Name: Een gedefinieerde hydrogel-gebaseerde methode voor het genereren van driedimensionale menselijke borstorganoïden die mammaire morfogenese recapituleren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Leer een gedefinieerde hydrogelmethode voor het genereren van driedimensionale menselijke borstorganoïden die mammaire morfogenese recapituleren. Dit systeem ondersteunt onderzoek naar borstkankerontwikkeling en epitheliale plasticiteit.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol>
	<li>Rauner G, Gupta PB, Kuperwasser C. From 2D to 3D and beyond: the evolution and impact of in vitro tumor models in cancer research. Nat Methods. 2025;22:1776-87.</li>
	<li>Traugh N, et al. Immune-epithelial interactions via TGF-&#946; orchestrates stem-cell niche formation and morphogenesis [Preprint]. Available from: https://doi.org/10.1101/2025.05.22.655596. 2025.</li>
	<li>Rauner G, et al. Single-cell organogenesis captures complex breast tissue formation in 3D. Development. 2025. Available from: https://doi.org/10.1242/dev.204813.</li>
	<li>Trepicchio C, et al. DDR1 regulates RUNX1-CBF&#946; to control breast stem cell differentiation [Preprint]. bioRxiv. 2024. Available from: https://doi.org/10.1101/2024.02.21.581255.</li>
	<li>Rauner G, et al. Breast tissue regeneration is driven by cell-matrix interactions coordinating multi-lineage stem cell differentiation through DDR1. Nat Commun. 2021;12:7116.</li>
	<li>Schedin P, Keely PJ. Mammary gland ECM remodeling, stiffness, and mechanosignaling in normal development and tumor progression. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2011;3:a003228.</li>
	<li>Fata JE, Werb Z, Bissell MJ. Regulation of mammary gland branching morphogenesis by the extracellular matrix and its remodeling enzymes. Breast Cancer Res. 2004;6:1-11.</li>
	<li>Sokol ES, et al. Growth of human breast tissues from patient cells in 3D hydrogel scaffolds. Breast Cancer Res. 2016;18:19.</li>
	<li>Parrish M, et al. Environmental chemical mixtures reprogram mammary epithelial development to epigenetic states associated with breast cancer [Preprint]. Available from: https://doi.org/10.64898/2026.04.01.715968. 2026.</li>
	<li>Stingl J, Emerman JT, Eaves CJ. Enzymatic dissociation and culture of normal human mammary tissue to detect progenitor activity. Methods Mol Biol. 2005;290:249-63.</li>
	<li>Antoine EE, Vlachos PP, Rylander MN. Review of collagen I hydrogels for bioengineered tissue microenvironments: characterization of mechanics, structure, and transport. Tissue Eng Part B Rev. 2014;20:683-96.</li>
	<li>Ngo P, Ramalingam P, Phillips JA, Furuta GT. Collagen gel contraction assay. Methods Mol Biol. 2006;341:103-9.</li>
	<li>Lancaster MA, Knoblich JA. Organogenesis in a dish: modeling development and disease using organoid technologies. Science. 2014;345:1247125.</li>
	<li>Linnemann JR, Meixner LK, Miura H, Scheel CH. An organotypic 3D assay for primary human mammary epithelial cells that recapitulates branching morphogenesis. Methods Mol Biol. 2017;1612:125-37.</li>
	<li>Bonnans C, Chou J, Werb Z. Remodelling the extracellular matrix in development and disease. Nat Rev Mol Cell Biol. 2014;15:786-801.</li>
	<li>Hynes RO. The extracellular matrix: not just pretty fibrils. Science. 2009;326:1216-9.</li>
	<li>Hughes CS, Postovit LM, Lajoie GA. Matrigel: a complex protein mixture required for optimal growth of cell culture. Proteomics. 2010;10:1886-90.</li>
	<li>Sokol ES, et al. Perturbation-expression analysis identifies RUNX1 as a regulator of human mammary stem cell differentiation. PLoS Comput Biol. 2015;11:e1004161.</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>15 mL conische buizen</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td>Steriele buizen voor weefselbewerking en centrifugatie</td></tr><tr><td>40 &mu;m celzeef</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td>Filtratieapparaat voor bereiding van eencellen suspensie</td></tr><tr><td>40 &mu;m celzeef voor lage volumes</td><td>Bel-Art</td><td>136800040</td><td>Filtratieapparaat voor bereiding van eencellen suspensie</td></tr><tr><td>Automatische celteller</td><td>Bio-Rad</td><td>1450102</td><td>Apparaat gebruikt om cellen te tellen en levensvatbaarheid te bepalen</td></tr><tr><td>Runderhypofyse-extract</td><td>Thermo Scientific</td><td>13028014</td><td>Supplement