Name: Dissectie van larvale CNS in Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Leer de dissectie van het centrale zenuwstelsel uit derde instar larven van Drosophila melanogaster. Deze methode behoudt de CNS-intact voor neurobiologisch onderzoek naar eiwitexpressie en ontwikkeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li> Ontleden 3 e instar larven, waardoor CNS aan de cuticula. Plaats in een 1.5 ml buis. </li><li> Fix in PBS (1x) met 2% formaldehyde gedurende 40 min met schommelen. ; Gebruik 250ul voor elke 5-10 ontleed CNS. </li><li> Verwijder de formaldehyde en in het kort drie keer wassen met PBS + 0,1% Triton X-100 (PBST). Gebruik een fijn getrokken Pasteur pipet om het verlies van weefsel te voorkomen. </li><li> Blokkeer niet-specifieke eiwit binding sites en permeabilize celmembranen door het incuberen van weefsel 1-8 uur in PBST + 5% BSA, rocken bij 4 ° C. </li><li> Incubeer in primair antilichaam verdund in PBST + 5% BSA rocken bij 4 ° C gedurende de nacht. Optimale antilichaamverdunning zal variëren voor verschillende antilichamen. </li><li> Spoel 3x in PBST gevolgd door twee 30min wassen bij 4 ° C. </li><li> Incubeer in secundair antilichaam verdund in PBST + 5% BSA gedurende 1-3 uur rocken bij 4 ° C. Spoel 3x in PBST gevolgd door twee 30min wassen bij 4 ° C. Als de secundaire is geconjugeerd aan een lichtgevoelige stof, wikkel de buis in aluminiumfolie. </li><li> Ontleden weefsel verder (indien nodig) en op dia&#39;s. </li></ol>

<ol>
	<li>Lin, D. M., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopic+and+increased+expression+of+fasciclin+II+alters+motoneuron+growth+cone+guidance.">Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance.</a> Neuron. 13, 507-523 (1994).</li><li>Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=even+skipped+is+required+to+produce+a+trans-acting+signal+for+larval+neuroblast+proliferation+that+can+be+mimicked+by+ecdysone.+Development+128.">even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128.</a> , 1899-1909 (2001).</li></ol>

De auteurs hebben niets te melden.

Deze video laat zien hoe ontleden de CNS uit derde instar Drosophila larven. Na de dissectie, kan het centrale zenuwstelsel worden gekleurd met behulp van een standaard protocol immunohistochemie. Op dit moment, veel is nog onbekend hoe de volwassen zenuwstelsel is en opgewekt als hoe het slaat en stuurt de gegevens. Studies van de zich ontwikkelende Drosophila larven CNS moeten versterken onze kennis van het zenuwstelsel bedrading en functie. Drosophila larven vertonen een aantal stereotpyed gedrag, zoals een reactie op omgevingsfa...

<table><tbody><tr><td>Pincet</td><td>fijn gepunt</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Horlogeglas met 9 putjes</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastic Petri-schaal</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissectie van larvale cns in drosophila melanogaster

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Het centrale zenuwstelsel (CZS) van Drosophila larven is complex en slecht begrepen. Een manier om het centraal zenuwstelsel te onderzoeken is om immunohistochemie gebruiken om de expressie van verschillende nieuwe en marker-eiwitten te onderzoeken. Kleuring van hele larven is niet praktisch, omdat de harde cuticula voorkomt dat antilichamen van binnendringen in het lichaam holte. Om vlekken deze weefsels is het noodzakelijk om het dier voorafgaand ontleden de vaststelling en vlekken. In dit artikel zullen we laten zien hoe je Drosophila larven ontleden zonder beschadiging van het centrale zenuwstelsel. Begin met het scheuren van de larve in de helft met een paar fijne tang, en draai vervolgens de nagelriem &quot;inside-out&quot; aan het centrale zenuwstelsel bloot te leggen. Als de dissectie wordt zorgvuldig uitgevoerde CNS zal gehecht blijven aan de nagelriem. We meestal houden het centraal zenuwstelsel aan de cuticula gedurende de fixatie en kleuring stappen, en alleen volledig verwijderen van het CZS van de cuticula net voor het monteren van de monsters op glasplaatjes. We tonen ook enkele representatieve afbeeldingen van een schaal voor het CNS bevlekt met Eva, een transcriptiefactor, uitgedrukt in een subset van neuronen in het CZS. Het artikel sluit af met een bespreking van enkele van de praktische toepassingen van deze techniek en de mogelijke problemen die zich kunnen voordoen.

In dit artikel zullen we laten zien hoe het centrale zenuwstelsel ontleden uit derde instar Drosophila larven.

Dissectie van larvale CNS in Drosophila melanogaster

Het centraal zenuwstelsel (CZS) van Drosophila-larven is complex en nog onvoldoende begrepen. Een manier om het CZS te onderzoeken, is het gebruik van immunohistochemie om ...

