Name: Het verkrijgen van Eieren van Xenopus laevis Teven (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-20T20:12:00.000+00:00
Duration: 4 min 47 s
Description: Leer hoe je eieren verkrijgt van Xenopus laevis-kikkers voor celbiologisch onderzoek. Dit protocol toont het induceren van eiafzet, dejellying en sorteren van hoge kwaliteit eieren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De volledige tekst protocol voor deze experimentele aanpak is beschikbaar in <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">Current Protocols in Cell Biology</a> .

De auteurs hebben niets te melden.

het verkrijgen van eieren van xenopus laevis teven

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

De eieren van de Xenopus laevis intact, gelyseerd en / of gefractioneerde nuttig zijn voor een breed scala aan experimenten. Dit protocol laat zien hoe eieren leggen induceren, te verzamelen en dejelly de eieren, en sorteren van de eieren op een beschadigde eieren te verwijderen.

Het verkrijgen van Eieren van Xenopus laevis Teven

Intacte, gelyseerde en/of gefractioneerde eitjes van Xenopus laevis zijn nuttig voor een breed scala aan experimenten. Dit protocol laat zien hoe de eiafzetting kan worden geïnduceerd, ...

Eiextracten van Xip Labis zijn nuttig als bronnen van cytoplasmatisch en organelmateriaal voor in vitro reconstitutie van cellulaire processen, zoals kernassemblage en nucleair eiwitimport. Voordat u de eiextracten kunt gebruiken, moet u echter eerst de eieren verkrijgen van vrouwelijke kikkers. Hallo, mijn naam is Marie Cross en ik ben een promovendus in het lab van Dr. Maureen Power van de afdeling Cell Biology aan de Emory University in Atlanta, Georgia.Vandaag laten we u zien hoe u jelly-eieren verkrijgt en isoleert van volwassen vrouwtjes van de soort opus lavis. Deze procedure omvat de volgende stappen: het voorbereiden van de kikkers op de eiafzetting met zwanger marere, het induceren van de eiafzetting met menselijk choriongonadotrophine en het sorteren van ongeschikte eieren of oocyten. Laten we beginnen.Om eieren te produceren, worden volwassen vrouwelijke kikkers eerst geprimed met zwangerschapsserum-gonadotrofine van merries. Om de primingprocedure te starten, bereid een tank voor met honderd millimolaire natriumchloride om de kikkers in te huisvesten. Na injectie moeten geprimede kikkers worden gehouden met een dichtheid van ongeveer één kikker per liter.Optimale eiproductie wordt behouden door kikkers te huisvesten bij 18 °C. Injecteer de kikker subcutaan in de dorsale lymfzak met 0,5 µL van 200 units per µL pregnant mare serum gonadotropin, met behulp van een naald van 27 gauge bevestigd aan een spuit van 1 µL.Plaats de geprimede kikkers terug in het aquarium met 100 mM natriumchloride. Induceer na twee tot drie dagen de eiafzetting door de kikkers opnieuw subcutaan in de dorsale lymfzak te injecteren met 0,5 µL van 100 IU/mL menselijk choriongonadotrofine.Plaats elke kikker na injectie in vijf liter van honderd millimolaire natriumchloride. Het is aanbevolen om elke kikker in een eigen container te plaatsen, aangezien de kwaliteit van de eitjes per kikker verschilt. Ongeveer 16 tot 22 uur na de injectie van humaan choriongonadotropine wordt de kikker overgeplaatst naar een schoon watertankje en worden de eitjes in een bekerglas gegoten.Het is raadzaam om de kikkers één tot twee dagen lang te observeren op tekenen van infectie op de injectieplaats. In dit stadium is elk ei omgeven door een transparante gelei-laag, die voorkomt dat ze elkaar raken. Om de gelei van de eieren te verwijderen, worden de eieren eenmaal gespoeld met 2% L-cysteïne bij pH 8, waarna ze verder worden geïncubeerd in 100 µL L-cysteïneoplossing van 2% per kikker gedurende ongeveer vijf minuten. Draai de eieren bij kamertemperatuur na vijf minuten voorzichtig en periodiek rond.Giet de cysteïne-oplossing van de deje-eieren af en was ze drie keer in een 0,25 x gemodificeerde ringer-oplossing. Giet de eieren, terwijl u onder een dissectiemicroscoop werkt, in een glazen Petrischaal van honderd millimeter om debris te verwijderen. Verwijder de slechte eieren uit de Petrischaal met een Pasteur-pipet.Rijpe xip-eieren hebben een donker gepigmenteerde bovenhelft en een lichte onderhelft. Een wit stipje ter grootte van een speldenkop, dat duidt op de rijping van de oocyten, moet zichtbaar zijn in het midden van de donker gepigmenteerde hemisfeer van het rijpe ei. Een goed ei is een ei met een gelijkmatige pigmentatie.Alles zonder deze witte plek is een oocyten en dient te worden verwijderd. Eieren die wit en vergroot zijn of niet gelijkmatig gepigmenteerd zijn, moeten ook worden verwijderd. Een bijzonder slecht ei zal eruitzien als een witte, opgezwollen bol waarbij de grens tussen de hemisferen volledig is vervaagd. Was de gesorteerde eieren twee tot drie keer door er eilyse buffer over te gieten en de buffer vervolgens voorzichtig af te gieten, waarbij het aantal meegeschopte eieren tot een minimum wordt beperkt.Nu kunnen de eicellen worden gelyseerd en kunnen extracten worden bereid. We hebben zojuist gedemonstreerd hoe u eicellen verkrijgt en ontgeletteert uit volwassen xenopus lavis vrouwtjes. Bekijk zeker onze andere twee video's waarin wordt getoond hoe u ruwe eiextracten bereidt, alsof hoe u in vitro kernassemblage reconstitueert met behulp van gefractioneerde eiextracten.Dat was alles. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

obtaining-eggs-from-xenopus-laevis-females

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Bemesting van Xenopus oöcyten Het gebruik van de Host Transfer Methode

