ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol>
	<li>Gao H, Gao S, Kan G, Valentovich LN, An Y. Research progress of base editing and prime editing tools based on the CRISPR/Cas system. Mol Ther Nucleic Acids. 2025;36.</li>
	<li>Chen PJ, Hussmann JA, Yan J, et al. Enhanced prime editing systems by manipulating cellular determinants of editing outcomes. Cell. 2021;184(22):5635&#8211;5652. doi:10.1016/j.cell.2021.09.018.</li>
	<li>Newby GA, Yen JS, Woodard KJ, et al. Base editing of haematopoietic stem cells rescues sickle cell disease in mice. Nature. 2022;595(7866):295-302. doi:10.1038/s41586-021-03609-w.</li>
	<li>Sousa AA, Hemez C, Lei L, et al. Systematic optimization of prime editing for the efficient functional correction of CFTR F508del in human airway epithelial cells. Nat Biomed Eng. 2024;9(1):7. doi:10.1038/s41551-024-01233-3.</li>
	<li>Mayuranathan T, Newby GA, Feng R, et al. Potent and uniform fetal hemoglobin induction via base editing. Nat Genet. 2023;55(7):1210-1217.</li>
	<li>He W, Zhang X, Zou Y, et al. Effective synthesis of high-integrity mRNA using in vitro transcription. Molecules. 2024;29(11).</li>
	<li>Popova PG, Lagace MA, Tang G, Blakney AK. Effect of in vitro transcription conditions on yield of high-quality messenger and self-amplifying RNA. Eur J Pharm Biopharm. 2024;198.</li>
	<li>Zhang F, Wang Y, Wang X, et al. RT-IVT method allows multiplex real-time quantification of in vitro transcriptional mRNA production. Commun Biol. 2023;6(1).</li>
	<li>Montague TG, Cruz JM, Gagnon JA, Church GM, Valen E. CHOPCHOP: a CRISPR/Cas9 and TALEN web tool for genome editing. Nucleic Acids Res. 2014;42(W1)-W407.</li>
	<li>Concordet JP, Haeussler M. CRISPOR: intuitive guide selection for CRISPR/Cas9 genome editing experiments and screens. Nucleic Acids Res. 2018;46(W1)-W245.</li>
	<li>Mohr SE, Hu Y, Ewen-Campen B, Housden BE, Viswanatha R, Perrimon N. CRISPR guide RNA design for research applications. FEBS J. 2016;283(17):3232-3245.</li>
	<li>Huang TP, Newby GA, Liu DR. Precision genome editing using cytosine and adenine base editors in mammalian cells. Nat Protoc. 2021;16(2):1089-1106. doi:10.1038/s41596-020-00450-9.</li>
	<li>Doman JL, Sousa AA, Randolph PB, Chen PJ, Liu DR. Designing and executing prime editing experiments in mammalian cells. Nat Protoc. 2023;18(6):1780-1818. doi:10.1038/s41596-022-00724-4.</li>
	<li>Chicaybam L, Barcelos C, Peixoto B, et al. An efficient electroporation protocol for the genetic modification of mammalian cells. Front Bioeng Biotechnol. 2017;4:99.</li>
	<li>Clement K, Rees H, Canver MC, et al. CRISPResso2 provides accurate and rapid genome editing sequence analysis. Nat Biotechnol. 2019;37(3):224-230.</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1M Tris-HCl, pH 8.0</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15568025</td><td></td></tr><tr><td>Agarose&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>R0491&nbsp;</td><td>Agarose UltraPure 16500500 ThermoFisher 500g</td></tr><tr><td>AMPure XP SPRI Beads&nbsp;</td><td>Beckman Coulter&nbsp;</td><td>B23317&nbsp;</td><td>A63880, AMPure XP Beads for DNA Cleanup, 5 mL, Beckman Coulter</td></tr><tr><td>ATP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CEPT Cocktail&nbsp;</td><td>Bio-Techne / Tocris&nbsp;</td><td>7200&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CleanCap AG Reagent&nbsp;</td><td>TriLink Biotechnologies&nbsp;</td><td>N-7113&nbsp;</td><td>CleanCap AG 3&prime; OMe CleanScript IVT Kit, 125 x 20 &micro;L rxns,&nbsp;</td></tr><tr><td>CTP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Custom DNA Primers&nbsp;</td><td>Integrated DNA Technologies&nbsp;</td><td>Custom&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DNA Loading Dye&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>B7024&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dulbecco&rsquo;s Phosphate Buffered Saline)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>14190-144&nbsp;</td><td>D8537-100ML</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Modified Eagle Medium (DMEM)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>11965-092&nbsp;</td><td>DMEM High Glucose [4,500 mg/L] with [4.0 mM] L-Glutamine and [110 mg/L] Sodium Pyruvate, 500 mL</td></tr><tr><td>Gel Extraction Kit&nbsp;</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>28704&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>GTP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Illumina Indexing Primers&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>FC-131-2001&nbsp;</td><td>10uM