Name: Phase Contrast en differentieel interferentie contrast (DIC) Microscopie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-06T17:41:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Leer fasecontrast- en differentieel interferentiecontrastmicroscopie voor biomedisch onderzoek. Deze technieken verbeteren de visualisatie van transparante, kleurloze biologische specimen met hoge resolutie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Een aantal videoclips te tonen fasecontrast en DIC microscopie zijn afkomstig uit een andere video-artikel, getiteld <a href="details.stp?ID=197">Lagen van Symbiose</a> . Jove erkent vriendelijk deze bijdrage van de Leadbetter lab.

De volledige tekst protocol voor deze experimentele aanpak is beschikbaar in <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">Current Protocols in Cell Biology.</a>

De auteurs hebben niets te melden.

phase contrast en differentieel interferentie contrast (dic) microscopie

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Fase-contrast microscopie wordt vaak gebruikt om het contrast voor het transparante, niet licht-absorberende, biologische monsters te produceren. De techniek werd ontdekt door Zernike, in 1942, die de Nobelprijs ontving voor zijn prestatie. DIC microscopie, geïntroduceerd in de late jaren 1960, is populair in het biomedisch onderzoek, omdat het hoogtepunten randen van het monster structurele details, biedt een hoge-resolutie optische secties van dikke specimens, met inbegrip weefselcellen, eieren en embryo&#39;s en heeft geen last van de fase halo&#39;s typische van fase-contrast beelden. Dit protocol benadrukt de principes en praktische toepassingen van deze microscopische technieken.

Dit protocol benadrukt de principes en praktische toepassingen van Fase en differentieel interferentie contrast (DIC) Microscopie

Phase Contrast en differentieel interferentie contrast (DIC) Microscopie

Fasecontrastmicroscopie wordt vaak gebruikt om contrast te creëren voor transparante, niet-lichtabsorberende biologische specimens. De techniek werd ontdekt door ...

