ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>1.5 mL microtubes Axygen</td><td>Corning</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Falcon tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339651</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Falcon tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>6 well plate Falcon polystyrene microplate</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp;08-772-1B</td><td></td></tr><tr><td>Azijnzuur, 60%&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td></td></tr><tr><td>Acrylamide 30%&nbsp; en bis-acrylamide-oplossing, 29:1</td><td>Biorad</td><td>1610157</td><td></td></tr><tr><td>Aluminium vouw</td><td>Reynolds&nbsp;</td><td>U07211R0</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium Persulfate (APS)</td><td>Merck</td><td>A3678</td><td></td></tr><tr><td>Binoculaire stereomicroscoop</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Rund serum albumine (BSA)&nbsp;</td><td>Merck</td><td>&nbsp;A9418</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Merck</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>DelltaVision microscoop</td><td>Olympus</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Gedestilleerd H2O</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Disposable Filter Units met PES-filters van 0.45 &mu;m poriën</td><td>Thermo Fisher Scientific/Nalgene</td><td>09-740-63B</td><td></td></tr><tr><td>Fijne pincet FST Dumont SS</td><td>Fine Science Tools&nbsp;</td><td>11200-33</td><td></td></tr><tr><td>geit (IgG H+L) sterk geadsorbeerd&nbsp; anti-rat gelabeld met AlexaFluor647</td><td>Invitrogen</td><td>A-21247</td><td></td></tr><tr><td>geit (IgG H+L) sterk geadsorbeerd anti-konijn gelabeld met AlexaFluor568</td><td>Invitrogen</td><td>A-21428</td><td></td></tr><tr><td>geit (IgG H+L) sterk geadsorbeerd anti-guinea pig gelabeld met AlexaFluor488&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A-11073</td><td></td></tr><tr><td>Handschoenen</td><td>Merck</td><td>Z412392</td><td></td></tr><tr><td>Kweekkamers / kas / of veld</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>Merck</td><td>D0632</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E6758</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>Masking tape 3M</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-047-259</td><td></td></tr><tr><td>Maïszaden</td><td>NA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscoop 22 x 22 mm-1,5 glas dekglasjes&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542-B</td><td></td></tr><tr><td>Microscoop 22 x 22 mm-H dekglasjes&nbsp;</td><td>Deckgläser, Zeiss</td><td>474030-9020-000</td><td></td></tr><tr><td>Microscoopglaasjes</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-230-900</td><td></td></tr><tr><td>Microscoop schuifdoos</td><td>Fisher Scientific,</td><td>03-448-9</td><td></td></tr><tr><td>Micropipetten P20, P200, P1000</td><td>Merck</td><td>CLS4069</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merck</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Nagellak</td><td>Electron Microscopy Science</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Papierhanddoeken</td><td>Merck</td><td>Z188956</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Merck</td><td>P7668</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde 16% oplossing&nbsp;</td><td>Electron Microscopy Grade</td><td>&nbsp;15710</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Merck</td><td>P4474</td><td></td></tr><tr><td>Kunststof doos met deksel</td><td>Tupperware</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine</td><td>Merck</td><td>P4707</td><td></td></tr><tr><td>Primaire antilichamen (rat anti-ZmAFD1, konijn anti-ZmASY1, guinea-pig anti ZmZYP1)</td><td>NA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prolong Antifading</td><td>Molecular Probes</td><td>P36934</td><td></td></tr><tr><td>Petrischaal (D x H: 35 mm x 10 mm</td><td>Corning</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>Petrischaal regelmatige grootte</td><td>Merck</td><td>P5731</td><td></td></tr><tr><td>PIPES</td><td>Merck</td><td>P1851</td><td></td></tr><tr><td>Pipet tips (0,5-10 uL) steriel&nbsp;</td><td>Merck/Corning</td><td>AXYT300</td><td></td></tr><tr><td>Pipet tips (200 uL) steriel</td><td>Merck/Corning</td><td>AXYT200Y&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pipet tips (1000 uL) steriel</td><td>Merck/Corning</td><td>AXYT1000BRS</td><td></td></tr><tr><td>Scheermesje - eenzijdig</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>Schommelend platform shaker</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Spermine</td><td>Merck</td><td>85590</td><td></td></tr><tr><td>Spermidine&nbsp;</td><td>Merck</td><td>S2626</td><td></td></tr><tr><td>Sorbitol</td><td>Merck</td><td>S8143</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Merck</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Ultra pure Acrylamide</td><td>Invitrogen</td><td>15512023</td><td></td></tr><tr><td>Vacuum</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

driedimensionale immunolokalisatie in maïsmeiocyten

Three-Dimensional Immunolocalization In Maize Meiocytes

Driedimensionale immunolokalisatie in maïsmeiocyten

During meiotic prophase I, the physical configuration of chromosomes varies widely across developmental stages, fortunately these stage-specific ...

