Name: Muis Epidermale neurale lijst Stem Cell (EPI-NCSC) culturen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-09T01:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Leer de isolatie van muizen epidermale neurale lijst stamcellen (EPI-NCSC) uit snorharen voor stamcelbiologie. Deze methode omvat microdissectie en weefselkweek om migratie binnen 3-4 dagen te observeren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ondersteund door: USPHS subsidie ​​NS38500, Nationaal Instituut voor Neurologische Aandoeningen en Stroke, NIH, USA; Biomedische Technologie Alliantie van Southeastern Wisconsin, Milwauke, WI, USA; Bryon Riesch Paralysis Foundation, Milwaukee, WI, USA, Broederlijke Orde van Eagles, Midwest hoofdstuk , USA; National ruggenmergletsel Association, Milwaukee hoofdstuk, USA, North East England Stem Cell Institute, Newcastle University, UK.

Dissectie van de Ardennen tegen Adult Mouse Whisker Follikels <ol><li> We maken gebruik van 10 weken tot 6 maanden oude muizen. Jongere muizen vaak opbrengst meer cellen. Euthanaseren muis en dompel hele dier in 1:1 mengsel van betadine (jodium-oplossing) en waterstofperoxide (verkrijgbaar bij apotheek) voor ongeveer 3 minuten. </li><li> Squirt hele muis, in het bijzonder het gezicht regio, met 75% ethanol, en draag muis om dissectie microscoop in laminaire flow kap. </li><li> Ontleden snorhaarkussentjes, zorgvuldig vermeden snijden in haarzakjes, en zwembad in HBSS. </li><li> Ontleden whisker follikels en zwembad in HBSS bij kamertemperatuur. Dit doen door de huid naast de haarfollikel met een pincet, en dan snijden rond de follikel met de rechte schaar. Snijden diep om te voorkomen dat verwonden haarzakjes. </li><li> Til snorhaar follikel uit whisker pad en in nieuwe bord met verse HBSS. </li><li> Spoelen losse adipous en huidweefsel met een spuit van de buffer, tot snorhaar follikels schoon zijn. Indien nodig, knip lef om whisker follikel en te verwijderen aanhangende weefsel door schrapen en herhaalde flushes van HBSS. </li><li> Pin schoon haar follilce op Sylgard-gecoat glas petrischaal met behulp van geslepen wolfraam naald, met behulp van microforceps voor het houden van op de huid gedeelte naast de follikel. </li><li> Snijd snorhaar follikel longitudically met een MicroBlade. Vermijd het snijden te diep, omdat dit de bobbel verwonden. Verwijder het bloed met herhaalde squirts van HBSS tot verdwenen. Uiterlijk van het bloed is een goede indicatie dat de snede was diep genoeg. Als de longitudial cut is niet lang genoeg, kan dit worden verlengd met gebogen microscissors. </li><li> Maak een dwarse snede boven het niveau van de holle sinus en vervolgens een tweede dwarse snede op het niveau binnen de ring sinus, dicht op de huid. </li><li> U ziet nu de bobbel in de capsule. </li><li> Pak een eind aan collageen capsule met het pincet en de roll-out van de uitstulping met een gebogen wolfraam naald. U ziet nu de lege capsule en de geïsoleerde bobbel. </li><li> Zwembad geïsoleerd uitstulpingen in een aparte cultuur plaat in HBSS bij kamertemperatuur. Zorg ervoor dat er geen ander weefsel is de gepoolde uitstulpingen vervuilende. </li></ol> Cultuur van bobbel Explantaten <ol><li> Coat 35 mm kweekplaten met collageen door het plaatsen van 50 pi collageen en 10 ul steriel 6% NaCl naast elkaar. Meng goed met een dubbel-gebogen Pasteyr pipet en duw naar de rand van de cultuur plaat. Incubeer overnacht in een schone exsiccator, maar niet laten drogen. Voor gebruik, spoel de borden met een zoutoplossing. </li><li> Pre-incubeer collageen gecoat en gespoeld cultuur platen voor ongeveer 3 uur met kweekmedium. Voedingsbodem bestaat voor 85% Alpha-gemodificeerde MEM, 10% foetaal runderserum en 5% dag 11 kippenembryo extract. </li><li> Na de re-incubatie, verwijder kweekmedium van de borden en voeg verschillende uitpuilt met zo weinig medium mogelijk. Verwijder overtollige kweekmedium. </li><li> Incubeer gedurende 1 uur, doch niet langer in cel incubator in een vochtige atmosfeer met 10% zuurstof en 5% CO 2. </li><li> Na 1 uur, voeg 1,5 ml van het kweekmedium. Uitstulping explantaten moeten zich houden aan het collageen ondergrond. Dagelijks vervangen door 50% van het kweekmedium. </li><li> Binnen 3 - 4 dagen, zal over grote afstanden trekkende cellen emigreren uit de bobbel explantaten. Let op hun stellaatcellen morfologie, de beweeglijkheid en de overheersende afwezigheid van cel-cel contacten. In de komende dagen zullen meer cellen emigreren, en emigreerde cellen zal snel vermenigvuldigen. </li><li> Verwijder uitstulping 2 - 3 dagen na het begin van EPI-NCSC emigratie met een scherpe wolfraam naald. Als de bulten worden langer gelaten, hebben ze de neiging om af te vlakken en het onmogelijk is om pure EPI-NCSC culturen krijgen te maken. </li><li> Belangrijk: Zeldzame cellen met afgeplatte morfologie, die zich soms zichtbaar enkele dagen later dan de EPI-NCSC, en die zijn minder beweeglijk zijn NIET EPI-NCSC, maar vermoedelijk epidermale stamcellen / voorlopers. Cultuur bestaat uit deze cellen, of gemengde culturen met EPI-NCSC en vermeende epidermale stamcellen / voorlopercellen moeten worden weggegooid. </li><li> Tip: Houd niet de cellen te lang in het primair explantatie medium, omdat ze de neiging om snel te differentiëren bij hoge celdichtheid, als gevolg van vermeende autocrien / paracriene groeifactor signalering. </li></ol>