Xenopus embryonale epitheel is een ideaal modelsysteem om cel gedrag, zoals polariteit ontwikkeling en vorm veranderen tijdens epitheliale morfogenese bestuderen. Traditionele histologie van vaste monsters wordt in toenemende mate aangevuld door live-cell imaging confocale. Hier laten we zien methoden om de kikker weefsel te isoleren en te visualiseren live-epitheliale cellen en hun cytoskelet met behulp van live-cell confocale microscopie.

Live-cell imaging en kwantitatieve analyse van de embryonale epitheelcellen in Xenopus laevis</em

Xenopus ei extract is een nuttig modelsysteem om de DNA schade checkpoint onderzoeken. Dit protocol is voor de bereiding van Xenopus ei extracten en DNA schade checkpoint inducerende reagentia. Deze technieken kunnen worden aangepast aan een verscheidenheid van DNA beschadigende benaderingen in de studie van de DNA schade checkpoint signaling.

Studie van de DNA-schade Checkpoint met behulp van<em&gt; Xenopus</em&gt; Egg Extracten

Productie van<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Egg Extracten aan microtubuli-geassocieerde RNA&#39;s identificeren

Een werkwijze wordt beschreven voor het analyseren eiwitafbraak met radioactief gemerkt en luciferase-fusie-eiwitten in Xenopus ei extract en de aanpassing voor high-throughput screening kleinmoleculige modulatoren van eiwitafbraak.

Reconstitutie van β-catenine afbraak in<em&gt; Xenopus</em&gt; Egg Extract

We beschrijven methoden om onrijpe eicellen van Xenopus laevis te manipuleren, in vitro rijping van eicellen tot eieren, en intracytoplasmatische sperma-injectie. Dit protocol maakt degradatie van sommige maternale eiwitten en overexpressie van interessante genen bij bevruchting mogelijk, en is daarom waardevol om de rollen van specifieke factoren in de vroege embryonale ontwikkeling te bestuderen.

Manipulatie en<em&gt; In Vitro</em&gt; Rijping van<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Eicellen, Gevolgd door intracytoplasmatische sperma-injectie, om embryonale ontwikkeling

Controle van eiwitsynthese vindt voornamelijk plaats tijdens de initiatiefase van translatie, waarvan tekortkomingen zijn gekoppeld aan verschillende aandoeningen. Om de etiologie beter te begrijpen, beschreven we hier een protocol met Xenopus laevis eicellen dat de translatie van het mos-transcript beoordeelt in aanwezigheid van een mutant van translatie-initiatiefactor eIF4G1.

Xenopus laevis als een model te identificeren Vertaling Impairment

Mechanismen van cellulaire en intracellulaire schaalverdeling blijven ongrijpbaar. Het gebruik van Xenopus embryo-extracten is steeds gebruikelijker geworden om mechanismen van orgaangrootte-regulatie te verduidelijken. Deze methode beschrijft de bereiding van embryo-extract en een nieuwe nucleaire schaalverdelingstest waardoor mechanismen van nucleaire grootte-regulatie kunnen worden geïdentificeerd.

Een celvrij Assay met behulp van<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryo Extracten om te studeren mechanismen van Nuclear Size Verordening

Dit protocol toont een fluorescentie gebaseerde methode om de vasculatuur te visualiseren en de complexiteit ervan te kwantificeren in Xenopus tropicalis . Bloedvaten kunnen na de injectie van een fluorescerende kleurstof in het kloppende hart van een embryo worden gedetecteerd na genetische en / of farmacologische manipulaties om in vivo cardiovasculaire ontwikkeling te bestuderen.

Visualisatie en kwantitatieve analyse van embryonale angiogenese in<em&gt; Xenopus tropicalis</em

We beschrijven een methode voor de bereiding en live beeldvorming van onverdunde cytoplasmatische extracten van Xenopus laevis-eieren .

Xenopus laevis | Voorbereiding van ei-extract en live beeldvormingsmethoden voor het visualiseren van dynamische cytoplasmatische organisatie

Wanneer Transforming Growth Factor ß familie voorloper eiwitten ectopisch tot expressie komen in Xenopus laevis embryo's, worden ze gedimeriseerd, worden ze gesplitst en worden ze uitgescheiden in de blastocoele, die begint bij de late blastula tot vroege gastrula stadium. We beschrijven een methode voor het opzuigen van splitsingsproducten uit de blastocoeleholte voor immunoblotanalyse.

Analyse van transformerende groeifactor ß familiesplitsingsproducten uitgescheiden in de blastocoele van Xenopus laevis-embryo's

Leer hoe je eieren verkrijgt van Xenopus laevis-kikkers voor celbiologisch onderzoek. Dit protocol toont het induceren van eiafzet, dejellying en sorteren van hoge kwaliteit eieren.

Het verkrijgen van Eieren van Xenopus laevis Teven

Meer video's verkennen