Name: Olfactorische Behavioral Testen in de Adult Mouse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Leer gevoelige olfactieve gedragstesten bij volwassen muizen om reukgevoeligheid en voorkeur te meten. Deze methoden helpen onderzoekers sensorische verwerking en gedrag in knaagdieren bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Financiering: Dit werk werd ondersteund door een Stuart HQ &amp; Victoria Quan Predoctorale Fellowship (RMW), NIH Pioneer Award (RAS)

General Health Examen Een meer uitgebreide behandeling van de algemene gezondheid examens kan worden gevonden in uitstekende gedrag fenotyperen Jacqueline Crawley&#39;s bron, Wat is er mis met mijn muis? 1. We hebben eerst gebruik van een aangepaste observationele testbatterij voor de algemene gezondheid van een persoon te beoordelen. De batterij bestaat uit items van uitgebreide evaluatie protocol Samuel Irwin&#39;s 2 tot en met snel te identificeren die onderwerpen die ongeschikt zal zijn voor verdere testen. In het kort, de aangepaste batterij identificeert dieren die fysiek afwijkend (bijv. ernstig onder-of overgewicht, slecht verzorgd, dyspneic) of dat vertonen abnormale houding, motoriek of gedrag. Deze kunnen allemaal uitingen van ziekte. Elke eerste evaluatie die op vergelijkbare wijze identificeert ongezond onderwerpen geschikt is. Het is ook belangrijk op te merken dat de dieren op humane wijze worden zowel gebruikt worden tijdens de algemene gezondheid examen als tijdens de daaropvolgende tests. Geen anesthesie of analgesie wordt gebruikt als deze tests omvatten niet alle potentieel pijnlijke procedures. Olfactorische gevoeligheid testen Deze test is ontworpen om een ​​verschil in olfactorische gevoeligheid tussen twee groepen muizen (bijv. een wild-type en een mutant groep dieren) op te sporen. In deze test worden meerdere verdunningen van een geur gemaakt. Een naïeve dier onderzoekt dan een enkele verdunning van deze geur en de totale verkennende tijd (binnen 3 minuten) is opgenomen. Meerdere verdunningen van de geur zijn getest op verschillende, naïeve onderwerpen en de totale verkennende tijd wordt gebruikt om de dosis respons curves voor elke groep van muizen te genereren. Twee onderzoekers moeten worden betrokken bij het testen, met een blind naar onderwerp genotypen en / of conditie. Primaire onderzoeker <ol><li> Verkrijgen vier schone kooien (8 H x 10 B x 18 L, in inches), allemaal zonder beddengoed. Line-up van de vier kooien in de bioveiligheid kast. </li><li> Stel scheidingswanden tussen de verschillende arena met behulp van ondoorzichtig papieren filter. Plaats een zwarte poster bestuur over de laatste partitie zodanig dat de zwarte kant lijnen aan de zijkant en onderkant van de kooi. Bedek de bovenkant van de arena met een duidelijk stuk plexiglas zodat het licht naar de arena te verlichten. (A) <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_8/figure1new.png" alt="Figuur 1" /> (B) <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_9/image15.png" alt="Figuur 1.5" /> Figuur 1. Arena Set-Up. (A) Goed gedrapeerd, lege arena (b) Arena met als onderwerp en geurende filtreerpapier. </li> <li> Begin habituating de onderwerpen. Plaats het eerste onderwerp in de eerste kooi voor gewenning. Na 15 minuten, zet het eerste onderwerp in de tweede kooi. Reinig de eerste kooi met Quatricide TB. Plaats vervolgens de tweede onderwerp in de eerste, schoongemaakt kooi. Herhaal dit proces met de volgende onderwerpen. Uiteindelijk moet elk onderwerp worden gewend in alle drie de kooien voordat ze geplaatst in de arena (vierde en laatste kooi) voor nog eens 15 minuten van gewenning voor de test. </li></ol> Blind onderzoeker <ol><li> Maak een passend aantal van 2 inch met 2 inch pleinen van filtreerpapier voor geur monsters. </li><li> Met behulp van de vooraf geselecteerde geur, de juiste verdunnen het. Voor hydrofobe monsters, zoals pindakaas, gebruik van olie als oplosmiddel, voor alle anderen, gebruik