voor epitheelcel media</td></tr><tr><td>Celtellingsdia's</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td>Dubbelkamer dia's gebruikt voor celtelling</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Tabeltop centrifuge/s moeten minimaal 500 x g snelheidscapaciteit hebben en ruimte voor 15 mL en 1,5 mL buizen. </td></tr><tr><td>Collageen I</td><td>Millipore Sigma</td><td>08-115</td><td>Extracellulair matrixeiwit gebruikt voor hydrogelvorming</td></tr><tr><td>Collagenase A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11088793001</td><td>Enzym gebruikt voor weefseldissociatie</td></tr><tr><td>Cryovials</td><td>Corning</td><td>976171</td><td>Steriele vials voor cryogene opslag van monsters</td></tr><tr><td>Kweekvaten (bijv. kamerdia's, multiwell platen)</td><td>Corning</td><td>354104 354108 3603</td><td>Platforms voor hydrogel depositie en organoïd cultuur.</td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxide</td><td>Millipore Sigma</td><td>317275</td><td>Cryoprotector gebruikt in bevriezingsmedium</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche</td><td>4942078001</td><td>Enzym gebruikt voor secundaire weefseldissociatie</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td>Enzym gebruikt tijdens celdissociatie.</td></tr><tr><td>Fetaal runder serum</td><td>Gibco</td><td>10437</td><td>Serumsupplement gebruikt in was- en neutralisatiemedia</td></tr><tr><td>Fibronectine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2006</td><td>Extracellulair matrixeiwitcomponent</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Scientific</td><td>35050061</td><td>Supplement voor epitheelcel media</td></tr><tr><td>Humaan epidermale groeifactor</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td>Supplement voor epitheelcel media</td></tr><tr><td>Hydrocortison</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0888</td><td>Supplement voor epitheelcel media</td></tr><tr><td>Hyaluronzuur</td><td>Millipore Sigma</td><td>385908</td><td>Extracellulair matrixcomponent voor hydrogel formulering</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>Enzym gebruikt voor weefseldissociatie</td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Thermo Scientific</td><td>3598</td><td>Apparaat gebruikt voor weefselcultuur incubatie</td></tr><tr><td>Insuline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278</td><td>Supplement voor epitheelcel media</td></tr><tr><td>Laminine</td><td>Gibco</td><td>23017-015</td><td>Extracellulair matrixeiwitcomponent</td></tr><tr><td>Mammary epitheel basaal medium</td><td>Thermo Scientific</td><td>M171500</td><td>Groeimedium voor epitheelcellen</td></tr><tr><td>Microcentrifugebuizen (1,5 mL)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>Buizen gebruikt voor reacties met kleine volumes</td></tr><tr><td>Orbitale rotator</td><td>Thermo Scientific</td><td>400110</td><td>Rotator gebruikt voor weefseldispersie tijdens enzymatische dissociatie</td></tr><tr><td>P1000 pipet</td><td>Gilson</td><td>P1000</td><td>Apparaat gebruikt om volumes tot 1.000 &mu;L te mengen en over te brengen</td></tr><tr><td>Penicilline-streptomycine</td><td>Thermo Scientific</td><td>15140122</td><td>Antibioticumsupplement voor epitheelcel media</td></tr><tr><td>Fosfaatgebufferde zoutoplossing</td><td>Gibco</td><td>20012-027</td><td>Bufferoplossing gebruikt voor wassen en spoelen</td></tr><tr><td>Precisiebalans</td><td>Mettler Toledo</td><td>ML303E</td><td>Balans gebruikt voor weefselweging</td></tr><tr><td>Serologische pipet</td><td>Nunc</td><td>170356N</td><td>Pipet gebruikt voor het oogsten van niet-adherente epitheelcellen</td></tr><tr><td>Natriumhydroxide (1 N)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS261</td><td>Reagens gebruikt voor collageen neutralisatie</td></tr><tr><td>Steriele scalpels</td><td>Bard-Parker</td><td>372615</td><td>Gereedschap gebruikt voor mechanisch weefselsnijden</td></tr><tr><td>Trypanblauw oplossing</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Kleurstof gebruikt voor cellevensvatbaarheidsbeoordeling</td></tr><tr><td>Trypsine (0,25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Enzymatische reagentia gebruikt voor celdissociatie</td></tr><tr><td>Waterbad (37 &deg;C)</td><td>VWR</td><td>10LA</td><td>Apparaat gebruikt voor gecontroleerd ontdooien van monsters</td></tr></tbody></table>

