Name: Geïntegreerd protocol voor het beoordelen van meningeale lymfekatica: Cisterna magna-injectie, lymfeklierbeeldvorming, meningeale dissectie en whole-mount kleuring (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-29T14:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: Leer een geïntegreerde methode voor het evalueren van meningeale lymfevaten in muizen met cisterna magna-injectie, beeldvorming van lymfeklieren en whole-mount kleuring. Dit protocol combineert functionele en morfologische analyse binnen drie uur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol>
	<li>Louveau, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+features+of+central+nervous+system+lymphatic+vessels.">Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels.</a> Nature. 523, 337-341 (2015).</li><li>Aspelund, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dural+lymphatic+vascular+system+that+drains+brain+interstitial+fluid+and+macromolecules.">A dural lymphatic vascular system that drains brain interstitial fluid and macromolecules.</a> J Exp Med. 212, 991-999 (2015).</li><li>Sandrone, S., Moreno-Zambrano, D., Kipnis, J., Van Gijn, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+(delayed)+history+of+the+brain+lymphatic+system.">A (delayed) history of the brain lymphatic system.</a> Nat Med. 25, 538-540 (2019).</li><li>Da Mesquita, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+aspects+of+meningeal+lymphatics+in+ageing+and+alzheimer's+disease.">Functional aspects of meningeal lymphatics in ageing and alzheimer's disease.</a> Nature. 560, 185-191 (2018).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatic+vessels+regulate+brain+tumor+drainage+and+immunity.">Meningeal lymphatic vessels regulate brain tumor drainage and immunity.</a> Cell Res. 30, 229-243 (2020).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatic+vessels+mediate+neurotropic+viral+drainage+from+the+central+nervous+system.">Meningeal lymphatic vessels mediate neurotropic viral drainage from the central nervous system.</a> Nat Neurosci. 25, 577-587 (2022).</li><li>Rustenhoven, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+alterations+in+meningeal+immunity+drive+impaired+cns+lymphatic+drainage.">Age-related alterations in meningeal immunity drive impaired cns lymphatic drainage.</a> J Exp Med. 220, (2023).</li><li>Kodama, T., Hatakeyama, Y., Kato, S., Mori, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+fluid+drainage+pathways+in+lymphatic+vessels+and+lymph+nodes+using+a+mouse+model+to+test+a+lymphatic+drug+delivery+system.">Visualization of fluid drainage pathways in lymphatic vessels and lymph nodes using a mouse model to test a lymphatic drug delivery system.</a> Biomed Opt Express. 6, 124-134 (2015).</li><li>Banerjee, R., Knauer, L. A., Yang, Y. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+in+vivo+and+in+vitro+study+of+lymphatic+valve+formation+driven+by+shear+stress+signaling+pathway.">Protocol for in vivo and in vitro study of lymphatic valve formation driven by shear stress signaling pathway.</a> STAR Protoc. 4, 102141 (2023).</li><li>Akwii, R. G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+dermal+lymphatic+endothelial+cell+isolation.">Murine dermal lymphatic endothelial cell isolation.</a> J Vis Exp. (197), e65393 (2023).</li><li>Xavier, A. L. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannula+implantation+into+the+cisterna+magna+of+rodents.">Cannula implantation into the cisterna magna of rodents.</a> J Vis Exp. (135), e57378 (2018).</li><li>Hsieh, Y. T., Chen, S. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+analysis+of+neuromuscular+junctions+using+immunofluorescence.">Visualization and analysis of neuromuscular junctions using immunofluorescence.</a> Bio Protoc. 14, e5076 (2024).</li><li>Banerji, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyve-1,+a+new+homologue+of+the+cd44+glycoprotein,+is+a+lymph-specific+receptor+for+hyaluronan.">Lyve-1, a new homologue of the cd44 glycoprotein, is a lymph-specific receptor for hyaluronan.</a> J Cell Biol. 144, 789-801 (1999).</li><li>Da Mesquita, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatics+affect+microglia+responses+and+anti-abeta+immunotherapy.">Meningeal lymphatics affect microglia responses and anti-abeta immunotherapy.</a> Nature. 593, 255-260 (2021).</li><li>Betsholtz, C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+and+controversies+in+meningeal+biology.">Advances and controversies in meningeal biology.</a> Nat Neurosci. 27, 2056-2072 (2024).