stocks</td></tr><tr><td>Illumina MiSeq Sequencer&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>SY-410-1003&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lithium Chloride RNA Precipitation Solution&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9480&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lonza 4D Nucleofector System&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>AAF-1002X&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ssRNA Ladder NEB</td><td>NEB</td><td>N0362S</td><td>5ul/ reactie</td></tr><tr><td>MiSeq Reagent Kit v3 (300 cycles)&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>MS-102-3002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>N1-Methyl-Pseudouridine-5&prime;-Triphosphate&nbsp;</td><td>TriLink Biotechnologies&nbsp;</td><td>N-1081&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NEBNext Ultra II Q5 Master Mix&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>M0544&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Nuclease-Free Water&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9937&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NucleoCounter NC Slide A8&nbsp;</td><td>ChemoMetec&nbsp;</td><td>941-0008&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NucleoCounter NC-3000&nbsp;</td><td>ChemoMetec&nbsp;</td><td>NC-3000&nbsp;</td><td>10ul van celoplossing en 0.4167 &mu;L van DAPI-oplossing&nbsp;</td></tr><tr><td>Solution 15, Hoechst 33342, 1 mL 910-3015 Chemometec</td><td>Chemometec</td><td>910-3013&nbsp;</td><td>500 &mu;g/ml ~ 0.9 mM ~ 0.05%</td></tr><tr><td>Nucleocuvette Strips&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>V4XP-3032&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>P3 Primary Cell Nucleofector Solution&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>V4XP-3032&nbsp;</td><td>1 x 0.675 mL P3 Primary Cell Nucleofector&reg; Solution</td></tr><tr><td>Phusion High-Fidelity DNA Polymerase&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>F530L&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>EO0491&nbsp;</td><td>Hoeveelheid: 1mL, >600 U/mL (~20 mg/mL)</td></tr><tr><td>Q5 High-Fidelity DNA Polymerase&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>M0491&nbsp;</td><td>2.000 eenheden/ml 100 eenheden&nbsp;</td></tr><tr><td>QIAquick PCR Purification Kit&nbsp;</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>28104&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit dsDNA High Sensitivity Assay Kit&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Q33230&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit RNA Broad Range Assay Kit&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Q10211&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit&trade; Assay Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q32856</td><td></td></tr><tr><td>RNA Gel Loading Dye (2x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R0641</td><td>5ul/ reactie</td></tr><tr><td>RNA Purification Kit&nbsp;</td><td>Zymo Research&nbsp;</td><td>R1017&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNase Away&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>1236B62&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>SDS, 10% oplossing</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15553027</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Gold Nucleic Acid Gel Stain</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S11494</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Safe DNA Gel Stain&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>S33102&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Synthetic sgRNA / pegRNA&nbsp;</td><td>Synthego / IDT&nbsp;</td><td>Custom&nbsp;</td><td>2ug&nbsp;</td></tr><tr><td>HiScribe T7 High Yield RNA Synthesis Kit, 250 reacties</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>E2040L</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12604013&nbsp;</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>TE buffer (Tris-EDTA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp;AM9849</td><td>TE, pH 8.0, RNase-vrij Thermo</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>25200056&nbsp;</td><td>1X&nbsp;</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS), Premium, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5670701</td><td></td></tr><tr><td>mTSER PLUS&nbsp;</td><td>STEM cell Technologies</td><td># 100-0276</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin Mixture 10.000 ug/mL, 100 mL, 4-pack</td><td>Quality Biological</td><td>120-095