gedestilleerd water. Vortex. </li><li> Stel een digitale video-opname-apparaat aan het andere eind van de bioveiligheid kabinet, dat de hele kooi einde is in focus. Neem een ​​eerste video om ervoor te zorgen parameters toereikend zijn. </li><li> Noteer de volgorde waarin de verdunningen wordt getest, en zorg ervoor dat de volgorde van de proeven willekeurig. </li><li> Record onderwerp zwerfvuil en identificatienummers. </li><li> Zodra het onderwerp is gewend gedurende 15 minuten in de arena, beginnen met de voorbereiding voor de eerste proef. Pipetteer de eerste verdunning op en neer in de conische buis voordat pipetteren deze op een filtreerpapier plein. Het papieren filter oppervlak moet optimaal worden ~ 85% bedekt (ongeveer 0,50 ml van oplossing). Gebruik een kimwipe te zorgen dat de filter papier is overdreven niet verzadigd. </li><li> Begin met video-opname. </li><li> Breng het filter plein in de kooi aan de andere kant van de huidige dier positie. </li><li> Begin timing. </li><li> Na 3 minuten, stopt de opname en verwijder de verdunde geur. </li><li> Als er slechts een geur (bijv. kaneel) moet worden getest, verwijdert u de eerste proefpersoon uit de arena. Herhaal stap 6-11 voor elk dier, de juiste verdunning van de geur voor elk onderwerp. Als er meer dan een geur is te testen, maar doe de test onderwerp niet uit de arena. In plaats daarvan beginnen timing. </li><li> Adequaat verdunnen de volgende geur met dezelfde methoden als hierboven vermeld. </li><li> Na 1 minuut, begin video-opname. Breng het filter plein met de verdunning van de volgende geur in de kooi aan de andere kant van de huidige dier position. </li><li> Herhaal stap 6-13 voor elke geur, wijzend op de videobestand nummer voor elke proef. </li><li> Herhaal stap 6-14 voor elk onderwerp. <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_10/image2new.png" alt="Figuur 2" /> Figuur 2. Representatieve resultaten voor een sessie van olfactorische gevoeligheid testen. Elke muis van ofwel de controlegroep (groep A) of de experimentele groep (groep B) werd blootgesteld aan een van de vijf verschillende verdunningen van kaneel extract op filtreerpapier voor een, drie minuten durende sessie. Totale tijd besteed aan het verkennen van de filtreerpapier werd beoordeeld. Muizen in groep A hebben een grotere gevoeligheid reukzin dan die in groep B. </li></ol> Olfactorische Voorkeur Testen Deze test is ontwikkeld om specifieke detectie tekortkomingen, namelijk de mogelijkheid om aantrekkelijke of aversieve gevoel geuren te identificeren. De volgende procedure leent vrijelijk uit het protocol van Kobayakawa, K., et al.3. Nogmaals, twee onderzoekers worden betrokken bij het testen, met een blind naar onderwerp genotypen en / of conditie. De totale verkennende tijd is weer opgenomen (op video bekijken) voor verschillende geuren. Die geuren met een totale verkennende keer groter is dan water worden aangeduid als &#39;aantrekkelijk&#39;, terwijl mensen met een keer minder dan water worden &quot;aversieve&quot;. De onderzoeker beschouwt dan of dezelfde geuren zijn &quot;aantrekkelijke&quot; of &quot;aversieve&quot; voor de verschillende proefpersonen. Volg stappen 1-3 in de Olfactorische Gevoeligheid Testing Zone voor de primaire onderzoeker. Blind Onderzoeker De procedure voor de reukzin voorkeur testen is het zelfde, met lichte wijzigingen van stap 2 en 4. Volg de stappen 1 tot 15 in de olfactorische gevoeligheid testen afdeling blinde onderzoeker, met de volgende wijzigingen: Voor stap 2, het gebruik van de vooraf geselecteerde geuren (een combinatie van zowel aantrekkelijk en negatieve geuren), maken voldoende verdunde oplossingen van elke in conische buizen. Voor hydrofobe monsters, zoals pindakaas, gebruik van olie als oplosmiddel, voor alle anderen, gebruik gedestilleerd water. Vortex. Voor stap 4, in plaats van het opnemen van de verdunning te testen, registreren de volgorde van de verschillende geuren die zal worden getest, randomizing