Ons onderzoek richt zich op de ontwikkeling van een 3D-benadering om mannelijke meiocyten van maïs te bestuderen en meiotische eiwitten in individuele cellen te visualiseren. Naast maïs kan dit protocol worden toegepast om meiocyten in rijst, rogge, gerst en tarwe te bestuderen. Begin met het verkrijgen van maïsplanten in het V13-stadium, waarbij de bloeiwijzen nog in de stengel groeien.Druk tijdens de week van de mitotische fixatie van de helmknoppen met handschoenen aan zachtjes op de verdikte stengel bij de zwelling om te controleren of deze zacht genoeg is om open te snijden. Bereid na het maken van de benodigde buffers een bevochtigingskamer voor door vijf tot 10 vochtige papieren handdoeken in een plastic doos te plaatsen. Verwijder overtollig water uit de kamer.Snijd met een scheermes de stengel open ter hoogte van de bloeiwijze om de pluimtakken en zijtakken bloot te leggen. Nadat de zijtakken zijn gedisseceerd en verzameld, worden deze in de handdoeken van de bevochtigingskamer gewikkeld, terwijl de kamer op kamertemperatuur wordt gehouden. Verzamel met een stereomicroscoop verse helmknoppen uit de bloempjes in een Petri-schaal van 35 millimeter met twee milliliters van één X buffer A of BA. Identificeer de mitotische stadia op basis van grootte en kleur.Nadat de helmknoppen naar een nieuwe Petri-schaal van 35 millimeter zijn overgebracht, voegt u drie milliliter fixeeroplossing toe aan de helmknoppen. Sluit de Petri-schaal af met parafilm om verdamping van formaldehyde te voorkomen. Plaats de Petri-schaal van 35 millimeter op de grotere Petri-schaal die op een rotatieve schudmachine is geplaatst, ingesteld op 40 tot 60 RPM bij kamertemperatuur gedurende 45 minuten.Spoel de helften van de meeldraden met drie milliliters 1X BA. Nadat de meeldraden zijn overgebracht naar een kleine Petrischaal, wordt de schaal afgesloten en 45 minuten op een rotatieschudder bij kamertemperatuur geplaatst met een snelheid van 40 tot 60 RPM. Verplaats de meeldraden met schone pincetten naar een kleine Petrischaal van 35 millimeter die drie milliliters 1X BA bevat.Zodra de Petrischaal stevig is afgesloten met parafilm, plaatst u de kleine Petrischaal in een grotere Petrischaal. Nadat u deze heeft afgedekt met aluminiumfolie, bewaart u het monster bij vier graden Celsius tot gebruik. Bereid op dag één twee milliliter acrylamide-oplossing door gelijke volumes acrylamide en twee XBA te mengen.Ontgas de acrylamide-oplossing onder vacuüm gedurende vijf tot 10 minuten voordat natriumsulfiet en ammoniumpersulfaat worden toegevoegd. Aliquoteer 100 µL van een één-op-één mengsel van acrylamide en 2X BA in 1,5 ml buisjes, afhankelijk van het aantal voorbereide slides. Plaats stukken parafilm van twee centimeter bij twee centimeter over een petrischaal en positioneer deze onder een dissectiestereoscoop.Nadat de pipetpunt met een schaar is afgeknipt, pipetteert u 50 µL BA-oplossing met antheren op de parafilm. Pipetteer 25 µL BA-oplossing op een ander gebied van de parafilm. Snijd vervolgens, terwijl u de antheren met een pincet vasthoudt, de uiteinden ervan af met een scalpel.Zodra de meiocyten zijn uitgeperst, gebruikt u een pipet om ze over te brengen naar de 25 µL BA-druppel en mengt u deze voorzichtig. Pipetteer 10 µL van het meiocytenmengsel op een apart dekglas. Voeg snel vijf µL natriumsulfiet en vijf µL ammoniumpersulfaat toe aan een 1,5 mL buisje met acrylamide en twee XBA.Pipetteer vijf microliters van dit mengsel op het dekglas en meng het met de meiocyten. Plaats een met polylysine gecoat dekglas er bovenop onder een hoek van 45 graden. Laat het mengsel 30 tot 50 minuten polymeriseren bij kamertemperatuur en scheid vervolgens voorzichtig de dekglazen