Name: Micro-injectie van interleukine-6 in de bloedbaan van TSC-zebravislarven om neuropsychiatrische aandoeningsachtige gedragingen te bestuderen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-26T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Leer micro-injectie van IL-6 in de ductus van Cuvier bij TSC-zebravislarven om systemische ontsteking en neuropsychiatrische gedragsveranderingen te bestuderen. Deze methode ondersteunt onderzoek naar gen-omgevingsinteracties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Winden, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuberous+sclerosis+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Tuberous sclerosis complex.</a> Nat Rev Dis Primers. 12, 11(2026).</li>
<li>Ramani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+interface+of+tuberous+sclerosis+complex+and+autism+spectrum+disorder%3A+insights+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">The clinical interface of tuberous sclerosis complex and autism spectrum disorder: insights and future directions.</a> Neurol Sci. 46 (6), 2571-2580 (2025).</li>
<li>Lyall, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+changing+epidemiology+of+autism+spectrum+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Public+Health%22%5BJournal%5D)">The changing epidemiology of autism spectrum disorders.</a> Annu Rev Public Health. 38, 81-102 (2017).</li>
<li>Nazeer, A., Ghaziuddin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autism+spectrum+disorders%3A+clinical+features+and+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Autism spectrum disorders: clinical features and diagnosis.</a> Pediatr Clin North Am. 59, 19-25 (2012).</li>
<li>Kern, J. K., Geier, D. A., Sykes, L. K., Geier, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relevance+of+neuroinflammation+and+encephalitis+in+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Relevance of neuroinflammation and encephalitis in autism.</a> Front Cell Neurosci. 9, 519(2016).</li>
<li>Careaga, M., Murai, T., Bauman, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+immune+activation+and+autism+spectrum+disorder%3A+from+rodents+to+nonhuman+and+human+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Maternal immune activation and autism spectrum disorder: from rodents to nonhuman and human primates.</a> Biol Psychiatry. 81 (5), 391-401 (2017).</li>
<li>Croonenberghs, J., Bosmans, E., Deboutte, D., Kenis, G., Maes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+inflammatory+response+system+in+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychobiology%22%5BJournal%5D)">Activation of the inflammatory response system in autism.</a> Neuropsychobiology. 45, 1-6 (2002).</li>
<li>Girgis, R. R., Kumar, S. S., Brown, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cytokine+model+of+schizophrenia%3A+emerging+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">The cytokine model of schizophrenia: emerging therapeutic strategies.</a> Biol Psychiatry. 75 (4), 292-299 (2014).</li>
<li>Heuer, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+exploratory+examination+of+neonatal+cytokines+and+chemokines+as+predictors+of+autism+risk%3A+the+early+markers+for+autism+study%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">An exploratory examination of neonatal cytokines and chemokines as predictors of autism risk: the early markers for autism study.</a> Biol Psychiatry. 86 (4), 255-264 (2019).</li>
<li>Sasayama, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+correlation+between+serum+cytokine+levels+and+cognitive+abilities+in+children+with+autism+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22J+Intell%22%5BJournal%5D)">Negative correlation between serum cytokine levels and cognitive abilities in children with autism spectrum disorder.</a> J Intell. 5 (2), 19(2017).</li>
<li>Banks, W. A., Kastin, A. J., Gutierrez, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penetration+of+interleukin-6+across+the+murine+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Penetration of interleukin-6 across the murine blood-brain barrier.</a> Neurosci Lett. 179 (1-2), 53-56 (1994).</li>
<li>Otkıran, G., Erdoğan, M. A., Uyanıkgil, Y., Erbaş, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prenatal+interferon-alpha+exposure+induces+autism-like+neurobehavioral+and+neurochemical+alterations+in+male+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Prenatal interferon-alpha exposure induces autism-like neurobehavioral and neurochemical alterations in male offspring.</a> J Neuroimmune Pharmacol. 21, 4(2026).</li>