<ol><li>Sieber-Blum, M., Grim, M., YF, H. u, Szeder, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+neural+crest+stem+cells+in+the+adult+hair+follicle%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle.</a> Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).</li>
<li>Sieber-Blum, M., Grim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adult+hair+follicle+-+cradle+for+pluripotent+neural+crest+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research+%28Part+C%29%22%5BJournal%5D)">The adult hair follicle - cradle for pluripotent neural crest stem cells.</a> Birth Defects Research (Part C). Tuan, R., Grim, M. 72, 162-172 (2004).</li>
<li>Sieber-Blum, M., Schnell, L., Grim, M., Schneider, R., Schwab, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+epidermal+neural+crest+stem+cell+%28EPI-NCSC%29+grafts+in+the+lesioned+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Pub%22%5BJournal%5D)">Characterization of epidermal neural crest stem cell (EPI-NCSC) grafts in the lesioned spinal cord.</a> Pub. 32, 67-81 (2006).</li>
<li>Hu, Y. F., Zhang, Z. -J., Sieber-Blum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+epidermal+neural+crest+stem+cell+%28EPI-NCSC%29+molecular+signature%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">An epidermal neural crest stem cell (EPI-NCSC) molecular signature.</a> Stem Cells. 24, Epub ahead of print 2692-2702 (2006).</li>
</ol>

Op grond van hun vermogen tot migratie, kan EPI-NCSC worden geïsoleerd als een zeer zuivere populatie van stamcellen, die kunnen worden uitgebreid in vitro. Als embryonale resten in een volwassen locatie, EPI-NCSC zijn potentieel aantrekkelijke kandidaten voor toekomstige celvervangingstherapieën, biomedische engineering en / of de regeneratieve geneeskunde. We hebben getest EPI-NCSC in een muismodel van dwarslaesie, waar ze tonen wenselijke eigenschappen. Door middel van gen expressie profilering door LongSAGE (www.ncbi.nlm.nih.gov / geo, ...