de volgorde van de proeven. Deze test is ontwikkeld om specifieke detectie tekortkomingen, namelijk de mogelijkheid om aantrekkelijke of aversieve gevoel geuren te identificeren. De volgende procedure leent vrijelijk uit het protocol van Kobayakawa, K. et al.. 3. Nogmaals, twee onderzoekers worden betrokken bij het testen, met een blind naar onderwerp genotypen en / of conditie. De totale verkennende tijd is weer opgenomen (op video bekijken) voor verschillende geuren. Die geuren met een totale verkennende keer groter is dan water worden aangeduid als &quot;aantrekkelijke&quot;, terwijl die met keer minder dan water worden &quot;aversieve&quot;. De onderzoeker beschouwt dan of dezelfde geuren zijn &quot;aantrekkelijke&quot; of &quot;aversieve&quot; voor de verschillende proefpersonen. Volg stappen 1-3 in de Olfactorische Gevoeligheid Testing Zone voor de primaire onderzoeker. Blind Onderzoeker De procedure voor de reukzin voorkeur testen is het zelfde, met lichte wijzigingen van de stappen 2, 4 en 13. Volg de stappen 1 tot 15 in de olfactorische gevoeligheid testen afdeling blinde onderzoeker, met de volgende wijzigingen: Voor stap 2, het gebruik van de vooraf geselecteerde geuren (een combinatie van zowel aantrekkelijk en negatieve geuren), maken voldoende verdunde oplossingen van elke in conische buizen. Voor hydrofobe monsters, zoals pindakaas, gebruik van olie als oplosmiddel, voor alle anderen, gebruik gedestilleerd water. Vortex. Voor stap 4, in plaats van het opnemen van de verdunning te testen, registreren de volgorde van de verschillende geuren die zal worden getest, randomizing de orde in elke proef. Voor stap 13, plaats het filtreerpapier plein met de volgende geur in het hok aan de andere kant van het huidige van het dier positie. <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_11/image3new.png" alt="Figuur 3" /> Figuur 3. Representatieve resultaten voor een sessie van olfactorische voorkeur testen. Elke muis werd blootgesteld aan elk van de verschillende geuren op filtreerpapier voor een, drie minuten durende sessie. Totale tijd besteed aan het verkennen van de filtreerpapier werd beoordeeld. Pindakaas en vanille zijn aantrekkelijk geuren (verkennend tijd geur&gt; verkennend tijd water) en 2-Methylbutyric Acid is aversief (verkennend tijd geur &lt;verkennend tijd water). Scoren van de reuk Tests Na het verkrijgen van alle olfactorische gevoeligheid en voorkeur video&#39;s, is het noodzakelijk om het analyseren van de totale tijd besteed aan het verkennen van elke verdunning / geur. Laat de blinde onderzoeker alle video&#39;s te analyseren op consistentie. <ol><li> Een voorbeeld van de VIDeo, en merkt het volgende: a) wanneer de filter papier wordt geplaatst in de arena, b) als de muis nadert het filtreerpapier, c) als de muis onderzoekt de filtreerpapier en d) als er drie minuten zijn verstreken (vanaf het moment dat het filter papier werd geplaatst in de arena). Weten wanneer te richten op het gedrag van de muis maakt het makkelijker om nauwkeurig de score van de totale tijd besteed aan het verkennen op herziening. </li><li> Bekijk de video. Let op het moment dat de muis voor het eerst het filter papier (latency) onderzoekt. </li><li> Met behulp van een stopwatch, tijd alle onderzoeken binnen drie minuten van het plaatsen van de filter papier in de arena. De tijd van onderzoek wordt gedefinieerd als een moment dat de muis zijn neusgaten &lt;1 mm van het filtreerpapier. Het is belangrijk om niet op te nemen op een van de tijd dat de muis is in de nabijheid van het filter papier, maar is niet actief onderzoekt het. Neem geen aanvallen van kauwen en likken het papier of aanvallen van het zitten op het papier in de totale verkennende tijd. Het is noodzakelijk om de voet en consequent zich aan deze regels nauwkeurig te analyseren olfactorische gedrag. </li><li> Record latentietijd, de totale tijd besteed aan onderzoek naar de filtreerpapier-en video-dossiernummer. </li></ol>