<li>Smith, S. E. P., Li, J., Garbett, K., Mirnics, K., Patterson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+immune+activation+alters+fetal+brain+development+through+interleukin-6%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Maternal immune activation alters fetal brain development through interleukin-6.</a> J Neurosci. 27 (40), 10695-10702 (2007).</li>
<li>Bedell, V. M., Meng, Q. C., Pack, M. A., Eckenhoff, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+vertebrate+model+to+reveal+neural+substrates+underlying+the+transitions+between+conscious+and+unconscious+states%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A vertebrate model to reveal neural substrates underlying the transitions between conscious and unconscious states.</a> Sci Rep. 10, 15789(2020).</li>
<li>Belo, M. A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+to+study+inflammation%3A+a+tool+for+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model to study inflammation: a tool for drug discovery.</a> Biomed Pharmacother. 144, 112310(2021).</li>
<li>Ka, J., Pak, B., Han, O., Lee, S., Jin, S. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+transcriptomic+changes+between+zebrafish+and+mice+upon+high+fat+diet+reveals+evolutionary+convergence+in+lipid+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Comparison of transcriptomic changes between zebrafish and mice upon high fat diet reveals evolutionary convergence in lipid metabolism.</a> Biochem Biophys Res Commun. 530 (4), 638-643 (2020).</li>
<li>Li, Y., Hu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+multi-site+infection+model+in+zebrafish+larvae+for+studying+Staphylococcus+aureus+infectious+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Genet+Genomics%22%5BJournal%5D)">Establishment of multi-site infection model in zebrafish larvae for studying Staphylococcus aureus infectious disease.</a> J Genet Genomics. 39 (9), 521-534 (2012).</li>
<li>Nicoli, S., Ribatti, D., Cotelli, F., Presta, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+tumor+xenografts+induce+neovascularization+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mammalian tumor xenografts induce neovascularization in zebrafish embryos.</a> Cancer Res. 67 (7), 2927-2931 (2007).</li>
<li>Cao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carboxyl+graphene+oxide+nanoparticles+induce+neurodevelopmental+defects+and+locomotor+disorders+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Carboxyl graphene oxide nanoparticles induce neurodevelopmental defects and locomotor disorders in zebrafish larvae.</a> Chemosphere. 270, 128611(2021).</li>
<li>Martini, D., Pucci, C., Gabellini, C., Pellegrino, M., Andreazzoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+the+natural+alkaloid+berberine+affects+cardiovascular+system+morphogenesis+and+functionality+during+zebrafish+development%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Exposure to the natural alkaloid berberine affects cardiovascular system morphogenesis and functionality during zebrafish development.</a> Sci Rep. 10, 17358(2020).</li>
<li>Sun, M., et al. Robotic cardinal vein microinjection of zebrafish larvae based on 3D positioning. 2021 IEEE International Conference on Robotics and Automation (ICRA), Xi'an, China, , (2021).</li>
<li>Kedra, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TrkB+hyperactivity+contributes+to+brain+dysconnectivity%2C+epileptogenesis%2C+and+anxiety+in+zebrafish+model+of+tuberous+sclerosis+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">TrkB hyperactivity contributes to brain dysconnectivity, epileptogenesis, and anxiety in zebrafish model of tuberous sclerosis complex.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (4), 2170-2179 (2020).</li>
<li>Kim, S. -H., Speirs, C. K., Solnica-Krezel, L., Ess, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+model+of+tuberous+sclerosis+complex+reveals+cell-autonomous+and+non-cell-autonomous+functions+of+mutant+tuberin%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Zebrafish model of tuberous sclerosis complex reveals cell-autonomous and non-cell-autonomous functions of mutant tuberin.</a> Dis Model Mech. 4 (2), 255-267 (2011).</li>
<li>Konadu, B., Cox, C. K., Gibert, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+the+microinjection+of+free+fatty+acids+and+triacylglycerol+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for the microinjection of free fatty acids and triacylglycerol in zebrafish embryos.</a> STAR Protoc. 5 (2), 103086(2024).</li>