muis epidermale neurale lijst stem cell (epi-ncsc) culturen

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

EPI-NCSC zijn overblijfselen van de embryonale neurale lijst in een volwassen locatie, de uitstulping van de haarfollikels. Ze zijn multipotente stamcellen die de fysiologische eigenschap een breed scala van gedifferentieerde celtypen, waaronder neuronen, zenuwcellen ondersteunen van cellen, gladde spiercellen, bot / kraakbeen cellen en melanocyten te genereren. EPI-NCSC zijn gemakkelijk toegankelijk in de behaarde huid en kan worden geïsoleerd als een zeer zuivere populatie van stamcellen. Deze video geeft een gedetailleerd protocol voor het bereiden van de muis EPI-NCSC culturen uit whisker follikels. De snorhaar pad van een volwassen muis is verwijderd, en snorhaar follikels ontleed. De follikels worden dan de lengte en vervolgens dwars doorgesneden boven en onder de bobbel regio. De bobbel is verwijderd uit het collageen capsule en in een petrischaal. EPI-NCSC beginnen om te emigreren uit de uitstulping explantaten 3 tot 4 dagen later.

Hier laten we onze methode om de muis epidermale neurale stamcellen (EPI-NCSC) te isoleren. Techniek houdt in micro-ontleden whisker follikels, het isoleren van de verdikking en placeing het in weefselkweek. EPI-NCSC beginnen om van uitstulping explantaten op de ondergrond emigreren binnen 3 - 4 dagen.

Muis Epidermale neurale lijst Stem Cell (EPI-NCSC) culturen

EPI-NCSC zijn overblijfselen van de embryonale neurale kam op een locatie bij volwassenen, namelijk de uitstulping (bulge) van haarzakjes. Het zijn multipotente stamcellen die ...