Lichtmicroscopie is een van de meest essentiële instrumenten, zo niet het meest essentiële, in het veld van biomedisch onderzoek. Afhankelijk van de toepassing zijn verschillende verlichtingsmodi wenselijk voor het bekijken van preparaten. Deze video demonstreert twee optische modi van transmissieverlichting: fasecontrastmicroscopie en DIC-microscopie (differentieel interferentiecontrast).Hallo, ik ben Victoria San Frolic van de kernfaciliteit Optische Beeldvorming aan het University of Texas Health Science Center in San Antonio. Vandaag laat ik u zien hoe u monsters correct kunt bekijken met behulp van fasecontrast- en differentieel-interferentiecontrastmicroscopie. Laten we beginnen.Standaard helderveldmicroscopie is niet toereikend voor het bekijken van transparante en kleurloze preparaten. Fasencontrastmicroscopie wordt vaak gebruikt om contrast te creëren voor transparante biologische preparaten die geen licht absorberen. De techniek werd in 1942 ontdekt door Zernike, die de Nobelprijs ontving voor deze prestatie.De fasecontrastmicroscoop is een lichtmicroscoop voor helderveldverlichting, maar dan voorzien van speciale fasecontrastobjectieven die een faseplaat of -ring bevatten, en een condensoranulus in plaats van een diafragma. De anulus bevindt zich meestal in de condensortoren en de grootte van de anulus moet worden afgestemd op de verschillende objectieven. Nadat de Kohler-verlichting is ingesteld, kiest u het juiste faseobjectief en draait u vervolgens de bijbehorende faseanulus in de condensor in de juiste positie.Zodra de fase-ring van het objectief en de condensatorring correct zijn uitgelijnd zodat ze concentrisch en overlappend zijn, kunnen we het preparaat bekijken en de focus correct instellen. Laten we nu demonstreren hoe fasecontrast eruitziet door de microscoop. Hier is een beeld van een plakje ratlever.Onder fasecontrast. Deze methode verbetert het uiterlijk van biologisch materiaal door het contrast te veranderen van verschillende grijstinten naar tinten van zwart tot wit. U zult echter merken dat monsters omgeven zijn door een halo, die de fijne structuur maskeert.Deze halo is een artefact van de belichting door de fase-ring. U zult merken dat dit preparaat zeer moeilijk te zien is wanneer we overschakelen naar helderveld. Door terug te schakelen naar fasecontrast kunnen we de structuur en vorm van de cellen in het ratleverweefsel duidelijk zien, sinds de introductie hiervan aan het eind van de jaren 60.Differentieel interferentiecontrast- of DIC-microscopie is populair in biomedisch onderzoek omdat het beelden met een hoge resolutie van fijne structuren produceert door de contrastrijke interfaces te versterken; het geproduceerde beeld is een zeer dunne optische sectie. In feite heeft het vermogen van DIC om optische secties te produceren het tot een nuttige modus van doorgelaat licht gemaakt voor complementaire confocale microscopie. De DIC-microscoop is een lichtmicroscoop voor helderveldmicroscopie met de toevoeging van de volgende elementen: een polarisator tussen de lichtbron en de condensor.Een DIC-straalsplitterprisma in het condensordeel, een DIC-straalcombineerprisma direct achter het objectief en een analyzer in de oneindigheidsruimte vóór de twee lenzen. Om de beste prestaties uit DIC-optiek te halen, is het belangrijk om eerst de lichtmicroscoop af te stellen op Köhler-verlichting en vervolgens de DIC-elementen in het optische pad te plaatsen. Licht van de bron gaat door een polarisator en wordt vervolgens gesplitst door het eerste prisma.Deze gepaarde stralen lopen vlak naast elkaar. Als beide stralen door hetzelfde materiaal in het preparaat passeren, zullen ze bij recombinatie door het tweede prisma niet met elkaar interfereren en daarom grijs verschijnen. Echter, bij de rand van een structuur passeert één straal van het paar een ander materiaal dan zijn partner, waardoor deze wordt beïnvloed.Wanneer deze stralen door het tweede prisma worden samengevoegd, zullen ze ofwel constructief interfereren, wat een heldere plek oplevert, of destructief, wat een donkere plek oplevert. Hier is een weergave van diatomeeën onder DIC-contrast. U zult merken dat fijne details van de structuur van de diatomeeen gemakkelijk zichtbaar zijn.Wanneer de DIC-optiek echter wordt verwijderd, verdwijnen deze details. Het contrast over het preparaat is aan de ene kant helder en aan de andere kant donkerder. Dit wekt de indruk van topografie, maar in feite is dit een illusie.De richting van het schaduwwerking-effect kan worden omgekeerd door de polarisator via een crossover-punt naar het tegenovergestelde contrast te draaien. We hebben zojuist de optische modi van fasecontrast en DIC bekeken. Ter herinnering: fasecontrast-eliminatie verandert de contrastrijke specimens van zwart naar wit en is nuttig voor het bekijken van specimens die zowel kleurloos als transparant zijn.DIC genereert ook contrast in het preparaat. Dit gebeurt door een afbeelding met een hoge resolutie van een dunne optische doorsnede te creëren. Dat is alles.Bedankt voor het kijken en veel succes met uw microscopie.

phase-contrast-and-differential-interference-contrast-dic-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Neisseria meningitidis (Nm), een gram negatieve mens-specifieke respiratoire pathogeen, kan binden aan menselijke α-actinine. Hier presenteren wij een protocol voor de visualisatie van colocalisation van de bacterie met de intracellulaire α-actinine na bacteriële binnenkomst in menselijke hersenen microvasculaire endotheelcellen (HBMECs).

Visualisatie en kwantificering van intracellulaire interacties van Neisseria meningitidis En Human α-actinine door Confocale Imaging

We demonstreren het gebruik van fluorescentie foto activerings lokalisatie microscopie (FPALM) om gelijktijdig meerdere soorten fluorescerend gelabelde moleculen binnen cellen af te beelden. De beschreven technieken leveren de lokalisatie op van duizenden tot honderdduizenden individueel fluorescent gelabelde eiwitten, met een precisie van tientallen nanometer binnen enkele cellen.