</li><li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+lymphatic+efflux+limits+cerebrospinal+fluid+flow+to+the+brain.">Rapid lymphatic efflux limits cerebrospinal fluid flow to the brain.</a> Acta Neuropathol. 137, 151-165 (2019).</li><li>Hablitz, L. M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glymphatic+influx+is+correlated+with+high+eeg+delta+power+and+low+heart+rate+in+mice+under+anesthesia.">Increased glymphatic influx is correlated with high eeg delta power and low heart rate in mice under anesthesia.</a> Sci Adv. 5, eaav5447 (2019).</li><li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+body+posture+on+brain+glymphatic+transport.">The effect of body posture on brain glymphatic transport.</a> J Neurosci. 35, 11034-11044 (2015).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>ACSF (Artificial Cerebrospinal Fluid)</td><td>Tocris&nbsp;&nbsp;</td><td>Cat# 3525</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 donkey anti-rat IgG (1:1000 verdunning)</td><td>Invitrogen</td><td>Cat# A-21208</td><td></td></tr><tr><td>Antifade Montage Medium</td><td>Beyotime</td><td>Cat# P0126</td><td></td></tr><tr><td>Blunt-tipped forceps</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# F12011-10</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Beyotime</td><td>Cat# ST023</td><td></td></tr><tr><td>Dekselglazen</td><td>CITOTEST</td><td>Cat# 80312-3161</td><td></td></tr><tr><td>Gebogen scherpe forceps</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# F11003-11</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat# D9542</td><td></td></tr><tr><td>Ontharingscrème</td><td>Veet</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Schaal-10 cm</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Cat# 150464</td><td></td></tr><tr><td>Weggeefbare intraveneuze (IV) infuusnaald</td><td>Zhejiang Kindly Medical Devices&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol-75%</td><td>Sinopharm Chemical Reagent&nbsp;</td><td>Cat# 80176961</td><td></td></tr><tr><td>Foetaal runderserum</td><td>Excell</td><td>Cat# FSD500</td><td></td></tr><tr><td>Filter-0.22 &micro;m</td><td>Merck Millipore&nbsp;</td><td>Cat# SLGPR33RB</td><td></td></tr><tr><td>Glijmiddelglazen</td><td>CITOTEST</td><td>Cat# 80340-3610</td><td></td></tr><tr><td>Isoamyl alcohol</td><td>Sinopharm Chemical Reagent&nbsp;</td><td>Cat# 10003218</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Spectrum</td><td>PerkinElmer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Micro forceps</td><td>Shinva Medical Instrument&nbsp;</td><td>Cat# ZD372RB&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Micro schaar</td><td>Shinva Medical Instrument&nbsp;</td><td>Cat# ZO13056R</td><td></td></tr><tr><td>Microinjectienaald (25 &micro;L)</td><td>Shanghai Gaoge Industry &amp; Trade&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Microinjectiepomp</td><td>Voyage Power</td><td>Cat# QHZS-001A</td><td></td></tr><tr><td>Muis: C57BL/6 wild-type, 8 weken oud, mannelijk&nbsp;</td><td>Cavens</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Naald-30G</td><td>Zhejiang Kindly Medical Devices&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Normale zoutoplossing</td><td>Beyotime</td><td>Cat# ST341</td><td></td></tr><tr><td>Ovalbumine, Alexa Fluor&trade; 647 Conjugaat</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Cat# O34784</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde Fix Oplossing-4%</td><td>Beyotime</td><td>Cat# P0099</td><td></td></tr><tr><td>PE-10 slang</td><td>Shanghai Qiujing Biochemische Reagens en Instrument</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Fosfaatgebufferde zoutoplossing (1x PBS)</td><td>Beyotime</td><td>Cat# ST447</td><td></td></tr><tr><td>Ratten anti-LYVE-1 (1:200 verdunning)</td><td>Santa Cruz</td><td>Cat# sc-65647</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscoop</td><td>Jonec</td><td>Cat# JSZ6</td><td></td></tr><tr><td>Stereotactisch frame</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# 68030</td><td></td></tr><tr><td>Rechte schaar</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# S12007-10</td><td></td></tr><tr><td>Spuit-1-mL&nbsp;</td><td>Zhejiang Kindly Medical Devices&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Weefselkleefstof I</td><td>3M Vetbond</td><td>Cat# 1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat# T48402</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>Cat# T8787</td><td></td></tr><tr><td>VS120 Hoog-doorvoer fluorescentiebeeldvormingssysteem</td><td>Olympus</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

