Badanie złożonych zachowań lokomocyjnych u Drosophila melanogaster zależy od możliwości ilościowego określenia zmian w ruchu danej muchy. Niniejszy artykuł demonstruje, jak przeprowadzić ten proces przy użyciu wysokorozdzielczego systemu śledzenia.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Wysokorozdzielcze śledzenie wideo lokomocji u dorosłych osobników Drosophila melanogaster
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Muchy stanowią istotny model do badania złożonych zachowań ze względu na bogactwo narzędzi genetycznych dostępnych dla badaczy w tej dziedzinie. Badanie zachowań lokomocyjnych uDrosophila melanogasteropiera się na możliwości ilościowego określenia zmian w ruchu podczas lub w odpowiedzi na dane zadanie. Z tego powodu system śledzenia wideo o wysokiej rozdzielczości, taki jak opisany w niniejszej pracy, jest cennym narzędziem do pomiaru lokomocji w czasie rzeczywistym. Nasz protokół obejmuje zastosowanie wstępnego impulsu powietrza w celu zatrzymania pędu much, a następnie trzydziestosekundowy okres filmowania w kwadratowej komorze. Następnie wykorzystuje się program do śledzenia, aby obliczyć chwilową prędkość każdej muchy w komorze w odstępach 10 msec. Oprogramowanie analityczne kompiluje te dane i generuje szereg parametrów, takich jak średnia prędkość, prędkość maksymalna, czas spędzony w ruchu, przyspieszenie itp. W niniejszym protokole omówiono prawidłowe karmienie i utrzymywanie much do zadań behawioralnych, obchodzenie się z muchami bez znieczulenia lub unieruchomienia, przygotowanie kontrolowanego środowiska oraz przeprowadzanie testu od początku do końca.
Protokół
Część 1: Karmienie i hodowla much
- Muchy należy hodować w butelkach zawierających standardowe podłoże bez drożdży. Ze względu na potrzebę uzyskania dużej liczby osobników, krzyżówki należy zaplanować odpowiednio. Muchy powinny być hodowane w 12-godzinnym cyklu światło:ciemność w temperaturze 25ºC.
- Muchy należy zbierać krótko po wykluciu (1-3 dni). Na tym etapie z muchami można pracować przy użyciu dyfuzora dwutlenku węgla; należy je posegregować do probówek zawierających podłoże autoklawowane lub bezdrożdżowe. Stosujemy wyłącznie samce, przechowując po 10 osobników w jednej probówce.
- Przed przystąpieniem do eksperymentów behawioralnych n....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
W naszej konfiguracji impuls powietrza o umiarkowanej sile przejściowo zatrzymuje ruch much. Po ustaniu impulsu powietrza muchy zostają uwolnione ze stanu spoczynku i poruszają się normalnie, co przedstawiono na rysunku 2. Ponieważ impuls powietrza skutecznie synchronizuje lokomocję populacji, wykorzystujemy go do rozpoczęcia próby, co pozwala nam również badać moment rozpoczęcia ruchu po bodźcu hamującym pęd. Test można jednak przeprowadzić bez impulsu powietrza, ponieważ parametry lokomocji po inicjacji ruchu nie są pr.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Podziękowania
Praca ta była wspierana przez grant National Institutes of Health R01 GM54408 przyznany L.C. Griffith. Chcielibyśmy podziękować Fredowi Wolfowi za całą pomoc w zaprojektowaniu kwadratowej komory i przygotowaniu testu, Frankowi Mello z warsztatu maszynowego Uniwersytetu Brandeis za zbudowanie komory oraz Danowi Valentemu i Timowi Lebestky'emu za pomocne rozmowy dotyczące kwestii analitycznych.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze | |
|---|---|---|---|---|
| Komora kwadratowa | Narzędzie | Machine Shop | N/D | Projekt według Wolf et al. 20021 |
| Aparat cyfrowy | Aparat | Sharp | ViewcamZ VL-23 | |
| Przepływomierz | Narzędzie | Cole-Parmer | SY-32003-12 | |
| Pudełko do doświetlania | Narzędzie | DNASTAR | Seq-Easy | |
| Filtr węglowy | Narzędzie | Fisher Scientific | 09-744-37 | |
| DIAS 3.2 | Oprogramowanie | Soll technologies | N/D | www.solltechnologies.com |
Bibliografia
- Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. High-Resolution Analysis of Ethanol-Induced Locomotor Stimulation in Drosophila. J Neurosci. 22 (24), 11035-11044 (2002).
- Soll, D. R. The use of computers in understanding how animal cells crawl. International rev....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
