Różnorodność mikrobiologiczna i grzybicza

KoncepcjePrzygotowanie dla instruktoraProtokół dla studentów
0 wyświetleń05:06 min.
Print Procedure Steps
  1. Badanie struktur kolonii mikrobiologicznych
    • Aby rozpocząć, zbierz przydzielone Ci płytki hodowlane, a następnie usuń Parafilm i pokrywkę z jednej z nich.
    • Umieść odkrytą płytkę pod mikroskopem preparacyjnym, a następnie obserwuj poszczególne społeczności w każdym kwadrancie płytki.
    • Po zidentyfikowaniu kolonii wypełnij obserwowane właściwości kolonii w odpowiedniej kolumnie w tabeli. Kliknij tutaj, aby pobrać tabelę 1
    • Następnie powtórz obserwacje dla każdego z pozostałych dwóch gatunków bakterii.
    • Aby przeprowadzić barwienie metodą Grama swoich trzech gatunków bakterii, najpierw oznacz końce trzech szkiełek mikroskopowych inicjałami każdego gatunku bakterii, swoimi inicjałami i datą. HIPOTEZY: W tym eksperymencie hipoteza eksperymentalna może polegać na tym, że możliwe jest wyjaśnienie różnych gatunków i kształtów bakterii za pomocą barwienia metodą Grama oraz że bakterie Gram-dodatnie będą barwić się na fioletowo z fioletem krystalicznym, podczas gdy bakterie Gram-ujemne będą wyglądać na różowo z powodu barwienia safraniną. Hipoteza zerowa może być taka, że wszystkie typy bakterii zachowają obie plamy w równym stopniu, a barwienie nie pomoże wyjaśnić ich gatunku ani kształtu.
    • Aby rozpocząć pierwsze barwienie, przymocuj klips do szkiełka, aby ułatwić obsługę. Do każdego rozmazu bakteryjnego należy pamiętać, aby użyć oczyszczonej i wysterylizowanej płomieniowo pętli zaszczepiającej.
    • Umieść dwie pętle sterylnej wody destylowanej na środku szkiełka.
    • Po ponownym wysterylizowaniu pętli, schłodzić pętlę, dotykając kilkakrotnie niezaszczepionej części agaru.
    • Następnie usuń niewielką ilość kultury z izolowanej kolonii i wymieszaj ją z wodą na szkiełku.
    • Pozwól szkiełku wyschnąć w temperaturze pokojowej i utrwal rozmaz na gorąco, szybko przepuszczając go przez płomień.
    • Po wyschnięciu odpipetuj kilka kropli fioletu krystalicznego na szkiełko i pozostaw na dwie do trzech minut.
    • Ostrożnie przepłucz szkiełko wodą destylowaną, kierując bezpośredni strumień w stronę górnej części szkiełka, pozwalając wodzie delikatnie spłynąć. Nie kieruj strumienia wody bezpośrednio na rozmaz.
    • Następnie przykryj szkiełko jodem Grama, pozostaw je na dwie minuty, a następnie delikatnie spłucz wodą destylowaną.
    • Odbarwij szkiełko 95% etanolem, aż plama przestanie się zmywać.
    • Natychmiast przepłucz szkiełko wodą destylowaną. Ograniczy to nadmierne odbarwianie.
    • Następnie dodaj kilka kropli barwnika safraninowego i pozostaw na 30 sekund. Spowoduje to zabarwienie wszystkich obecnych komórek Gram-ujemnych.
    • Delikatnie spłucz szkiełko wodą destylowaną i osusz chłonnym papierem.
    • Po zabarwieniu pozostałych dwóch preparatów w ten sam sposób (kroki 6 – 17), obserwuj każdy z nich pod mikroskopem.
    • Użyj najpierw obiektywu o niskiej mocy, aby dokonać zgrubnych korekt. Kiedy znajdziesz idealną sekcję, przejdź do większych powiększeń.
    • Po dalszym obrazowaniu i dostosowaniu rozmazu za pomocą obiektywu o średniej mocy, dodaj olejek immersyjny bezpośrednio do rozmazu. UWAGA: Olej jest potrzebny do obiektywów o dużej mocy, które zapewnią najlepsze mikrofotografie.
    • Teraz użyj kolorowych kredek, aby narysować obserwowane bakterie w odpowiednich okręgach powiększenia i wypełnij obserwowane cechy w odpowiedniej kolumnie, zwracając uwagę na kształt bakterii i to, czy jest to bakteria Gram-dodatnia, identyfikowana przez ciemniejsze fioletowe barwienie, czy Gram-ujemna, identyfikowana przez różowe barwienie. Kliknij tutaj, aby pobrać tabelę 2
    • Na koniec powtórz obserwację, rysunek i charakterystykę dla pozostałych dwóch barwionych szkiełek bakteryjnych.
  2. Badanie struktur grzybowych
    • Wyjmij płytkę S. cerevisiae z inkubatora i umieść kroplę wody na szkiełku mikroskopowym.
    • Używając wysterylizowanej pętli do zaszczepiania, rozsmaruj warstwę drożdży w kropli wody i umieść szkiełko nakrywkowe na szkiełku.
    • Umieść szkiełko pod mikroskopem przy najmniejszym powiększeniu, zwiększając powiększenie do ustawienia zanurzenia w oleju, aby zobaczyć poszczególne komórki drożdży.
    • Obserwuj ogólny kształt i strukturę drożdży i identyfikuj wszystkie komórki, które przechodzą rozmnażanie bezpłciowe poprzez pączkowanie.
    • Teraz narysuj komórki w odpowiednich okręgach powiększenia.
    • Kiedy skończysz obserwować drożdże, zastąp szkiełko S. cerevisiae przygotowanym szkiełkiem Ascomycetes apothecium i ustaw mikroskop na najmniejsze powiększenie.
    • Używając kolorowych kredek, narysuj struktury w małych i dużych powiększeniach, w tym aste i askospory.
    • Na koniec umieść grzyba guzikowego, Agaricus bisporus, pod mikroskopem preparacyjnym i narysuj cechy, w tym pileus, czyli kapelusz, skrzela i trzon lub łodygę.
  3. Wyniki
    • Korzystając z kolorystyki bakterii zapisanych w tabeli, określ, które gatunki są Gram-dodatnie, a które Gram-ujemne.
    • Następnie spójrz na kształty zapisane w tabeli, aby określić, które gatunki bakterii to Bacillus, Coccus lub spirillum.
    • Następnie porównaj swoje ilustracje komórek drożdży z ilustracjami komórek bakteryjnych. UWAGA: Drożdże z gromady workowców, takie jak S. cerevisiae, mogą rozmnażać się bezpłciowo, co można zaobserwować poprzez pączkowanie komórek pod mikroskopem.
    • Zapisz wszelkie obserwacje pączkujących komórek drożdży. UWAGA: Workowce mogą również rozmnażać się płciowo poprzez mitozę i tworzenie haploidalnych zarodników.
    • Zapisz w tabeli wszystkie obserwacje powstawania zarodników lub worków, które zaobserwowałeś.
    • UWAGA: Grzyby z gromady Basidiomycota wykazują wyraźnie widoczne skrzela pod pileusem.
    • Zapisz wszystkie gatunki grzybów, które wykazywały skrzela pod pileusem.

Browse More Videos

Różnorodność drobnoustrojów