geïntegreerd protocol voor het beoordelen van meningeale lymfekatica: cisterna magna-injectie, lymfeklierbeeldvorming, meningeale dissectie en whole-mount kleuring

Integrated Protocol for Assessing Meningeal Lymphatics: Cisterna Magna Injection, Lymph Node Imaging, Meningeal Dissection, and Whole-Mount Staining

Geïntegreerd protocol voor het beoordelen van meningeale lymfekatica: Cisterna magna-injectie, lymfeklierbeeldvorming, meningeale dissectie en whole-mount kleuring

Meningeal lymphatic vessels (MLVs) have emerged as critical regulators of central nervous system (CNS) homeostasis, and MLVs dysfunction has been ...

integrated-protocol-for-assessing-meningeal-lymphatics-cisterna-magna

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier beschrijven we een protocol voor het uitvoeren van de cisterna magna cannulation (CMc), een minimaal invasieve manier om verklikstoffen, substraten en signalering moleculen in de cerebrospinale vloeistof (CSF). In combinatie met de verschillende beeldvormende modaliteiten, kan CMc glymphatic systeem en CSF dynamics beoordeling, zowel als hersenen bestrijkende levering van verschillende verbindingen.

Canule implantatie in de Cisterna Magna van knaagdieren

Dit protocol beschrijft een techniek om verschillende celpopulaties in aftappen van lymfeklieren zonder veranderingen in de orgaan structuur te beeld.

Visualisering van lymfeklieren structuur en cellulaire lokalisatie met behulp van ex-vivo confocale microscopie

We beschrijven een intracisternalinjectie die een naald gebruikt die aan de punt is gebogen en die kan worden gestabiliseerd aan de schedel, waardoor het risico op schade aan de onderliggende parenchyma wordt geëlimineerd. De aanpak kan worden gebruikt voor genetische lot mapping en manipulaties van leptomeningealcellen en voor het bijhouden van cerebrospinale vloeistof beweging.

Inductie van Leptomeningeal Cellen Wijziging Via Intracisternal Injectie

Een protocol wordt gepresenteerd combineren weefsel clearing met licht blad fluorescentie microscopie (LSFM) om driedimensionale en cellulaire resolutie beelden van de lymfevaten en lymfeklieren (LN' s) het verzamelen van de cerebrospinale vloeistof (CSF) en spinale epidurale vloeistof te verkrijgen.

Driedimensionale beeldvorming van de wervellymfefelietische vasculatuur en drainage met behulp van iDISCO+ en Light Sheet Fluorescentie Microscopie

Dit artikel presenteert twee geoptimaliseerde protocollen voor het onderzoeken van residente en perifeer afgeleide immuuncellen in het centrale zenuwstelsel, waaronder de hersenen, het ruggenmerg en de hersenvliezen. Elk van deze protocollen helpt bij het vaststellen van de functie en samenstelling van de cellen die deze compartimenten bezetten onder steady state en ontstekingsomstandigheden.

Isoleren van weefsels van het centrale zenuwstelsel en bijbehorende hersenvliezen voor de downstream-analyse van immuuncellen

Om de cerebrale bloedstroomregulatie in vivo te bestuderen, zijn traditionele farmacologische methoden invasief en beschadigen ze vaak de schedel, dura en leptomeninges. In dit werk hebben we een minimaal invasieve techniek ontwikkeld die nano-injectorgeleide intracisternale magna (ICM) injectie combineert met beeldvorming met laserspikkelcontrast, waardoor de integriteit van de schedel en leptomeninges behouden blijft.

Gepaarde Cisterna Magna-nano-injectie en laserspikkelcontrastbeeldvormingstest om cerebrale bloedstroomregulatie in vivo te bestuderen

Het protocol beschrijft een methode voor het injecteren van tumorcellen via de percutane punctieroute in cisterna magna die leptomeningeale metastase bij muizen robuust induceert, waardoor trauma en extracraniële tumorbelasting worden verminderd.

Minimaal invasief Cisterna Magna-injectiemodel voor onderzoek naar leptomeningeale metastase bij muizen

Hier presenteren we een protocol om de stappen voor het anastomoseren van de diepe cervicale lymfeklier of het afferente lymfevaat met de achterste gezichtsader bij de rat duidelijk te definiëren, om de invloed van andere variabelen te minimaliseren en de uitvoering van chirurgisch onderzoek te standaardiseren.

Chirurgische protocollen voor diepe cervicale lymfoveneuze anastomose in een rattenmodel: lymfeklier- en lymfevatenanastomosen

Dit experimentele protocol demonstreert een diep cervicaal lymfebuis-canulemodel dat directe en kwantitatieve beoordeling van lymfedrainage vanuit het hoofdgebied mogelijk maakt. Het model faciliteert gedetailleerde analyse van door het centrale zenuwstelsel (CZS) afgeleide opgeloste stoffen, populaties immuuncellen en de distributie en klaring van op het CZS gerichte therapieën.

Cervicale lymfebuis-gecoruleerde rat-model voor het beoordelen van lymfetransport vanuit het hoofd en de hersenen

Dit protocol beoordeelt lymfedrainage na een fractuur door indocyanine green (ICG) nabij-infrarood beeldvorming te combineren met echografie om de opruiming van plantaire ICG en de vergroting van de lymfeklier van de popliteale lymfeklier bij muizen te kwantificeren.

De beoordeling van lymfedrainage met ICG nabij-infraroodbeeldvorming en echografie na een breuk

Leer een geïntegreerde methode voor het evalueren van meningeale lymfevaten in muizen met cisterna magna-injectie, beeldvorming van lymfeklieren en whole-mount kleuring. Dit protocol combineert functionele en morfologische analyse binnen drie uur.

Geïntegreerd protocol voor het beoordelen van meningeale lymfekatica: Cisterna magna-injectie, lymfeklierbeeldvorming, meningeale dissectie en whole-mount kleuring (Video) | JoVE Journal

Geïntegreerd protocol voor het beoordelen van meningeale lymfekatica: Cisterna magna-injectie, lymfeklierbeeldvorming, meningeale dissectie en whole-mount kleuring

Meer video's verkennen