<ol><li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%26rsquo%3Bs+Wrong+with+my+Mouse%3F+Behavioral+Phenotyping+of+Transgenic+and+Knockout+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">What&rsquo;s Wrong with my Mouse? Behavioral Phenotyping of Transgenic and Knockout Mice.</a> , John Wiley and Sons. 42-60 (2007).</li>
<li>Irwin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+observational+assessment%3A+Ia.+A+systematic%2C+quantitative+procedure+for+assessing+the+behavioral+and+physiologic+state+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacologia%22%5BJournal%5D)">Comprehensive observational assessment: Ia. A systematic, quantitative procedure for assessing the behavioral and physiologic state of the mouse.</a> Psychopharmacologia. 13, 222-257 (1968).</li>
<li>Kobayakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450, 503-508 (2007).</li>
</ol>

De genoemde testen zorgen voor de snelle en betrouwbare beoordeling van de elementaire olfactorische functie. Het is niet te vergeten, echter dat dit de betrouwbaarheid van de juiste selectie en de voorbereiding van onderwerpen voor het testen vereist. Dieren die ziek zijn of anderszins onbekwaam zijn vaak inconsistent proefpersonen. Ook gewenning van de proefpersonen is de sleutel. We hebben ontdekt dat het gebruik van meerdere kooien tijdens de gewenning proces maakt het mogelijk de dieren te worden comfortabel met ex...

<table><tbody><tr><td>2-Methylboterzuur</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W269506</td><td>&lt;b&gt;Gebruikte concentraties:&lt;/b&gt;9.16 x 10&lt;sup&gt;-1&lt;/sup&gt; &amp;#8211; 10&lt;sup&gt;-8&lt;/sup&gt; M (in H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;0)</td></tr><tr><td>Puure vanille-extract</td><td>Reagens</td><td>McCormick &amp;amp; Co.</td><td>n/a</td><td>&lt;b&gt;Gebruikte concentraties:&lt;/b&gt;10&lt;sup&gt;-1&lt;/sup&gt; &amp;#8211; 10&lt;sup&gt;-5&lt;/sup&gt; verdunning (in H20)</td></tr><tr><td>Pindakaas (Skippy, Extra Crunchy)</td><td>Reagens</td><td>Unilever</td><td>n/a</td><td>&lt;b&gt;Gebruikte concentraties:&lt;/b&gt;10% (w/v), in minerale olie</td></tr><tr><td>Kaneel-extract</td><td>Reagens</td><td>McCormick &amp;amp; Co.</td><td>n/a</td><td>&lt;b&gt;Gebruikte concentraties:&lt;/b&gt;10&lt;sup&gt;-1&lt;/sup&gt; &amp;#8211; 10&lt;sup&gt;-5&lt;/sup&gt; verdunning (in H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;0)</td></tr><tr><td>Minerale olie, licht</td><td>Reagens</td><td>Fisher Scientific</td><td>O121-1</td><td>&lt;b&gt;Gebruikte concentraties:&lt;/b&gt;N/B</td></tr></tbody></table>