met een scheermesje.Plaats ze vervolgens met de zijde van het kussentje naar boven in een Petrischaal. Spoel het dekglas gedurende twee uur bij kamertemperatuur met één milliliter 1XPBS aangevuld met één millimolair ethylenediaminetetra-azijnzuur, of EDTA, en 1% Triton. Bereid primaire antilichamen van verschillende gastsoorten voor en combineer deze om onderscheidende signalen tijdens de detectie te garanderen.Voeg 50 µL van het verdunde primaire antilichaam toe aan het midden van het dekglas met het kussentje. Plaats de Petrischaal vervolgens gedurende de nacht in een bevochtigingskamer. Bereid op dag twee 500 mL wasbuffer voor bestaande uit 1x PBS, 0,1% Tween 20 en 1 mM EDTA.Verwijder de overnight-oplossing met een pipet. Was het dekglas twee keer met één milliliter wasbuffer. Na het verwijderen van de buffer wordt opnieuw één milliliter wasbuffer toegevoegd en volgt een incubatie van één uur bij kamertemperatuur.Herhaal deze wasstap nog zeven keer. Dek na de laatste wasbeurt de schaal af en laat deze een nacht in een bevochtigingskamer staan. Bereid de secundaire antilichamen voor door ze te verdunnen in een verhouding van 1:50 in blokkeringsbuffer.Voeg na het verwijderen van de wasoplossing 50 µL van het verdunde secundaire antilichaam toe aan het centrum van elk kussen. Plaats de Petri-schaal vervolgens gedurende twee uur bij kamertemperatuur in een bevochtigingskamer. Verwijder na afloop de oplossing uit de putjes en was vier keer met 1 mL wasbuffer, telkens gedurende één uur bij kamertemperatuur.Was de put met één milliliter PBS gedurende 10 minuten en herhaal dit proces nog twee keer. Voeg 500 microliter DAPI, bereid in een eindconcentratie van één microgram per milliliter, toe aan de put en incubeer dit gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur. Haal het verlengde goud uit de vriezer bij vier graden Celsius en laat het ontdooien tot kamertemperatuur.Was de objectglazen gedurende 30 minuten met één milliliter PBS en herhaal dit twee keer. Nadat de laatste wassolution is verwijderd, worden twee druppels prolonged antifade in het midden van het kussentje aangebracht. Zodra het dekglas uit de put is getild, wordt het op de gelabelde objectglazen gemonteerd.Verwijder met een vacuümpomp overtollig glycerol van de randen van het dekglas en verzegel dit met twee lagen nagellak. Observeer de preparaten onder een microscoop met gebruik van geschikte excitatiegolflengten en filters om beelden vast te leggen. DAPI-kleuring toonde een duidelijke kern en chromatinekleuring, samen met zwakkere natuurlijke cytoplasmatische kleuring van plastiden- en mitochondriaal DNA.Afwezigheid van first division one of AFD1, asynaptic one of ASY1 en Zipper1 of ZYP1 gelokaliseerd op chromosomen en in het cytoplasma tijdens het preleptineem. In latere stadia concentreerde het signaal zich op het chromosoom, terwijl aanzienlijke hoeveelheden ZYP1 in het cytoplasma bleven vóór volledige synapsis. De meiotische cohesine AFD1 vormde pas na het zygonema een lineaire structuur.Tegelijkertijd met de vorming van lineaire filamenten van het synaptonemaal complex werd het ASY1-signaal relatief zwak nadat ZYP1 en AFD1 in lineaire structuren waren geladen. Dit protocol stelt onderzoekers in staat om eiwitco-lokalisatie en dynamiek, natuurlijke subcellulaire lokalisatie, 3D-chromosomale architectuur, meiotische progressie en fasering te bestuderen.De belangrijkste uitdaging in dit protocol is het zorgvuldig selecteren van compatibele combinaties van primaire en secundaire antilichamen. Studies kunnen voortbouwen op dit werk door mannelijke en vrouwelijke meiose te vergelijken om het moleculaire mechanisme ten grondslag aan athelchasmi te onderzoeken.