<li>Evans, S. S., Repasky, E. A., Fisher, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fever+and+the+thermal+regulation+of+immunity%3A+the+immune+system+feels+the+heat%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Fever and the thermal regulation of immunity: the immune system feels the heat.</a> Nat Rev Immunol. 15 (6), 335-349 (2015).</li>
<li>Zabegalov, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+repetitive+behaviors+in+zebrafish+and+their+relevance+to+human+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Abnormal repetitive behaviors in zebrafish and their relevance to human brain disorders.</a> Behav Brain Res. 367, 101-110 (2019).</li>
<li>Scheldeman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-related+neuropathology+in+mutant+tsc2+zebrafish%3A+phenotypic%2C+transcriptomic+and+pharmacological+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">mTOR-related neuropathology in mutant tsc2 zebrafish: phenotypic, transcriptomic and pharmacological analysis.</a> Neurobiol Dis. 108, 225-237 (2017).</li>
<li>Ilyin, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+intracerebroventricular+lipopolysaccharide+administration+on+behavioral%2C+neurochemical%2C+and+neurogenomic+responses+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of intracerebroventricular lipopolysaccharide administration on behavioral, neurochemical, and neurogenomic responses in adult zebrafish.</a> Behav Brain Res. 493, 115676(2025).</li>
<li>Luo, R., Yao, Y., Chen, Z., Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+examination+of+the+LPS-TLR4+immune+response+through+the+analysis+of+molecular+structures+and+protein-protein+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">An examination of the LPS-TLR4 immune response through the analysis of molecular structures and protein-protein interactions.</a> Cell Commun Signal. 23, 142(2025).</li>
<li>Grebennikova, D. V., Shandilya, U. K., Karrow, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+TLR4+and+its+alternative+lipopolysaccharide+%28LPS%29+sensing+pathways+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Beyond TLR4 and its alternative lipopolysaccharide (LPS) sensing pathways in zebrafish.</a> Genes. 16 (9), 1014(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Borosilicate Glass capillaries (Outer diameter 1.0 mm/ inner diameter 0.75 mm)</td><td>Sutter Instrument</td><td>BF150-75-10</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 (calcium chloride)</td><td>Chempur</td><td>118748703</td><td></td></tr><tr><td>Callibration Slide (1/100 mm)</td><td>Bresser</td><td>5916710</td><td></td></tr><tr><td>Capillary holder (Grip head set 4 size 0)</td><td>Fertilart Sp. z o.o</td><td>5196082001</td><td></td></tr><tr><td>Flaming/Brown micropipette puller</td><td>Sutter Instrument</td><td>P-1000</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Chempur</td><td>115752837</td><td></td></tr><tr><td>Human IL6</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>200-06-20UG</td><td>Voorraadconcentratie: 10 &micro;g/mL, Werkconcentratie: 2 pg/nL (verdund in 0,9% NaCl)</td></tr><tr><td>Injector pump FemtoJet 4i</td><td>Eppendorf</td><td>E5252000021</td><td></td></tr><tr><td>KCl (potassium chloride)</td><td>Chempur</td><td>117397402</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&middot;6H2O (magnesium chloride hexahydrate)</td><td>Chempur</td><td>116120500</td><td></td></tr><tr><td>Femtotips Microloader Tips voor Femtojet Microinjector</td><td>Eppendorf</td><td>EPE 5242956003</td><td></td></tr><tr><td>Microscope Leica M165 FC 1983 vergroting</td><td>Leica Microsysytems</td><td>https://www.leica-microsystems.com/products/ light-microscopes/stereo-microscopes/p/leica-m165-fc/</td><td></td></tr><tr><td>Mineral oil</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (sodium chloride)</td><td>Chempur</td><td>117941206</td><td></td></tr><tr><td>Pronase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5147-1G</td><td>Voorraadconcentratie: 20 mg/mL (bereide in ultrapuur water), Werkconcentratie: 0,5 mg/mL (verdund in E3)</td></tr><tr><td>Tricaine</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>A-5040</td><td></td></tr><tr><td>Tris base</td><td>Carl Roth</td><td>4855.3</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Low Melting Point Agarose</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>16520050</td><td></td></tr><tr><td>ZebraBox uitbreiding - Photo Motor Response EZBPMR</td><td>Animalab</td><td>https://animalab.eu/zebrabox-high-throughput-monitoring-system</td><td></td></tr><tr><td>Zebrabox</td><td>ViewPoint</td><td>https://www.viewpoint.fr/product/zebrafish/fish-behavior-monitoring/zebrabox</td><td>Geautomatiseerde analysekamer</td></tr></tbody></table>

