WAŻNE: Oprócz noszenia odpowiedniego sprzętu ochrony osobistej, pamiętaj, aby trzymać twarz z dala od kultur zawiesinowych i unikać wdychania odczynników. Nie dotykaj twarzy podczas wykonywania eksperymentu. Zawsze myj ręce przed i po każdym eksperymencie.
Kiedy będziesz gotowy, aby bezpiecznie rozpocząć, sprawdź, czy masz probówkę lub probówki z kompetentnymi komórkami E. coli w swoim wiadrze na lód.
Następnie przenieś 50 μl z jednej z tych probówek do każdej z dwóch nowych probówek do mikrowirówek, jednej oznaczonej '–', a drugiej oznaczonej '+'.
Następnie odpipeuj 2 μl plazmidu p-GREEN do probówki plus i delikatnie przesuń probówkę, aby wprowadzić plazmid do roztworu bakteryjnego. HIPOTEZY: Hipoteza eksperymentalna jest taka, że na płytkach bez antybiotyku bakterie z plazmidem lub bez niego mogą przetrwać, a więc obie będą hodować trawniki bakterii. I odwrotnie, na płytkach zawierających antybiotyk ampicylinę będą rosły tylko bakterie, które pomyślnie przekształciły się z plazmidem oporności, podczas gdy płytki plazmidowe bez plazmidu nie będą zawierały żadnych bakterii. Hipoteza zerowa tego eksperymentu jest taka, że nie będzie różnicy we wzroście bakterii między płytkami.
Inkubuj obie probówki na lodzie.
Po 30 minutach zanurz obie rurki na 3/4 drogi w wodzie łaźni wodnej o temperaturze 42 °C na 30 sekund.
Pod koniec inkubacji w łaźni wodnej umieść probówki z powrotem na lodzie na 5 minut, a następnie dodaj 950 μl pożywki SOC o temperaturze pokojowej do każdej probówki.
Inkubować probówki w wytrząsarce w temperaturze 37 °C przez 60 minut przy 250 obr./min.
Podczas inkubacji probówek, oznacz spody jednej płytki LB i jednej LB/ampicyliny lub AMP "+ plazmid", a spody jednej płytki LB i jednej płytki LB/AMP "- plazmid".
Pod koniec inkubacji odpipetuj 50 μl z rurki komórkowej "+ plazmid" zarówno na płytkę LB/AMP plus, jak i na płytkę LB plus.
Następnie, za pomocą świeżej końcówki, dodaj 50 μl bakterii, które nie były wystawione na działanie plazmidu, do każdej z płytek ujemnych.
Następnie rozprowadź każdą płytkę za pomocą świeżej końcówki pipety.
Przykryj płytki ich pokrywkami, a następnie zaklej je folią laboratoryjną.
Następnie przechowuj płytki do góry nogami w inkubatorze o temperaturze 37 °C przez 24 godziny.