olfactorische behavioral testen in de adult mouse

Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

Het knaagdier olfactorisch systeem is van toenemend belang voor wetenschappers, studeerde, voor een deel, in de systeembiologie vanwege de stereotiepe, maar toch toegankelijk circuit. Daarnaast is dit gebied de unieke mogelijkheid om nieuwe neuronen te genereren gedurende de levensduur van een organisme maakt het een aantrekkelijk systeem voor de ontwikkelingsbiologie en regeneratieve biologen gelijk. Deze rente vereist een middel voor een snelle, maar betrouwbare beoordeling van olfactorische functie. Veel testen van olfactorische bekwaamheid zijn complex, variabel of niet speciaal voor muizen. Ook een aantal tests gevoelig zijn voor het geheugen tekorten en gebreken in de olfactorische vaardigheden, confounding verkregen resultaten. We beschrijven hier een eenvoudige batterij van tests ontworpen om defecten in de olfactorische gevoeligheid en de voorkeur te identificeren. Eerste, een eerste algemene gezondheid evaluatie maakt de identificatie van dieren die geschikt zijn voor verdere testen. Ten tweede, zijn muizen blootgesteld aan verschillende verdunningen van geuren om na te gaan of er een drempel verschil. Ten derde, zijn muizen gepresenteerd met verschillende geuren, zowel aantrekkelijk en aversieve, die het mogelijk maken voor de beoordeling van olfactorische voorkeur. Deze eenvoudige onderzoeken moet de eerste karakterisering van olfactorische gedrag toegankelijk voor laboratoria van verschillende middelen en expertise.

Fundamenteel, maar toch unieke eigenschappen van het knaagdieren olfactorisch systeem hebben ertoe geleid dat het toenemende onderzoek onder biologen. Een relatief eenvoudige beoordeling van de functie is dan ook noodzakelijk. Hier beschrijven we gevoelige tests voor de karakterisering van de muis olfactorische gevoeligheid en voorkeur.

Olfactorische Behavioral Testen in de Adult Mouse

Het olfactorische systeem van knaagdieren is van toenemende interesse voor wetenschappers en wordt mede bestudeerd binnen de systeembiologie vanwege de stereotype, maar toegankelijke...

Het olfactorische systeem of reukvermogen van de Rodin-muis is een steeds populairder onderzoeksgebied geworden. Om de olfactorische gevoeligheid te testen, krijgt een muis de gelegenheid om te wennen in een kooi zonder bodembedekking, waarna deze wordt blootgesteld aan stukjes filterpapier die toenemende concentraties van een geurstof bevatten. De tijd die de muis besteedt aan het onderzoeken van het filterpapier wordt vervolgens geregistreerd.Olfactorische preferentietests worden op exact dezelfde wijze uitgevoerd. Echter, in plaats van concentraties van de geurstof te verhogen, wordt de tijd genoteerd die de muis besteedt aan het onderzoeken van verschillende geurstoffen. Hallo, ik ben Rochelle Witt van het laboratorium van Dr. Rosalyn Siegel van de afdeling Neurobiologie aan de Harvard Medical School.Hoi, ik ben Jennifer Deno, ook van het Siegel Lab. Vandaag laten we u twee procedures zien voor olfactorisch onderzoek. We gebruiken deze procedures in ons laboratorium om de olfactorische gevoeligheid en olfactorische voorkeur te bestuderen.Laten we beginnen. Om de procedure voor het testen van de reukgevoeligheid te starten, neemt u vier schone kooien zonder strooisel. De kooien

olfactory-behavioral-testing-in-the-adult-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier beschrijven we een gedetailleerd protocol voor het onderzoek van gezelligheid in muizen met behulp van Crawley's gezelligheid en de voorkeur voor de sociale vernieuwing te testen. Beschrijven we de voordelen en mogelijke toepassingen voor deze procedure, inclusief kritische details van belang voor een juiste interpretatie van de resultaten.