Gelijktijdige Multicolor beeldvorming van biologische structuren met fluorescentie Fotoactivatie Lokalisatie Microscopie

We beschrijven het gebruik van een standaard optisch microscoop om kwantitatieve metingen van cellulaire massa, volume en dichtheid uit te voeren door een combinatie van lichtveld en differentiële interferentiecontrast beeldvorming.

Kwantitatieve Optische Microscopie: Meting van Cellulaire biofysische eigenschappen met een standaard optische microscoop

Confocale microscopie wordt gebruikt om beelden rustige en vloeiende colloïd-polymeer mengsels die worden bestudeerd als modelsystemen voor aantrekkelijke schorsingen. Beeldanalyse algoritmen worden gebruikt om structurele en dynamische parameters voor de colloïdale deeltjes die veranderingen vanwege geometrische opsluiting meten berekenen.

Confocale beeldvorming van Confined Quiescent en Vloeiende colloïd-polymeermengsels

Hier presenteren we een praktische gids voor het bouwen van een geïntegreerde microscopie-systeem, dat wordt samengevoegd conventionele epi-belichting fluorescerende imaging, single-molecuul detectie gebaseerde Super resolutie beeldvorming en Multi-Color single-molecuul detectie, met inbegrip van single-molecuul fluorescentie resonantie energieoverdracht imaging, in één set-up op een kostenefficiënte manier.

Uitvoeren van meerdere Imaging modi met één fluorescentie Microscoop

Het doel van dit protocol is om een bewezen aanpak voor de bereiding van plasmonic nanodeeltjes monsters en voor het uitvoeren van enkele deeltjes spectroscopie op hen met differentiële interferentie contrast (DIC) microscopie detail.

Het uitvoeren van de spectroscopie op Plasmonic nanodeeltjes met transmissie-gebaseerde Nomarski-type differentiële interferentie contrast microscopie

Dit manuscript beschrijft een methode voor het gebruik van eencellige fluorescentiemicroscopie om bacteriële concurrentie in cocultuur te visualiseren en te kwantificeren.

Kwantificering van interbacteriële concurrentie met behulp van single-cell fluorescentiebeeldvorming

Differentiële dynamische microscopie (DDM) combineert kenmerken van dynamische lichtverstrooiing en microscopie. Hier wordt het proces van het gebruik van DDM om gereconstitueerde cytoskeletnetwerken te karakteriseren door de subdiffusieve en gekooide dynamiek van deeltjes in vimentinenetwerken en de ballistische beweging van actieve myosine-gedreven actine-microtubulecomposieten te kwantificeren.

Kwantificeren van cytoskeletdynamica met behulp van differentiële dynamische microscopie

Dit protocol beschrijft de geavanceerde beeldvormingstoepassingen en het beheer van gedeelde middelen van een laser-scannend confocaal microscoopsysteem, geïntegreerd met een multiplexed arraydetector voor hoogresolutie cellulaire en subcellulaire beeldvorming. De workflow maakt multimodale beeldvorming mogelijk van confocaal tot superresolutie (~120 nm) binnen één platform, waardoor visualisatie op nanoschaal toegankelijker wordt.

Superresolutie beeldvorming en gedeeld beheer: een protocol voor confocale microscopie met multiplexdetectie

Voor de evaluatie van nieuwe stamcellen therapieën is het belangrijk om niet-invasief spoor de geïnjecteerde cellen in vivo. Deze video toont u hoe de menselijke mesenchymale en embryonale stamcellen met ijzeroxide gebaseerde contrastmiddelen label in vivo voor latere MR imaging in vivo.

Etikettering hESC &#39;s en hMSCs met ijzeroxide nanodeeltjes voor niet-invasieve in vivo Tracking met MR Imaging

Leer fasecontrast- en differentieel interferentiecontrastmicroscopie voor biomedisch onderzoek. Deze technieken verbeteren de visualisatie van transparante, kleurloze biologische specimen met hoge resolutie.

Phase Contrast en differentieel interferentie contrast (DIC) Microscopie

Meer video's verkennen