Hallo, ik ben Maya Sibu Bloom van het Institute of Human Genetics en het Northeast England Stem Cell Institute aan de Newcastle University. En dit is van het Medical College of Wisconsin. Vandaag laten we u onze procedure zien voor het voorbereiden van Al-explantaten uit viskeuze follikels van muizen.B Explan zijn het startweefsel voor het voorbereiden van epidermale neurale kamstamcelculturen. Deze procedure omvat het dissekeren van het snuithaarveld en het microdissecteren van de haarfollikels, gevolgd door het isoleren van de BULs en het plaatsen hiervan in een kweekplaat. Laten we beginnen.Deze procedure begint met de dissectie van de bulge uit snorharenfolliculen van volwassen muizen. Normaal gesproken gebruiken we muizen van twee tot zes maanden oud, hoewel jongere muizen doorgaans meer stamcellen opleveren. De dieren worden geëuthanaseerd en gedurende ongeveer drie minuten volledig ondergedompeld in een mengsel van Betadine en waterstofperoxide in een verhouding van één-op-één voor desinfectie, waarna de gehele muis, en met name het gelaat, wordt besproeid met 75% ethanol en de muis naar de dissectiemicroscoop wordt gebracht.Dissekeer de WHI-kussentjes zorgvuldig in de laminaire flowkast, waarbij u voorkomt dat u in de haarbollen snijdt, en plaats deze in 한g's gebalanceerde zoutoplossing bij kamertemperatuur. Om de whi-follikels te dissekeren, houdt u de huid naast de follikel vast met een pincet en snijdt u vervolgens rondom de follikel met een rechte schaar. Snijd diep.Om beschadiging van de haarkuilen te voorkomen, wordt het snorharenfolliculus uit het kussentje getild en in een nieuwe plaat geplaatst. Met vers HBSS worden de folliculi in dezelfde plaat samengebracht. Pin een haarfollikel met verscherpte pincetten en naalden op een met zijde gecoate glazen Petrischaal die HBSS bevat.Spoel los adipose weefsel en dermaal weefsel weg met spuiten buffer totdat de snorharingfolliculus schoon is. Indien nodig, snijd de zenuw naar de snorharingfolliculus door en verwijder aanhechtend weefsel door te schrapen en herhaaldelijk te spoelen met HBSS. Snijd de visco-folliculus longitudinaal door met een microblade.Voorkom dat u te diep snijdt, omdat dit de uitstulping kan beschadigen. Verwijder eventueel bloed door herhaaldelijk HBSS te spuiten totdat het volledig is verdwenen. De verschijning van bloed is een goede indicatie dat de incisie diep genoeg was.Maak vervolgens een dwarsdoorsnede boven het niveau van de conus sinus en daarna een tweede dwarsdoorsnede op het niveau van de ring sinus, zeer dicht bij de huid binnen het geïsoleerde stukje follikel. U ziet nu de uitstulping binnen het kapsel. Kijk, daar is hij.Pak een uiteinde van de capsule vast met de pincet en verwijder de uitstulping. U ziet nu de lege capsule en de geïsoleerde pool van de uitstulping. Bewaar geïsoleerde uitstulpingen in een aparte kweekplaat in HBSS bij kamertemperatuur.Zorg ervoor dat er geen ander weefsel de samengevoegde uitstulpingen contamineert. Op dit punt kunnen de uitstulpingsplanten worden gekweekt voorafgaand aan de cultuur in bul-planten. Cultuurschalen van 35 millimeter worden gecoat met collageen door druppels van 50 µL collageen en 10 µL steriel water te plaatsen.6% zoutoplossing naast elkaar. Meng goed met een dubbel gebogen plakpipet en duw het naar de rand van de kweekplaat; incubeer overnacht in een schone omgeving, maar laat het niet uitdrogen. Hiervoor gebruiken we een exsiccaator met een schaaltje water op de bodem.De volgende dag, de dag van de cultuur. Spoel de platen met zoutoplossing en pre-incubeer de met collageen gecoate en gespoelde cultuurplaten gedurende ongeveer drie uur in het kweekmedium in de incubator; het kweekmedium bestaat uit 85% alpha modified MEM, 10% foetaal runderserum en 5% kiजembryo-extract van dag 11.Verwijder na de pre-incubatie het kweekmedium uit de platen en voeg verschillende BULs toe met zo min mogelijk medium. Verwijder het overtollige kweekmedium. Incubeer gedurende één uur in een celincubator in een bevochtigde atmosfeer met 10% zuurstof en 5% CO2.Voeg na één uur langzaam 1,5 milliliter kweekmedium toe. De CHE-planten moeten aan het collagene substraat hechten; vervang dagelijks 50% van het kweekmedium. Oké, laten we beginnen.En nu een blik op de culturen. Binnen drie tot vier dagen zullen zeer migrerende cellen uit de bolletjes emigreren. Let op hun stervormige morfologie en het overwegend ontbreken van cel-celcontacten.Gedurende de volgende paar dagen zullen er meer cellen emigreren en zullen de geëmigreerde cellen snel prolifereren; belangrijke zeldzame cellen met een afgeplatte morfologie, wat soms pas enkele dagen na de epidermale neurale kamstamcellen duidelijk wordt. Stamcellen worden soms in deze culturen waargenomen. Deze cellen zijn geen epidermale neurale kamstamcellen, maar zijn in plaats daarvan minder beweeglijke, vermoedelijke epidermale stamcellen of progenitoren; culturen die uit deze cellen bestaan, moeten worden weggegooid.We hebben zojuist gedemonstreerd hoe u bulk-explantculturen bereidt die epidermale neurore-stamcellen bevatten. Omdat neurore-cellen zeer migraterend zijn, zullen ze het bulk-explant binnen drie tot vier dagen verlaten. Na het explanteren wordt de bulge vervolgens verwijderd, waardoor de zuivere populatie neurore-cellen in de cultuurplaat achterblijft.Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om eraan te denken de muis zorgvuldig te desinfecteren om contaminatie te voorkomen. Men moet bovendien diep in de risku-pad snijden om beschadiging van de risku-follikels te vermijden. Met betrekking tot de culturen is het essentieel om onderscheid te maken tussen het migrerende distillaat, neurale kamcellen en de niet-migrerende, kasseisteenvormige keratinocyten.Dat was alles. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

mouse-epidermal-neural-crest-stem-cell-epi-ncsc-cultures

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Deze video beschrijft de methode die wordt gebruikt voor het isoleren van neuroprecursors uit de ontwikkelingslanden cortex van embryonale muizen. De procedure voor het verwijderen van embryo's uit de baarmoeder, het ontleden van de corticale weefsel, en verteren de geïsoleerde cerebrale cortex wordt weergegeven.