micro-injectie van interleukine-6 in de bloedbaan van tsc-zebravislarven om neuropsychiatrische aandoeningsachtige gedragingen te bestuderen

Microinjection of Interleukin-6 into the Bloodstream of TSC Zebrafish Larvae to Study Neuropsychiatric Disorder-Like Behaviors

Micro-injectie van interleukine-6 in de bloedbaan van TSC-zebravislarven om neuropsychiatrische aandoeningsachtige gedragingen te bestuderen

Patients with tuberous sclerosis complex (TSC1/TSC2 mutations) exhibit variable expressivity of autism spectrum disorder (ASD), and maternal immune ...

Mijn onderzoek richt zich op de vraag hoe door IL-6 geïnduceerde ontsteking interageert met genetische risicomutaties voor autisme om de ontwikkeling en functie van de hersenen te beïnvloeden. In tegenstelling tot brede LPS-geïnduceerde ontsteking, verhoogt dit protocol selectief IL-6, waardoor een nauwkeurig onderzoek naar cytokinespecifieke neurodevelopmentale effecten mogelijk is. Begin met het verzamelen van de micro-injectienaalden, de benodigde reagentia en zebravisembryo's die twee dagen na bevruchting zijn.Bereid een 1% gewicht-volume agarose-oplossing in E3-medium voor en verhit deze tot de agarose volledig is opgelost en de oplossing helder wordt. Laat de agarose-oplossing kort afkoelen. Giet ongeveer 30 milliliters in een Petri-schaal van 100 millimeter om een gelijkmatige laag over het oppervlak te garanderen.Terwijl de agarose nog vloeibaar is, maar begint te stollen, wordt er voorzichtig een siliconen mal op het oppervlak geplaatst om uniforme groeven te creëren. Breng ongeveer 100 chorionhoudende embryo's, twee dagen na bevruchting, over naar een kleine agarose-gecoate Petrischaal van 50 millimeter. Voeg vier milliliter vers bereide pronase-oplossing toe aan de schaal, waarbij men erop let dat de embryo's volledig ondergedompeld zijn.Incubeer drie tot vijf minuten bij kamertemperatuur. Controleer onder een stereomicroscoop of de embryo's uit de chorionen komen. Roteer of draai de schaal voorzichtig en met tussenpozen om de enzymatische verwijdering van de chorionen te vergemakkelijken.Ga door tot de meeste embryo's uit hun chorions zijn vrijgekomen. Was de embryo's grondig door ze vijf tot zes keer over te brengen naar vers E3-embryomedium. Zorg ervoor dat alle chorions en pronase-resten zijn verwijderd om beschadiging van de larven te voorkomen en om optimale kweekcondities te behouden.Overbreng met een glazen Pasteurpipet ongeveer 50 gedechorioneerde larven naar een Petri-schaal van 100 millimeter met 40 milliliter E3-medium. Houd de larven in het E3-medium tot aan de micro-injectie. Gebruik onder een stereomicroscoop een fijn pincet om voorzichtig de punt van de eerder voorbereide glazen capillaire te breken, zodat er een micropipet ontstaat met een opening van ongeveer drie micrometer in diameter.Bereid een 0,9% gewicht per volume natriumchloride-oplossing voor de controle-injecties. Bereid daarnaast een oplossing van twee picogram per nanoliter Interleukine 6 of IL-6 in 0,9% natriumchloride voor de IL-6-injecties. Voeg één microliter 0,05% Trypaanblauw toe aan elke 10 microliter injectie-oplossing om de visualisatie tijdens de injectie te vergemakkelijken.Laad de oplossing met een pipet in een microloader-tip. Gebruik vervolgens de microloader-tip om de voorbereide micropipet-injectienaald tegenstrooms te vullen met ongeveer 3 µL injectieoplossing, waarbij u ervoor zorgt dat er geen luchtbellen worden geïntroduceerd. Plaats de gevulde injectienaald stevig in de capillairhouder om deze vervolgens op het micro-injectiesysteem aan te sluiten.Plaats vervolgens een kleine druppel minerale olie op een kalibratiedia. Kalibreer het injectievolume