Mijn naam is Nate Fer. Ik ben een promovendus hier aan Princeton. Oké. Wat je moet doen is de worm vinden en deze vervolgens overbrengen naar een schaaltje met wat PBS.Dus zo zien ze eruit en je scheurt ze doormidden waardoor alle ingewanden eruit vliegen. Dit is, dus ik heb hier de cuticula met een heleboel interne structuren en ik probeer ervoor te zorgen dat het binnenstebuiten is gekeerd en dat het centraal zenuwstelsel nog vastzit. Dus. Heb hem. Ja. Dus hij zit daar.Precies daar. Welke? Je kunt het zien op mijn rechterpincet.Je hebt twee verschillende lobben en dan is er het CZS zelf, dat zich naar beneden uitstrekt als een penwortel; het bevindt zich hier rechts van de donkere mondhaken en de rest van de cuticula. Wilt u het CZS op deze manier scheiden? Ja, zeker.Ik kan het eraf trekken. En dat is gezien van bovenaf. Dus u ziet de twee lobben en vervolgens ziet u het centraal zenuwstelsel zelf.Waarom voert u dit experiment uit? We zijn geïnteresseerd in het bestuderen van de eiwitexpressie in het zenuwstelsel van de larven. De beste manier om dit te doen, is door het weefsel van de larven te dissekeren.Omdat het voor antilichamen moeilijk is om door de cuticula van een intact

dissection-of-larval-cns-in-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Drosophila larven NMJ Dissection

Drosophila melanogaster larven zorgen voor een ideaal modelsysteem om de mechanismen van het axonaal transport te onderzoeken binnen de larvale segmentale zenuwen. Met behulp van deze procedure, kan 3 e instar larven dragen verschillende mutaties worden vergeleken met wild-type larven.

Visualisatie van larvale Segmentale zenuwen in 3 Rd Instar Drosophila Larvale Voorbereidingen

Beschrijven we een Flippase-geïnduceerde intersectionele Gal80/Gal4 repressie (FINGR)-methode, waardoor weefsel-specifieke Forever om Gal80 expressiepatronen te bepalen. Waar Gal4 en FLP elkaar overlappen, is Gal4 uitdrukking ingeschakeld (Gal80 omgedraaid out) of uit (Gal80 gespiegeld in). De FINGR methode is veelzijdig voor klonale analyse en neurale circuit in kaart brengen.

In kaart brengen en de toepassing van Enhancer-trap Flippase Expression in larvale en volwassen Drosophila CNS

Deze video beschrijft hoe de volwassen Drosophila-hersenen kunnen worden ontleed en geïsoleerd - een procedure die nodig is voor het visualiseren van het orgaan, dat anders wordt verduisterd door de cuticula, het oog en het tracheaweefsel. Het voorbeeldprotocol toont een gedetailleerde demonstratie die hoogwaardige preparaten oplevert die kunnen worden gebruikt voor immunostaining- en beeldvormingsmethoden in de drosophila-neurobiologie.

Drosophila Volwassen hersendissectie: een methode in vliegneurobiologie

This video demonstrates the dissection and mounting of brain explants from Drosophila larvae. The central nervous system (CNS), attached to eye disks, is extracted from the larvae and then mounted on a glass slide in a physiological saline solution.

Dissection and Mounting of Fruit Fly Larval Brain Explants

Een blessure paradigma met behulp van de Drosophila larven ventrale zenuw koord aan het centrale zenuwstelsel regeneratie en reparatie te onderzoeken wordt beschreven. Stekende gevolgd door laser scanning confocale microscopie in time-lapse en vaste monsters, gecombineerd met kwantitatieve analyse met doelgericht ontwikkelde software en genetica, worden gebruikt om de moleculaire mechanismen van CNS regeneratie en reparatie onderzoeken.

Een blessure Paradigm aan het centrale zenuwstelsel Reparatie Onderzoek in<em&gt; Drosophila</em

Dit protocol Gegevens een gestroomlijnde methode voor live cell imaging uitvoeren in het kader van een intact larvale hersenen. Live cell imaging benaderingen zijn van onschatbare waarde voor de studie van asymmetrische neurale stamcellen divisies evenals andere neurogene en ontwikkelingsprocessen, consequent blootleggen van mechanismen die eerder over het hoofd gezien.

Live-Imaging van<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvale neuroblasts

Dit protocol beschrijft de dissectie en immunokleuring van volwassen Drosophila melanogaster brain weefsels. Dit protocol benadrukt in het bijzonder het gebruik van Drosophila paddestoel lichaam en fotoreceptor neuronen als voorbeeld neuronale subsets kunt weergeven die nauwkeurig kunnen worden gebruikt voor het ontdekken van de algemene beginselen die ten grondslag liggen aan vele aspecten van neuronale ontwikkeling.

Dissectie en immunefluorescentie kleuring van Mushroom lichaam en fotoreceptor neuronen in de hersenen van de volwassen Drosophila melanogaster

Dit protocol beschrijft een methode om vast te leggen van de aflopende elektrische activiteit van het centrale zenuwstelsel van Drosophila melanogaster zodat de kosten-efficiënte en handige testen van farmacologische agenten, genetische mutaties van neurale eiwitten, en/of de rol van onontgonnen fysiologische trajecten.

Elektrofysiologische opname van de activiteit van het centrale zenuwstelsel van derde-Instar Drosophila Melanogaster

Dit protocol beschrijft drie stappen om larvale en volwassen Drosophila optische kwabben voor te bereiden op beeldvorming: 1) hersendissecties, 2) immunohistochemie en 3) montage. De nadruk wordt gelegd op stap 3, omdat er verschillende montagerichtingen nodig zijn om specifieke optische lobstructuren te visualiseren.

Dissectie, immunohistochemie en montage van larvale en volwassen Drosophila-hersenen voor visualisatie van optische kwabben

Hier bespreken we een workflow om levende explant-hersenen van Drosophila melanogaster derde instarlarven voor te bereiden, te ontleden, te monteren en in beeld te brengen om de cellulaire en subcellulaire dynamiek onder fysiologische omstandigheden te observeren.

Live-Cell Imaging van Drosophila melanogaster Derde Instar Larvale Hersenen

Leer de dissectie van het centrale zenuwstelsel uit derde instar larven van Drosophila melanogaster. Deze methode behoudt de CNS-intact voor neurobiologisch onderzoek naar eiwitexpressie en ontwikkeling.

Dissectie van larvale CNS in Drosophila melanogaster

Meer video's verkennen