een gedefinieerde hydrogel-gebaseerde methode voor het genereren van driedimensionale menselijke borstorganoïden die mammaire morfogenese recapituleren

A Defined Hydrogel-Based Method For Generating Three-Dimensional Human Breast Organoids That Recapitulate Mammary Morphogenesis

Een gedefinieerde hydrogel-gebaseerde methode voor het genereren van driedimensionale menselijke borstorganoïden die mammaire morfogenese recapituleren

The development of physiologically relevant human model systems that recapitulate tissue architecture and cell-state dynamics remains a major challenge in ...

Ons onderzoek richt zich op de menselijke borstontwikkeling en lactatie, weefselorganisatie, blootstelling aan omgevingsfactoren en genetische factoren die leiden tot biologische veranderingen bij kanker. Bestaande modellen vatten de architectuur van het menselijke borstweefsel, de timing van de ontwikkeling en de micro-omgeving onjuist weer. Dit protocol slaat een brug tussen 2D- en diermodellen in een menselijk systeem.Houd rekening met verteerd menselijk borstweefsel dat gedurende ten minste 24 uur cryopreserveerd is. Dompel het cryovial onmiddellijk tot aan de dop onder in een waterbad van 37 °C en ontdooi dit snel gedurende één minuut om celdood te minimaliseren. Zodra het volledig is ontdooid, brengt u de inhoud van het cryovial over naar een conische buis van 15 ml die 10 ml mammary epithelial growth medium, of MEGM, bevat, en centrifugeer dit bij 250g gedurende vijf minuten.Nadat het supernatant is weggegooid, wordt de pellet opnieuw gesuspendeerd in 500 µL dissociatie-enzymoplossing, voorverwarmd tot 37 °C en bevattend 0,25% trypsine. Breng de suspensie over naar een microcentrifugebuisje van 1,5 mL. Tritureer het monster 20 keer met een P1000-pipet om de dissociatie te be

a-defined-hydrogel-based-method-for-generating-three-dimensional

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

We beschrijven een 3D-kweekmodel van het menselijk borstpijtheel dat geschikt is om hormoonwerking te bestuderen.

Een hormoon-responsieve 3D Cultuur Model van de Human borstklier epitheel

Dit manuscript beschrijft een zachte lithografie gebaseerde techniek uniforme arrays van driedimensionale (3D) epitheliale weefsels gedefinieerde geometrische midden van extracellulaire matrix ingenieur. Deze methode is vatbaar voor een grote verscheidenheid aan celtypen en experimentele contexten en zorgt voor high-throughput screening van identieke herhalingen.

Techniek Driedimensionale epitheelweefsels Embedded binnen extracellulaire matrix

Organoids ontwikkeld van muis borstklieren werden bestraald en gekarakteriseerd om epitheel eigenschappen en interacties met immuun cellen te beoordelen. Bestraalde organoids kan worden gebruikt om cel-cel interacties beter te evalueren die tot de rekrutering van de tumor cel in bestraald normaal weefsel kunnen leiden.