door druppels in de minerale olie uit te stoten. Meet de diameter van de druppel met behulp van het kalibratiedia met een schaalverdeling van 0,01 millimeter.Stel de injectiedruk in om een druppelvolume van ongeveer één nanoliter te bereiken. Anestheseer de larven in kleine groepen door tricaïne aan het E3-medium toe te voegen tot een uiteindelijke 1X concentratie om stress te minimaliseren en een consistente sedatie te waarborgen. Verplaats individuele larven van twee dagen na bevruchting naar een gestolde agarose-injectieplaat.Plaats de schaal onder de stereomicroscoop. Gebruik een glazen pipette om elke larve voorzichtig zodanig te oriënteren dat de ductus van Cuvier duidelijk zichtbaar en toegankelijk is. Positioneer de punt van de micropipette bij het instappunt van de ductus van Cuvier door onder de stereomicroscoop de bloedcellen te volgen die richting het hart bewegen.Injecteer de eerste druppel van de bereide oplossing in het Cuvier-kanaal. Injecteer na ongeveer 20 seconden een tweede druppel in het Cuvier-kanaal. Breng de larven na injectie voorzichtig over naar een schone Petri-schaal van 100 millimeter met 40 milliliters E3-medium.Plaats de larven terug in een incubator bij 28,5 °C voor herstel. Herhaal de volgende dag de micro-injectieprocedure zoals eerder gedemonstreerd. Gebruik de larven vijf dagen na bevruchting voor verdere toepassingen, waaronder gedragsassays, hersenbeeldvorming of immunofluorescentieanalyse.Microinjectie van IL-6 had geen effect op de levensvatbaarheid van de larven in vergelijking met injecties met natriumchloride. Overlevingspercentages vijf dagen na bevruchting waren ononderscheidbaar tussen de groepen die waren geïnjecteerd met IL-6 en NACL, wat aangeeft dat het doseringsschema goed wordt getolereerd en geen aspecifieke toxiciteit veroorzaakt. Microinjecties verminderden de levensvatbaarheid licht in vergelijking met niet-geïnjecteerde sibs.De homozygote Tuberous Sclerosis Complex 2-, of TSC2-mutanten, vertoonden significant hogere basale prostaglandine E2- of PGE2-spiegels dan wild-type broeders en zusters. Heterozygote TSC2-mutanten vertoonden een bescheiden, niet-significante stijging van de basale PGE2-spiegels in vergelijking met wild-type broeders en zusters. PGE2-spiegels stegen scherp in heterozygote TSC2-mutanten na micro-injectie van IL-6.De open veldtest toonde aan dat TSC2-mutanten een toegenomen angstachtig gedrag vertoonden in vergelijking met wild-type broeders en zusters in niet-geïnjecteerde controles, en IL-6-micro-injecties hadden geen invloed op dit gedrag. De heterozygote TSC2- en homozygote TSC2-mutanten brachten significant meer tijd door in de buitenste zone van de arena en vertoonden een verminderde exploratie van het centrum dan wild-type broeders en zusters in niet-geïnjecteerde controles, evenals IL-6-geïnjecteerde TSC2-larven. IL-6-injecties zorgden voor een toename van repetitieve, stereotype zwempatronen, met name bij heterozygote TSC2-mutanten.De proportie IL-6 geïnjecteerde heterozygote TSC2-mutanten die repetitieve looping vertoonden, was significant verhoogd in vergelijking met de met natriumchloride geïnjecteerde controles. Dit protocol maakt gecontroleerde IL-6-ontstekingsstudies mogelijk om de effecten van de genetische omgeving op de neuro-ontwikkeling en het gedrag bij zebravis te beoordelen. Belangrijke overwegingen bij het uitvoeren van dit protocol zijn een consistente naaldgrootte, een nauwkeurig injectievolume van twee nanoliter en het minimaliseren van de tijd die larven buiten E3 doorbrengen. Toekomstige studies kunnen onderzoeken hoe IL-6-ontsteking en genetisch risico samen de hersenontwikkeling en het gedrag beïnvloeden.