three-dimensional-immunolocalization-in-maize-meiocytes

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In situ hybridisatie voor de precieze lokalisatie van de transcripten in planten

Een manier om nieuwe inzichten te verkrijgen in de complexiteit van de inflammatoire hersenreactie wordt gepresenteerd. We beschrijven immunofluorescence-gebaseerde protocollen gevolgd door driedimensionale confocale analyse om het patroon van co-expressie van microglia/macrofaagfenotypemarkers in een muismodel van focale ischemie te onderzoeken.

Drie-dimensionale confocale analyse van microglia / macrofagen Markers van Polarisatie in Experimentele Hersenletsel

Hoge-resolutie intravitale beeldvorming met verbeterd contrast tot 120 urn diepte lymfklieren van volwassen muizen wordt bereikt door ruimtelijk moduleren van de excitatie patroon van een multi-focale twee-foton microscoop. In 100 micrometer diepte gemeten we resoluties van 487 nm (lateraal) en 551 nm (axiaal), waardoor verstrooiing en diffractie grenzen omzeilen.

Hoogst vastbesloten Intravitale Striped-verlichting Microscopie van Germinal Centers

De indirecte immunofluorescentie protocol beschreven in dit artikel laat de detectie en de lokalisatie van eiwitten in de muis borstklier. Een complete methode wordt gegeven voor te bereiden borstklier monsters, om immunohistochemie uit te voeren, om de afbeelding van het weefsel secties met behulp van fluorescentie microscopie, en om beelden te reconstrueren.

Indirecte Immunofluorescentie op Bevroren Secties van Muis borstklier

Cilia ontwikkeling is essentieel voor goede organogenese. Dit protocol beschrijft een geoptimaliseerde methode om te etiketteren en ciliated cellen van de zebravis visualiseren.

Visualiseren van Multiciliated cellen in de zebravis via een gecombineerde Protocol van hele Mount fluorescentie In Situ hybridisatie en immunofluorescentie

Dit protocol presenteert hoe te leven van beeld en analyseren van de shoot apicale meristems van verschillende plantensoorten met behulp van laser scanning confocal microscopie.

Confocale Live beeldvorming van Shoot apicale Meristems van verschillende plantensoorten

We presenteren hier een verbeterd protocol voor de hele montering van drosophila-teelballen, geschikt voor confocale microscopie en ook reproduceerbaar en betrouwbaar labelen mogelijk. We illustreren dit protocol door 3D-representatie en kwantificering van colocalisatie-experimenten op de grote S4-S5 spermatocyten.

Immunostaining van Whole-Mount Drosophila Testes voor 3D Confocale Analyse van Grote Spermatocyten

Een agrobacterium-based injection (agroinjectie) protocol wordt gepresenteerd voor de inenting van vossenstaart mozaïek virus en suikerriet mozaïek virusclones in maïs zaailingen. Inenting op deze manier leidt tot virale infectie, virus-geïnduceerde gen-uitschakeling van markergenen en virale overexpressie van GFP.

Directe agroinoculatie van maïszaailingen door injectie met recombinant vossenstaartmozaïekvirus en suikerrietmozaïekvirus Infectieuze klonen

Maïsblad primordia zijn diep verwarmd en gerold, waardoor ze moeilijk te bestuderen zijn. Hier presenteren we methoden voor het voorbereiden van dwarsdoorsneden en ontrolde hele bergen van maïsblad primordia voor fluorescentie en confocale beeldvorming.

Verbeterde methoden voor het voorbereiden van dwarsdoorsneden en het uitrollen van hele bergen van primordia van maïsbladeren voor fluorescentie en confocale beeldvorming

Dit manuscript beschrijft een geoptimaliseerd inoculatieprotocol dat gebruik maakt van losse maïsbladomhulsels voor reproduceerbare cytologische, fysiologische en moleculaire studies van maïsinteracties met schimmelpathogenen van planten. De bladomhulsels vergemakkelijken real-time observatie van cellulaire interacties tussen de levende plant en de schimmel in niet-gefixeerde weefsels.

Losse maïsomhulsels voor levende beeldvorming van infectie door schimmelpathogenen van bladmaïs

Chromosoombeweging tijdens de meiotische profase is een slecht begrepen fenomeen dat fundamenteel is voor sporenvorming. Dit protocol beschrijft een methode voor het verkrijgen, analyseren en kwantificeren van centromeerbewegingen tijdens de meiotische profase in mannelijke meiocyten van Arabidopsis thaliana .

Live beeldvorming karakterisering van centromeerbewegingen tijdens mannelijke meiotische profase in Arabidopsis thaliana

255 Views.  National Autonomous University of Mexico (UNAM). Ons onderzoek richt zich op het ontwikkelen van een 3D-aanpak om maïs mannelijke meiocyten te bestuderen en meiotische eiwitten in enkele cellen te visualiseren. Naast maïs, kan dit protocol worden toegepast om meiocyten in rijst, rogge, gerst, tarwe te bestuderen. Om te beginnen, verkrijg maïsplanten in de V13-fase met influorescenties die nog binnen de stengel groeien.Tijdens de week van meiotische anther-fixatie, druk zachtjes op de vergrote stengel bij de bult terwijl u handscho...

Driedimensionale immunolokalisatie in maïsmeiocyten

Meer video's verkennen