Groei en karakterisering van bestraalde Organoids van de borstklieren

Een protocol voor het genereren van menselijke primaire endometriale organoïden die bestaan uit epitheliale en stromale cellen en behouden kenmerken van het inheemse endometrium weefsel wordt gepresenteerd. Dit protocol beschrijft methoden van uteriene weefsel verwerving tot de histologische verwerking van endometriale organoïden.

Generatie van multicellulaire humane primaire Endometriale Organoïden

De borstklier is een tweelaagse structuur, bestaande uit buitenste myoepitheel en binnenste luminale epitheelcellen. Gepresenteerd is een protocol voor de voorbereiding van organoïden met behulp van differentiële trypsinisatie. Deze efficiënte methode stelt onderzoekers in staat om deze twee celtypen afzonderlijk te manipuleren om vragen over hun rol in de vorm en functie van de borstklier te onderzoeken.

Generatie van Mozaïek Borstorganoïden door Differentiële Trypsinization

Het doel van dit protocol is om borsteptheelcellen rechtstreeks bioprinten als meercellige sferoïden op voorgevormde endotheelnetwerken om snel 3D-borst-endotheel co-cultuurmodellen te creëren die kunnen worden gebruikt voor geneesmiddelenscreeningsstudies.

Directe bioprinting van 3D-meercellige borstsferoïden op endotheelnetwerken

Het doel van dit protocol is om de ontwikkeling van een driedimensionaal (3D) microfluïdisch model van sterk uitgelijnd menselijk hartweefsel, samengesteld uit stamcel-afgeleide cardiomyocyten, samen met hartfibblasten (CFs) in een biomimetische, op collageen gebaseerde hydrogel, uit te leggen en aan te tonen, voor toepassingen in hartweefseltechniek, geneesmiddelenscreening en ziektemodellering.

Het ontwikkelen van 3D georganiseerd menselijk hartweefsel binnen een microfluïdisch platform

Dit protocol bespreekt een aanpak voor het genereren van epitheliale organoïden uit primair normaal en tumor borstweefsel door middel van differentiële centrifugatie. Verder zijn instructies opgenomen voor driedimensionale kweek en immunofluorescente beeldvorming van ingebedde organoïden.

Het genereren en afbeelden van muis en menselijke epitheliale organoïden uit normaal en tumor borstweefsel zonder passaging

Hier beschrijven we een protocol voor de vorming van humane iPSC-afgeleide thymusorganoïden gekweekt in 3D-fibrinehydrogels met als doel de rijping van thymusepitheelcellen (TEC) en langdurig onderhoud te ondersteunen, evenals thymopoëse in vitro.

Vorming van menselijke thymusorganoïden in driedimensionale fibrinehydrogels

Er is een kritieke behoefte aan 3D-kankermodellen die heterocellulaire overspraak vastleggen om kankermetastasen te bestuderen. Onze studie presenteert de generatie van heteromulticellulair stromaal-epitheel in een steiger- en steigervrije omgeving die kan worden gebruikt om invasie en cellulaire ruimtelijke verdelingen te bestuderen.

Heteromulticellulaire stromale cellen in steigervrije 3D-culturen van epitheelkankercellen om invasie te stimuleren

Leer een gedefinieerde hydrogelmethode voor het genereren van driedimensionale menselijke borstorganoïden die mammaire morfogenese recapituleren. Dit systeem ondersteunt onderzoek naar borstkankerontwikkeling en epitheliale plasticiteit.

Een gedefinieerde hydrogel-gebaseerde methode voor het genereren van driedimensionale menselijke borstorganoïden die mammaire morfogenese recapituleren (Video) | JoVE Journal

Een gedefinieerde hydrogel-gebaseerde methode voor het genereren van driedimensionale menselijke borstorganoïden die mammaire morfogenese recapituleren

Meer video's verkennen