microinjection-interleukin-6-into-bloodstream-tsc-zebrafish-larvae-to

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Micro-injectie is een gevestigde en effectieve methode voor het introduceren van vreemde stoffen in bevruchte zebravis embryo's. Hier tonen we een robuuste micro-injectie techniek voor het uitvoeren van mRNA overexpressie en morfolino oligonucleotide-gen knock-down studies in de zebravis.

Micro-injectie van mRNA en morfolino antisense oligonucleotiden in zebravis embryo&#39;s.

Deze video laat zien hoe morfolino of mRNA kan worden geïnjecteerd in zebravis embryo's in het een-cellig stadium te verlagen of te verhogen van het niveau van specifieke gen-producten tijdens de verdere ontwikkeling.

Micro-injectie van de zebravis embryo&#39;s Gene functie analyseren

De snelle ontwikkeling, de kleine oppervlakte en de transparantie van de zebravis zijn enorme voordelen voor de studie van aangeboren immuunsysteem controle op...

Niet-invasieve beeldvorming van gedissemineerde candidiasis in de zebravis Larven

The video demonstrates the microinjection of lipopolysaccharides (LPS) into the brains of zebrafish larvae to induce neuroinflammation. The larvae are positioned on an agarose-lined dish, the needle is inserted into the brain ventricles, and the LPS is injected. The injected LPS triggers an immune response that leads to neuroinflammation.

Inducing Neuroinflammation in Zebrafish Larvae with a Lipopolysaccharide Injection

In dit artikel tonen we een werkwijze voor het manipuleren van genexpressie in het ventriculaire cellen van het volwassen zebravissen telencephalon met morfolino antisense oligonucleotiden. Wij stellen deze werkwijze efficiënt en snel protocol dat kan worden gebruikt voor functionele studies in de volwassen gewervelde hersenen.

Micromanipulatie van genexpressie in de Adult zebravis hersenen met behulp Cerebroventricular Micro-injectie van Morfolino Oligonucleotides

Dit manuscript beschrijft een eenvoudige methode om stress gedrag in volwassen zebravis te meten. De aanpak maakt gebruik van de aangeboren tendens dat zebravis de voorkeur aan de onderste helft van een tank, wanneer in een stressvolle toestand. Wij beschrijven ook methodes om de analyse met farmacologie te koppelen.

Gedrags benaderingen voor het bestuderen van aangeboren stress in zebravis

Het huidige protocol beschrijft de intracerebroventriculaire (ICV) injectie van volwassen zebravissen met neurotoxische 6-hydroxydopamine (6-OHDA) bij het ventrale diencephalon (Dn) en de beoordeling van de aantasting en het daaropvolgende herstel van zwemgedrag postlesion met behulp van de open tank test, die vergezeld gaat van analyse met behulp van een video tracking software.

Locomotorische beoordeling van 6-hydroxydopamine-geïnduceerde volwassen zebravis-gebaseerde Parkinson's Disease Model

Dit protocol demonstreert de micro-injectie van lipopolysaccharide in het ventriculaire gebied van de hersenen in een zebravislarvemodel om de resulterende neuro-inflammatoire respons en neurotoxiciteit te bestuderen.

Hersenventrikelmicro-injecties van lipopolysaccharide in larvale zebravissen om neuro-inflammatie en neurotoxiciteit te beoordelen

We demonstreren een methode die gebruik maakt van snelle confocale scanscopie om live beeldvorming uit te voeren van microgliacellen in het zich ontwikkelende optische tectum van zebravissen, waardoor de dynamiek van deze cellen in vivo kan worden geanalyseerd.

Live beeldvorming en karakterisering van de dynamiek van microglia in het zebravisembryo

RASopathieën zijn multisysteem-genetische syndromen die worden veroorzaakt door hyperactivering van de RAS-MAPK-route. Potentieel pathogene varianten die wachten op validatie duiken continu op, terwijl slecht preklinisch bewijs de therapie beperkt. Hier beschrijven we ons in vivo protocol voor het testen en kruisvalideren van RASopathie-geassocieerde ERK-activeringsniveaus en de farmacologische modulatie ervan tijdens de embryogenese door middel van live FRET-beeldvorming in Teen-reporter...

Een efficiënt protocol om ERK-activiteitsmodulatie te beoordelen in vroege zebravismodellen van het Noonan-syndroom via live FRET-microscopie en immunofluorescentie

Dit protocol biedt een gestandaardiseerde, high-throughput verbindingsscreeningsmethode waarbij in vivo zebravissen worden gebruikt om dopaminerge neuronverlies en bewegingsgedragsproblemen te kwantificeren, waardoor efficiënte screening van neuroprotectieve verbindingen mogelijk is.

In vivo fenotypering van dopaminerge neurodegeneratie in zebravislarven met behulp van gedragsanalyse en beeldvorming met hoge inhoud

Leer micro-injectie van IL-6 in de ductus van Cuvier bij TSC-zebravislarven om systemische ontsteking en neuropsychiatrische gedragsveranderingen te bestuderen. Deze methode ondersteunt onderzoek naar gen-omgevingsinteracties.

Micro-injectie van interleukine-6 in de bloedbaan van TSC-zebravislarven om neuropsychiatrische aandoeningsachtige gedragingen te bestuderen (Video) | JoVE Journal

Micro-injectie van interleukine-6 in de bloedbaan van TSC-zebravislarven om neuropsychiatrische aandoeningsachtige gedragingen te bestuderen

Meer video's verkennen