genoombewerking in primaire zoogdiercellen via elektroporatie van editor-rna

Genome Editing in Primary Mammalian Cells via Electroporation of Editor RNA

Genoombewerking in primaire zoogdiercellen via elektroporatie van editor-RNA

CRISPR editors including nucleases, base editors, and prime editors can efficiently correct disease-causing genetic variants or disrupt target genes. ...

genome-editing-primary-mammalian-cells-via-electroporation-editor

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Designer nucleasen zoals zinkvinger nucleasen (ZFNs) en transcriptie activator-achtige effector nucleasen (Talens) kan worden gebruikt om het genoom van de muis implantatie embryo's wijzigt activeren zowel de homologe eind mee (NHEJ) en homologe recombinatie (HR) wegen. Deze voorschotten in staat de snelle generatie van muizen met precieze genetische modificaties.

Mouse Genome engineering behulp Designer Nucleasen

Met behulp van een voorgemonteerd Cas9 is ribonucleoprotein complex (RNP) een krachtige methode voor het bewerken van nauwkeurige en efficiënte genoom. Hier, wijzen wij op het nut ervan over een breed scala van cellen en organismen, met inbegrip van de primaire menselijke cellen en beide klassieke en opkomende modelorganismen.

Verbeterde genoom bewerken met Cas9 Ribonucleoprotein in verschillende cellen en organismen

CRISPR-Cas is een krachtige technologie om ingenieur van het complex genoom van planten en dieren. Hier, detail we een protocol bij het menselijk genoom met behulp van verschillende Cas enzym efficiënt te bewerken. We benadrukken belangrijke overwegingen en ontwerpparameters bewerken efficiëntie te optimaliseren.

Genoom bewerken in zoogdieren cellijnen met behulp van CRISPR-Cas

Hier gepresenteerd is een protocol voor efficiënte SCHERPEr/Cas9 ribonucleoproteã-gemedieerde gen bewerken in zoogdiercellen met behulp van buis Electroporation.

SCHERPEr/Cas9 Ribonucleoproteã-gemedieerde nauwkeurige Gene bewerking door buis Electroporation

Dit protocol beschrijft technieken voor het isoleren van primaire muizenhepatocyten uit de lever en het elektropoderen van CRISPR-Cas9 als ribonucleoproteïnen en mRNA om een therapeutisch doelgen geassocieerd met een erfelijke stofwisselingsziekte van de lever te verstoren. De beschreven methoden resulteren in een hoge levensvatbaarheid en hoge niveaus van genmodificatie na elektroporatie.

Elektroporatie-gemedieerde toediening van Cas9 ribonucleoproteïnen en mRNA in vers geïsoleerde primaire muizenhepatocyten

Hier beschrijven we een eenvoudige techniek die bedoeld is voor de efficiënte generatie van genetisch gemodificeerde muizen, CRISPR RNP Electroporation of Zygotes (CRISPR-EZ). Deze methode levert bewerkingsreagentia door elektroporatie in embryo's met een efficiëntie van bijna 100%. Dit protocol is effectief voor puntmutaties, kleine genomische inserties en deleties in zoogdierembryo's.

Efficiënte genoombewerking van muizen door CRISPR-elektroporatie van zygoten

Dit protocol beschrijft de procedure voor genoombewerking in van beenmerg afgeleide macrofagen van muizen met behulp van Cas9-sgRNA ribonucleoproteïnecomplexen die in vitro zijn geassembleerd en door elektroporatie worden afgeleverd.

Zeer efficiënte genverstoring in primaire beenmerg-afgeleide macrofagen met behulp van geëlektropoleerde Cas9-sgRNA-complexen

Dit protocol presenteert een geoptimaliseerde aanpak voor het produceren van genetisch gemodificeerde rattenmodellen. Adeno-geassocieerd virus (AAV) wordt gebruikt om een DNA-reparatiesjabloon af te leveren, en elektroporatie wordt gebruikt om CRISPR-Cas9-reagentia af te leveren om het genoombewerkingsproces in een 2-cellig embryo te voltooien.

CRISPR-Cas9 Genoombewerking van rattenembryo's met behulp van adeno-geassocieerd virus (AAV) en elektroporatie van 2-celembryo's

Het protocol beschrijft methoden voor geclusterde, regelmatig tussenliggende korte palindromale herhalingen (CRISPR)-gebaseerde epigenoombewerking in menselijke cellijnen met behulp van plasmide-DNA-transfectie en mRNA-nucleofectie.

CRISPR-epigenoombewerking in menselijke cellen met behulp van plasmide-DNA-transfectie en mRNA-nucleofectieafgifte

De efficiëntie van de Improved Genome Editing via Oviductal Nucleic Acids Delivery (I-GONAD)-methode is vergelijkbaar met traditionele micro-injectie, waarbij zygoten moeten worden verzameld bij donorvrouwtjes en moeten worden overgedragen aan pseudo-zwangere vrouwtjes. Dit protocol demonstreert zijn effectiviteit door CRISPR/Cas9-geïnduceerde mutaties te introduceren in de ROSA26-locus op chromosoom 6.

Verbeterde genoombewerking via oviductale nucleïnezuren Op levering gebaseerde in vivo elektroporatietechniek voor het genereren van knock-out muizen

Johns Hopkins University School of Medicine.  De afgifte van genoomredacteuren als RNA's is een bijzonder krachtig middel om de genomen van primaire zoogdiercellen en cellijnen te modificeren. Het doel van dit protocol is om genoomeditoren als mRNA te leveren in primaire zoogdiercellen en cellenlijnen, gevolgd door gerichte Illumina-sequencing en analyse om bewerkingsuitkomsten te kwantificeren.

Genoombewerking in primaire zoogdiercellen via elektroporatie van editor-RNA

Meer video's verkennen