Beoordeling van de sociale interactie gedrag

Verminderde olfactorische functie is een veel voorkomend kenmerk bij veel neurodegeneratieve aandoeningen, waaronder Parkinson, Alzheimer en de ziekte van Huntington. In het huidige artikel beschrijven we een reeks tests voor het beoordelen van olfactorische discriminatie en detectie bij muizen die kunnen worden gebruikt om olfactorische vermogens te meten in muismodellen van neurodegeneratieve ziekten.

Olfactorische Testen voor muismodellen van neurodegeneratieve ziekte

Dit manuscript beschrijft een protocol om het reuksysteem van knaagdieren te onderzoeken. De reuk habituatie/dishabituatie test zal onderzoekers in staat stellen om te bepalen of een muis zich aanpast aan een herhaaldelijk gepresenteerde geur en of de muis dishabituatie vertoont wanneer een nieuwe geur wordt gepresenteerd.

Testen voor Geur Discriminatie en gewenning in Muizen

We presenteren een eenvoudige en onbevooroordeelde olfactorische test bij muizen. Met dit protocol kunnen olfactorische discriminatie, voorkeur, vermijding en gevoeligheid voor een nieuwe geur in vergelijking met water worden beoordeeld in sessies van enkel gedrag. Deze methode is geïndiceerd voor een enkele experimentator en de analyse is gebaseerd op computerondersteunde videoverwerking.

Eenvoudig en Computer-assisted Olfactorische testen voor Muizen

Hier trainen we muizen op een associative Leeropdracht voor het testen van de discriminatie van de geur. Dit protocol voorziet ook in studies over leren-geïnduceerde structurele veranderingen in de hersenen.

Een objectieve en reproduceerbare Test van olfactorische leren en discriminatie in muizen

Dit artikel geeft een gedetailleerde beschrijving van een nieuw muisbeoordelingsprotocol. Bewijs van de gevoeligheid van deze olfactorische graaftaak voor affectieve toestand wordt ook aangetoond en het nut ervan in verschillende onderzoeksgebieden wordt besproken.

Beoordeling van de beoordelingsbias van de muis door middel van een olfactorische graaftaak

Dit artikel geeft een gedetailleerde beschrijving van de test voor begraven voedsel en het experiment met sociale geurdiscriminatie om de effecten van blootstelling aan ingeademde milieuverontreinigende stoffen op de reukfunctie bij muizen te beoordelen.

Onderzoek naar de effecten van ingeademde milieuverontreinigende stoffen op de reukfunctie bij muizen

Dit protocol beschrijft de constructie van een olfactometer voor go/no-go olfactorische gedragsexperimenten. Stapsgewijze instructies, samen met afbeeldingen, worden meegeleverd om de succesvolle constructie van de olfactometer te garanderen. Informatie voor het oplossen van problemen die zich tijdens het proces voordoen, is ook inbegrepen.

Constructie van een olfactometer voor onderzoek naar olfactorisch gedrag bij knaagdieren

Hier presenteren we een protocol van een olfactorische voorkeurstest die het mogelijk maakt om negatieve olfactorische vooroordelen ten opzichte van zowel eetlust als aversieve geurstimuli in muismodellen van depressie te beoordelen.

Een olfactorische voorkeurstest voor het meten van olfactorische hedonische vooroordelen in muismodellen van depressie

Het testen van visuele gevoeligheid bij hagedissen met behulp van een operante conditionering paradigma dat het afspelen van video van de random-dot kinematograms en computer-gegenereerde ongewervelde dieren in dienst heeft.

Het testen van visuele gevoeligheid voor de snelheid en richting van de beweging in Lizards

Leer gevoelige olfactieve gedragstesten bij volwassen muizen om reukgevoeligheid en voorkeur te meten. Deze methoden helpen onderzoekers sensorische verwerking en gedrag in knaagdieren bestuderen.

Olfactorische Behavioral Testen in de Adult Mouse

Meer video's verkennen