Cultuur van Mouse Neurale Stem Cell Voorlopers

Om neurale lijst stamcellen (NCSC) kweken in vitro, is een speciaal medium (NCSCM) vereist. Essentieel onderdeel van NCSCM is kippenembryo extract (CEE). We beschrijven hier accurate technieken om een ​​maximale hoeveelheid van pure en hoge kwaliteit CEE, inclusief details zoals de isolatie, maceratie, centrifugeren en filtratie processen te produceren.

Productie van Chick Embryo Extract voor de teelt van Muizen neurale lijst Stem Cells

Een snelle, robuuste manier van isoleren levensvatbare volwassen epitheliale stamcellen uit menselijke huid is beschreven. De methode maakt gebruik van enzymatische afbraak van de huid collageen matrix, gevolgd door het plukken van de haarfollikels en isolatie van single cell suspensies of weefsel fragmenten voor celkweek.

Isolatie en Cultuur van Volwassen epitheliale stamcellen uit menselijke huid

Dit artikel presenteert een robuuste protocol voor isolatie en kweek van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes.

Isolatie en Cultuur van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes

Isolatie van embryonale neurale lijst van de neurale buis vergemakkelijkt het gebruik...

Isolatie en Cultuur van neurale lijst cellen van embryonale Murine Neural Tube

Neurale lijst (NC) cellen afkomstig van menselijke pluripotente stamcellen (HPSC) hebben een groot potentieel voor het modelleren van de menselijke ontwikkeling en ziekte en voor celvervangingstherapieën. Hier, een voedingsvrije aanpassing van de momenteel...

Voedingsvrije Afleiding van neurale stamcellen uit humane pluripotente stamcellen

Epitheliële naar mesenchymale overgang (EMT) maakt het mogelijk dat kankers invasief worden. Om EMT te onderzoeken, wordt een op neurale stamcellen (NSC) gebaseerd in vitro model beschreven dat vrij is van serum en enzymen. Dit gestandaardiseerde systeem maakt een kwantitatieve en kwalitatieve beoordeling van celmigratie, gen- en eiwitexpressie mogelijk. Het model is geschikt voor geneesmiddelontdekking.

Een enzym en Serum-free neurale stamcel Cultuur Model voor EMT Investigation Geschikt voor Drug Discovery

Het doel van dit protocol is het isoleren van epidermale keratinocyten uit de rughuid van volwassen muizen voor een verscheidenheid aan downstreamtoepassingen zoals moleculaire biologie, biochemie, fluorescentie geactiveerde celsortering en primair in vitro gebruik (bijv. clonogene keratinocyten).

Isolatie van muizen epidermale keratinocyten en hun in vitro Clonogene cultuur

Hier introduceren wij een nieuwe microchirurgische techniek voor de isolatie van neurale stamcellen uit de E13 muis embryo ganglionaire eminentie.

Isolatie en cultuur van muis embryonale neurale stamcellen

Dit protocol beschrijft de dissectie en de cultuur van craniale neurale Crest cellen van muismodellen, voornamelijk voor de studie van de Celmigratie. We beschrijven de gebruikte technieken voor Live Imaging en de analyse van veranderingen in snelheid en celvorm.

Dissectie, cultuur en analyse van primaire Cranial neurale Crest cellen van de muis voor de studie van neurale Crest Celdelaminatie en migratie

We presenteren een driedimensionaal (3D) in vitro differentiatieprotocol dat neurosferen van reproduceerbare grootte genereert om craniale neurale lijstcellen te produceren uit embryonale stamcellen van muizen. We laten zien dat deze methodologie de variabiliteit vermindert in vergelijking met eerdere protocollen en hoe deze kan worden gebruikt voor multiplexed assay om de ontwikkeling van craniale neurale lijstcellen te bestuderen.

Het craniale Neurale Protocol van de Lijstcellen Driedimensionaal in vitro Differentiatie voor Gemultiplexte Analyse

Leer de isolatie van muizen epidermale neurale lijst stamcellen (EPI-NCSC) uit snorharen voor stamcelbiologie. Deze methode omvat microdissectie en weefselkweek om migratie binnen 3-4 dagen te observeren.

Muis Epidermale neurale lijst Stem Cell (EPI-NCSC) culturen

Meer video's verkennen