Name: Elektroforetische scheiding van eiwitten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:29:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Leer elektroforetische scheiding van eiwitten met polyacrylamide gelelektroforese (PAGE). Deze methode scheidt eiwitten op basis van lading en grootte voor biochemisch en proteomics onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De volledige tekst protocol voor deze experimentele aanpak is beschikbaar in <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471142720/cp/cpmb/article/mb1002a/current/abstract" target="_blank">Current Protocols in Molecular Biology</a> .

De auteurs hebben niets te melden.

elektroforetische scheiding van eiwitten

Electrophoretic Separation of Proteins

Elektroforese wordt gebruikt om complexe mengsels van eiwitten (bijvoorbeeld van cellen, subcellulaire fracties, kolom breuken of immunoprecipitaten) te scheiden, om subunit composities te onderzoeken en om de homogeniteit van eiwit monsters te controleren. Het kan ook dienen om eiwitten te zuiveren voor gebruik in verdere toepassingen. In polyacrylamidegelelektroforese, eiwitten migreren als reactie op een elektrisch veld door de poriën in een polyacrylamide gel matrix; poriegrootte afneemt met toenemende acrylamide concentratie. De combinatie van poriegrootte en eiwit lading, de grootte en de vorm bepaalt de migratie snelheid van het eiwit. In deze unit, is de standaard Laemmli methode beschreven voor discontinue gelelektroforese onder denaturerende omstandigheden, dat wil zeggen, in het bijzijn van natriumdodecylsulfaat (SDS).

In deze video tonen we een methode voor de elektroforetische scheiding van eiwitten met behulp van poly-acrylimide gelelektroforese (PAGE).

Elektroforetische scheiding van eiwitten

Elektroforese wordt gebruikt om complexe mengsels van eiwitten te scheiden (bijv. uit cellen, subcellulaire fracties, kolomfracties of immunoprecipitaten), om ...

Het scheiden van individuele eiwitten uit complexe eiwitmengsels kan worden bereikt via gelelektroforese in polyacrylamidegelelektroforese, ook wel bekend als PAGE. Eiwitten migreren onder invloed van een elektrisch veld door poriën in de gelmatrix. De combinatie van de poriegrootte van de gel en de lading, grootte en vorm van het eiwit bepaalt de migratiesnelheid van het eiwit. In deze video demonstreren we een methode voor de elektroforetische scheiding van eiwitten.Hallo, ik ben Dr. Bobul Chakravarti van het Proteomics Center van het Keck Graduate Institute of Applied Life Sciences. Vandaag ga ik u een procedure laten zien voor het uitvoeren van 1D-gelelektroforese. Laten we beginnen.Begin met het assembleren van de glazen plaatjes van het elektroforeseapparaat volgens de instructies van de fabrikant, met behulp van twee schone glasplaten en twee spacers van 1,5 millimeter. Zet vervolgens de glazen platen vast aan het gietstatief. Bereid daarna de scheidingsgellopossing voor zoals beschreven in de huidige protocollen.Voeg de gespecificeerde hoeveelheid 10% ammoniumper-sulfaat en TEMED toe aan de oplossing en roer voorzichtig om te mengen. Vanwege de hoge concentratie acrylamide

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video demonstrates a denaturing polyacrylamide-based separation technique for proteins. This technique helps in the preliminary identification of proteins based on their molecular weights.

Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel Electrophoresis for Protein Analysis: A Technique to Separate and Visualize Proteins Based on Molecular Weight

This video describes multimeric PAGE for separating native protein complexes from tissue homogenates. The technique is a hybrid of blue native-PAGE and SDS-PAGE techniques. The separated complexes can be characterized and studied for their role in cell functioning.

Multimer-PAGE for Separating Native Protein Complexes: A Hybrid Separation Technique Consisting of Blue Native-PAGE and SDS-PAGE to Separate Intact Multimeric Proteins From Tissue Lysate

In this video, we demonstrate a two-dimensional gel electrophoresis method that separates individual proteins from a complex protein mixture obtained from tumor tissues of human nonfunctional pituitary adenoma (NFPA). The proteins are separated based on their electric charge in the first dimension and further separated based on molecular weights in the second dimension.

Two-Dimensional Polyacrylamide Gel Electrophoresis: A Separation Technique for Analysis of Proteins in Complex Protein Mixture Based on Charge and Molecular Weight

Dit protocol beschrijft hoe je clear native gel-eluted liquid fraction entrapment electrophoresis (CN-GELFrEE) kunt voorbereiden en uitvoeren, een native scheidingstechniek voor niet-covalente biomoleculaire assemblages en eiwitten uit heterogene monsters die compatibel is met verschillende downstream-eiwitanalysetechnieken.

CN-GELFrEE - Clear Inheems Gel-uitgewassen vloeibare fractie Entrapment elektroforese

Na de scheiding door elektroforetische methoden, kunnen eiwitten in een gel worden gedetecteerd door verschillende kleuren methoden. Kleuring van eiwitten met Coomassie Blauw, Zilver kleuring, SYPRO Orange, SYPRO Ruby worden gedemonstreerd in deze video.

Kleuring Eiwitten in Gels

Microcontact afdrukken wordt op grote schaal gebruikt voor het patroon eiwitten en andere moleculen op materiaal oppervlakken. Tonen we de basisstappen van dit proces, stempelen patronen van fibronectine op glas.

Microcontact afdrukken van eiwitten voor Celbiologie

Paring en tetrade scheiding nodig zijn voor genetische analyse...

Paring en Viertal Scheiding van Chlamydomonas reinhardtii Voor Genetische analyse

Rat MSC's werden geïsoleerd uit dijbeen en dij-en vervolgens verrijkt door magnetische celsortering. Gesorteerde cellen werden bevestigd voor de expressie van de oppervlakte markers door flowcytometrie. Deze cellen werden ook gekweekt in klonale dichtheid aan enkele kolonies vormen en vervolgens deze kolonies werden van elkaar gescheiden door het klonen van cilinders.

Isolatie en Verrijking van Rat mesenchymale stamcellen (MSC&#39;s) en de scheiding van Single-kolonie Derived MSC&#39;s

De protocollen beschrijven de essentiële stappen voor het verkrijgen van diffractie kwaliteit kristallen van een membraaneiwit vanaf reconstructie van het eiwit in een lipidische kubieke fase (LCP), het vinden van de eerste voorwaarden met LCP-FRAP pre-kristallisatie assays, het opzetten van LCP kristallisatie onderzoeken en oogsten kristallen .

Kristallisatie van membraaneiwitten in lipide mesofasen

Calmoduline (CAM) pull-down test is een effectieve manier om de interactie van CaM te onderzoeken met verschillende eiwitten. Deze methode maakt gebruik van CAM-sepharose kralen voor een efficiënte en specifieke analyse van de CAM-bindende eiwitten. Dit levert een belangrijk instrument om CaM signalering verkennen in cellulaire functie.

Pull-down van calmoduline-bindende eiwitten

Leer elektroforetische scheiding van eiwitten met polyacrylamide gelelektroforese (PAGE). Deze methode scheidt eiwitten op basis van lading en grootte voor biochemisch en proteomics onderzoek.

Elektroforetische scheiding van eiwitten

Meer video's verkennen