Name: Protocollen voor orale infectie van lepidoptera Larven met Baculovirus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-09-03T23:29:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: Leer orale infectietechnieken van lepidopteran larven met baculovirus voor entomologisch onderzoek. Deze methoden omvatten druppelvoeding en dieetplug bioassays om insecticide efficiëntie te analyseren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ga naar <a href="http://www.springerprotocols.com/Abstract/doi/10.1007/978-1-59745-457-5_18">Springer Protocols</a> voor meer informatie over de engineering baculovirus als een insecidical agent en de orale infectie technieken die gebruikt worden in deze test.

De auteurs hebben niets te melden.

protocollen voor orale infectie van lepidoptera larven met baculovirus

Protocols for Oral Infection of Lepidopteran Larvae with Baculovirus

Baculovirussen worden op grote schaal gebruikt als eiwit-expressievectoren en als insecten ongediertebestrijding agenten. Deze video laat zien hoe lepidoptera larven kunnen worden besmet met veelvlakken door druppeltjes voeding en dieet op basis van plug-bioassays. Dit begeleidende Springer Protocols gedeelte geeft een overzicht van de baculovirus levenscyclus en het gebruik van baculovirussen als insecticide middelen, waaronder discussie over de voors en tegens voor het gebruik van baculovirussen als insecticiden, en de vooruitgang in genetische verbetering van baculovirussen voor een betere insecticide werkzaamheid.

In deze video, tonen we aan orale infectie technieken van lepidoptera larven met baculovirus om insecten efficiency te bepalen.

Protocollen voor orale infectie van lepidoptera Larven met Baculovirus

Baculovirussen worden op grote schaal gebruikt, zowel als vectoren voor eiwitexpressie als voor de bestrijding van insectenplagen. Deze video laat zien hoe lepidoptera-larven kunnen worden ...

