achtige polypeptiden en hun Fusies met peptiden en eiwitten van<em&gt; Escherichia coli</em

De expressie van recombinante eiwitten door zoogdiersystemen wordt een aantrekkelijke methode voor het produceren van eiwitcomplexen voor structurele biologie. Hier presenteren we een eenvoudig maar zeer efficiënt expressiesysteem dat gebruik maakt van in suspensie gekweekte zoogdiercellen om eiwitcomplexen te zuiveren voor structurele studies.

Recombinante eiwitexpressie voor Structurele Biologie in HEK 293F Suspension cellen: een nieuwe en toegankelijke aanpak

Een gestroomlijnde benadering screening op de expressie van recombinant membraaneiwitten in Escherichia coli gebaseerd op fusie met groen fluorescent proteïne gepresenteerd.

Green Fluorescent Protein gebaseerd Expression Screening van membraaneiwitten in<em&gt; Escherichia coli</em

We bieden een methode om gelijktijdig een bibliotheek van antilichaamfragmenten te screenen op bindingsaffiniteit en cytoplasmatische oplosbaarheid door gebruik te maken van de Escherichia coli twin-arginine translocatieroute, die een inherente kwaliteitscontrolemechanisme heeft voor intracellulaire eiwitvouwing, om de antilichaamfragmenten op het binnenmembraan weer te geven.

Bacteriële Inner-membraan Display voor het screenen van een bibliotheek van antilichaamfragmenten

Dit protocol detailleert de stappen, kosten, en apparatuur die nodig is voor het genereren van E. coli-op basis van cel extracten en uit te voeren in vitro eiwit synthese reacties binnen 4 dagen of minder. Om de invloed van de flexibele aard van dit platform voor brede toepassingen, bespreken we reactie voorwaarden die kunnen worden aangepast en geoptimaliseerd.

Escherichia coli-cel-Free eiwitsynthese gebaseerd: protocollen voor een robuuste, flexibele en toegankelijk platformtechnologie

Dit artikel beschrijft een FRET-based flow cytometrie protocol voor het kwantificeren van eiwit zelf montage in zowel S. cerevisiae en HEK293T cellen.

Opsporen en karakteriseren van zelf-assemblage van eiwitten in vivo door flow Cytometrie

Hier wordt een gedetailleerde methode beschreven die de zuivering, refolding en karakterisering van zelf-assembleren eiwit nanodeeltjes (Sapn's) beschrijft voor gebruik bij de ontwikkeling van vaccins.

Productie van E. coli-uitgedrukt zelf-assembleren eiwit nanodeeltjes voor vaccins die een Trimere epitope presentatie vereisen

Op het snijvlak van organische en waterige oplosmiddelen assembleren op maat gemaakte amfifiele elastine-achtige eiwitten zich in complexe supramoleculaire structuren zoals blaasjes, vezels en coacervaten die worden geactiveerd door omgevingsparameters. De beschreven assemblageprotocollen leveren Op eiwitmembraan gebaseerde compartimenten (PMBC's) met tunable eigenschappen, waardoor de inkapseling van verschillende lading.

Geleid Assemblage van Elastin-achtige eiwitten in gedefinieerde supramoleculaire structuren en cargo-encapsulation in vitro

Dit protocol beschrijft de productie van recombinante humane SLFN14-ribonuclease en de stoichiometrische analyse daarvan door massafotometrie.<br...

Snelle productie van recombinante menselijke SLFN14-ribonuclease en stoichiometrische analyse door massafotometrie

Leer de recombinante productie en zuivering van hydrofobine SC16 uit Escherichia coli met fluorescerende zelfassemblagemonitoring. Dit protocol levert ≥5 mg opgeschoond eiwit voor biotechnologische toepassingen.

Recombinante productie en zuivering van hydrofobine SC16 uit Escherichia coli en monitoring van zelfassemblage met fluorescentietests (Video) | JoVE Journal

Recombinante productie en zuivering van hydrofobine SC16 uit Escherichia coli en monitoring van zelfassemblage met fluorescentietests

Meer video's verkennen