Aby rozpocząć, zbierz przydzielone Ci płytki hodowlane, a następnie usuń Parafilm i pokrywkę z jednej z nich.
Umieść odkrytą płytkę pod mikroskopem preparacyjnym, a następnie obserwuj poszczególne społeczności w każdym kwadrancie płytki.
Następnie powtórz obserwacje dla każdego z pozostałych dwóch gatunków bakterii.
Aby przeprowadzić barwienie metodą Grama swoich trzech gatunków bakterii, najpierw oznacz końce trzech szkiełek mikroskopowych inicjałami każdego gatunku bakterii, swoimi inicjałami i datą. HIPOTEZY: W tym eksperymencie hipoteza eksperymentalna może polegać na tym, że możliwe jest wyjaśnienie różnych gatunków i kształtów bakterii za pomocą barwienia metodą Grama oraz że bakterie Gram-dodatnie będą barwić się na fioletowo z fioletem krystalicznym, podczas gdy bakterie Gram-ujemne będą wyglądać na różowo z powodu barwienia safraniną. Hipoteza zerowa może być taka, że wszystkie typy bakterii zachowają obie plamy w równym stopniu, a barwienie nie pomoże wyjaśnić ich gatunku ani kształtu.
Aby rozpocząć pierwsze barwienie, przymocuj klips do szkiełka, aby ułatwić obsługę. Do każdego rozmazu bakteryjnego należy pamiętać, aby użyć oczyszczonej i wysterylizowanej płomieniowo pętli zaszczepiającej.
Umieść dwie pętle sterylnej wody destylowanej na środku szkiełka.
Po ponownym wysterylizowaniu pętli, schłodzić pętlę, dotykając kilkakrotnie niezaszczepionej części agaru.
Następnie usuń niewielką ilość kultury z izolowanej kolonii i wymieszaj ją z wodą na szkiełku.
Pozwól szkiełku wyschnąć w temperaturze pokojowej i utrwal rozmaz na gorąco, szybko przepuszczając go przez płomień.
Po wyschnięciu odpipetuj kilka kropli fioletu krystalicznego na szkiełko i pozostaw na dwie do trzech minut.
Ostrożnie przepłucz szkiełko wodą destylowaną, kierując bezpośredni strumień w stronę górnej części szkiełka, pozwalając wodzie delikatnie spłynąć. Nie kieruj strumienia wody bezpośrednio na rozmaz.
Następnie przykryj szkiełko jodem Grama, pozostaw je na dwie minuty, a następnie delikatnie spłucz wodą destylowaną.
Odbarwij szkiełko 95% etanolem, aż plama przestanie się zmywać.
Natychmiast przepłucz szkiełko wodą destylowaną. Ograniczy to nadmierne odbarwianie.
Następnie dodaj kilka kropli barwnika safraninowego i pozostaw na 30 sekund. Spowoduje to zabarwienie wszystkich obecnych komórek Gram-ujemnych.
Delikatnie spłucz szkiełko wodą destylowaną i osusz chłonnym papierem.
Po zabarwieniu pozostałych dwóch preparatów w ten sam sposób (kroki 6 – 17), obserwuj każdy z nich pod mikroskopem.
Użyj najpierw obiektywu o niskiej mocy, aby dokonać zgrubnych korekt. Kiedy znajdziesz idealną sekcję, przejdź do większych powiększeń.
Po dalszym obrazowaniu i dostosowaniu rozmazu za pomocą obiektywu o średniej mocy, dodaj olejek immersyjny bezpośrednio do rozmazu. UWAGA: Olej jest potrzebny do obiektywów o dużej mocy, które zapewnią najlepsze mikrofotografie.
Teraz użyj kolorowych kredek, aby narysować obserwowane bakterie w odpowiednich okręgach powiększenia i wypełnij obserwowane cechy w odpowiedniej kolumnie, zwracając uwagę na kształt bakterii i to, czy jest to bakteria Gram-dodatnia, identyfikowana przez ciemniejsze fioletowe barwienie, czy Gram-ujemna, identyfikowana przez różowe barwienie.
Kliknij tutaj, aby pobrać tabelę 2
Na koniec powtórz obserwację, rysunek i charakterystykę dla pozostałych dwóch barwionych szkiełek bakteryjnych.