Het Vao-virus wordt veelvuldig gebruikt als DNA-vector in combinatie met insecten-cellijnen voor eiwitexpressie. Het feit dat dit virus insecten echter efficiënt infecteert met dodelijke gevolgen, maakt het ook tot een effectief insecticide middel. In Brazilië wordt bijvoorbeeld jaarlijks het wildtype Balo-virus toegepast op meer dan 1 miljoen hectare sojabonen om de fluweelboonenrups te bestrijden. Om hun insecticide werking te verhogen, zijn Balo-virussen genetisch gemodificeerd met genen die coderen voor insectspecifieke toxinen die actief zijn binnen de HemosIL van het insect.In deze video demonstreren we methoden voor orale infectie van lepidopteralruiken met bacao virus om de insecticide werking te analyseren. Hallo, ik ben van het Blind Boning-laboratorium van de afdeling Oftalmologie aan de Iowa State University, en ik ben Wendy Sparks, eveneens van het Boning-lab. Vandaag laten we u twee procedures zien voor VA-virusinfectie van lepidopteralruiken.Eerst laat harran zien hoe neonatale larven kunnen worden geïnfecteerd met behulp van een bioassay via druppelvoeding. Daarna laat ik zien hoe larven in het midden tot late stadium kunnen worden geïnfecteerd met behulp van een bioassay via bloed in het dieet. Laten we beginnen.Bioassays met druppelvoeding kunnen worden gebruikt voor de bepaling van de dodelijke dosis van abacavir en de overlevingstijd van met balo-virus geïnfecteerde larven. Voor deze assay worden over het algemeen vroege instars of neonatale larven gebruikt.Zorg ervoor dat u vóór aanvang bekers met het juiste dieet bij de hand heeft. Bereid daarnaast de juiste virusverdunningen voor, inclusief groene voedselkleurstof tot een concentratie van 4% volume. Om de letale virusconcentratie te bepalen, moet de verdunning een mortaliteitsbereik van 1 tot 99% opleveren. Voorlopige bio-assays kunnen nodig zijn om een geschikt bereik van virusconcentraties vast te stellen. Maak, nadat de buis is gevortexd om bezinking van de polyhedra te voorkomen, twee concentrische cirkels van kleine druppels van de virusoplossing in een Petri-schaal van 60 millimeter.Vergeet niet voor elke gebruikte virusconcentratie ook een negatieve controle met een schijninfectie (mock infection) in te richten. Zet vervolgens de behandeling op door 25 tot 30 neonatale larven met een steriel penseel naar het midden van de concentrische cirkels over te brengen. Plaats het deksel op de schaal en verzegel deze met parafilm om te voorkomen dat de larven ontsnappen.Gebruik idealiter verschillende penselen voor de overdracht naar elk virustype om contaminatie tussen de behandelingen te voorkomen. Laat de schaal 10 tot 15 minuten op kamertemperatuur staan, gedurende welke tijd de larven drinken. De larven die zich hebben gevoed, kunnen worden geïdentificeerd aan de groene kleur van de voorste darm als gevolg van de groene voedselkleurstof; breng alleen de larven die zich hebben gevoed over naar plastic bekertjes van één ounce die dieet bevatten, waarbij één larve per bekertje wordt overgebracht.Dek na het overbrengen van de larven de bekers af met deksels en incubeer deze gedurende 24 uur na infectie bij 28 °C. Verwijder alle bekers met dode larven. Deze vroege sterfgevallen zijn waarschijnlijk het gevolg van letsel tijdens de hantering.Bij het gebruik van deze bioassay om de dodelijke dosis te bepalen, moeten de larven elke twee tot drie dagen worden gecontroleerd totdat de schijngeïnfecteerde larven en eventuele overlevende virusbehandelde larven zijn verpopt of zijn begonnen met het graven om te verpoppen; virusgeïnfecteerde larven blijven bovenop het voedsel en sterven na enkele dagen. Dode larven zullen soms rimpelen en zwart worden; larven die sterven door infectie worden in essentie zakken met polyhedra, die volledig zullen oplossen. Als ze op dat moment mechanisch worden verstoord, wordt de larvale mortaliteit in elke behandeling gescoord.Bioassays voor letale concentraties moeten drie of vier keer op verschillende momenten worden herhaald. Gebruik 30 individuen per dosis voor elk virus of controlebehandeling. Gebruik een geschikt programma voor probit-analyse, zoals polo of SAS, om de lc 50-waarden, 95% betrouwbaarheidsintervallen en de relevante statistieken te berekenen.Deze druppelvoedingsanalyse kan ook worden gebruikt om ST 50-overlevingstijden te bepalen. In dat geval wordt de mortaliteit van de larven elke vier tot acht uur gescoord, met frequentere observaties. Als de mortaliteitssnelheid hoog is, worden bioassays voor overlevingstijd uitgevoerd met een lc 99-dosis van het virus; mediane overlevingstijden en de 95% betrouwbaarheidsgrenzen worden berekend met de Kaplan-Meier-schatter met behulp van een s plus- of SAS-programma.Nu Harang u de bioassay voor druppelvoeding heeft laten zien, zal ik u de bioassay voor voedingspluggen laten zien. Bij de bioassay voor voedingspluggen worden larven in het midden tot late stadium gevoed met een voedingsplug die is behandeld met een bekende dosis virus om de letale dosis of LD 50 te bepalen. Verwijder de dag vóór het uitvoeren van deze assay het voeder uit de beker om de larven een nacht te laten vasten.Deze stap zal de snelheid verhogen waarmee de larven het virus consumeren. Bereid de volgende dag het geïnoculeerde dieet voor door het in kleine blokjes van ongeveer twee kubieke millimeter te snijden. Als de dieetblokjes te klein zijn, zullen ze uitdrogen.Als de voedingskubussen te groot zijn, zullen de larven niet in staat zijn om de volledige voedingskubus gedurende de nacht te consumeren. Voeg nu één tot twee µL polyhedra-suspensie toe aan elke voedingskubus. De suspensie bevat 4% volume aan voedingskleurstof.Laat de suspensie vijf tot 15 minuten in het dieet intrekken. Vergeet niet om ook een dieetkubus behandeld met een mock-virus voor te bereiden als negatieve controle. Breng vervolgens één dieetkubus over naar elke larve in het vierde stadium in elke beker.Plaats de bekertjes vervolgens gedurende de nacht in de incubator bij 28 °C. Verwijder de volgende dag alle larven die de dieetkubus niet volledig hebben opgegeten. Voeg daarna aan elk bekertje met resterende larven een groot stuk dieet toe. Houd de larven bij 28 °C en voeg naar behoefte extra dieet toe totdat de mock-geïnfecteerde larven en de overlevende virus-geïnfecteerde larven klaar zijn met eten of zijn begonnen met verpoppen.Note op dit moment het aantal dode en overlevende insecten op. We tonen u twee methoden voor het infecteren van insecten met het baculovirus: bloeden (feeding biopsy) en de dieet-plaquebiopsie. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat de kadavers van door het virus gedode larven doorgaans fragiel zijn en gemakkelijk kunnen scheuren, waardoor het virus vrijkomt.Steriliseer dus de werkoppervlakken en voeg besmette handschoenen en wegwerpmaterialen op een passende manier toe aan het afval om contaminatie te voorkomen. Dat is alles. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

protocols-for-oral-infection-of-lepidopteran-larvae-with-baculovirus

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In deze video, tonen we twee microapplicator technieken die worden gebruikt om infecteren van lepidoptera larven met baculovirus om insecten efficiency te bepalen.

Protocollen voor microapplicator-geassisteerde Infectie van lepidoptera Larven met Baculovirus

De hier beschreven methode maakt gebruik van directe injectie van entomopathogene bacteriën in de hemocoel...

Opfok en Injectie van<em&gt; Manduca sexta</em&gt; Larven naar bacteriële virulentie beoordelen

Mondelinge en intra haemocolic infectie van larven van de grotere...

Het Insect<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Als een krachtige Infectie model te Bacteriële Pathogenese Onderzoek

This video demonstrates a method to establish a Mycobacterium bovis infection model in the larvae of the greater wax moth, Galleria mellonella. A bioluminescent strain of Mycobacterium bovis BCG is injected into the hemolymph of the larva to establish infection, and the bioluminescence is measured at predefined intervals to study the progress of infection.

A Technique to Establish a Bacterial Infection Model in Insect Larvae

De mediterrane fruitvlieg (Ceratitis capitata) (Diptera: Tephritidae) is een wereldwijde plaag in de landbouw. Een dieper begrip van zijn biologie is cruciaal voor het beheersen van fruitvliegpopulaties en daarmee het verminderen van de economische impact. Micro-injectie van embryo's is een fundamenteel hulpmiddel dat zowel transformatie van de kiemlijn als reverse genetica studies in deze soort mogelijk maakt.

Levering van nucleïnezuren door middel van Embryo micro-injectie in de Worldwide Landbouw Pest Insect,<em&gt; Middellandse-Zeevlieg</em

Dit protocol beschrijft een warmte schok-geïnduceerde proteïne expressie systeem (pDHsp/V5-zijne/sf9 cel), die kan worden gebruikt voor het uitdrukken van vreemde proteïnen of evaluatie van de anti-apoptotic activiteit van potentiële buitenlandse eiwitten en hun afgeknotte amino zuren in insect cellen.

Voorbijgaande expressie van buitenlandse genen in Insect cellen (sf9) voor eiwit functionele Assay

In dit protocol is baculovirus geproduceerd door voorbijgaande transfectie van baculovirus plasmide in Sf9 cellen en versterkt in een serumvrij schorsing cultuur. De bovendrijvende substantie is gezuiverd door de chromatografie van de affiniteit van heparine en verder geconcentreerd door ultracentrifugatie. Dit protocol is handig voor de productie en zuivering van baculovirus voor gen-therapie-toepassing.

Productie en zuivering van Baculovirus voor toepassing van de gentherapie

Hier presenteren we een protocol om te produceren huis vliegen carboxylesterase eiwitten in vitro met een baculovirus gemedieerde insect cel expressie systeem en later functioneel karakteriseren van hun rollen in metaboliseringssysteem permethrin, daarmee overdracht van pyrethroïde weerstand door het uitvoeren van cel-gebaseerde MTT assay en in vitro metabole studies.

Functionele karakterisering van Carboxylesterases in Insecticide resistente huis vliegt, Musca Domestica

Hier presenteren we de protocollen voor het gebruik van het insect cel en baculovirus eiwit expressie systeem voor de productie van grote hoeveelheden uitgescheiden eiwithoudende gewassen voor eiwit kristallisatie. Een vector baculovirus expressie is gewijzigd met GP67 of insect hemolin signaal peptide voor plant secretie eiwituitdrukking in insect cellen.

Wijzigen Baculovirus expressievectoren voor de productie van plantaardige eiwitten in Insect cellen uitgescheiden

Het baculovirus expressie vectorsysteem (BEVS) is een robuust platform voor expressiescreening en productie van eiwit arginine methyltransferases (PRMT's) voor biochemische, biofysische en structurele studies. Milligram hoeveelheden materiaal kunnen worden geproduceerd voor de meerderheid van PRMT's en andere eiwitten van belang die een eukaryotische expressie platform vereisen.

Productie van recombinante PRMT-eiwitten met behulp van het Baculovirus Expression Vector System

Structurele en biochemische studies van menselijke membraantransporters vereisen milligramhoeveelheden stabiel, intact en homogeen eiwit. Hier beschrijven we schaalbare methoden om transporteurs van menselijke opgeloste stoffen te screenen, tot expressie te brengen en te zuiveren met behulp van codon-geoptimaliseerde genen.

High-Throughput expressie en zuivering van menselijke opgeloste stoffen voor structurele en biochemische studies

Leer orale infectietechnieken van lepidopteran larven met baculovirus voor entomologisch onderzoek. Deze methoden omvatten druppelvoeding en dieetplug bioassays om insecticide efficiëntie te analyseren.

Protocollen voor orale infectie van lepidoptera Larven met Baculovirus

Meer video's verkennen