Wizualizacja bijącego serca u Drosophila

Summary

Przedstawiono technikę wymaganą do wizualizacji bijącego serca u larw i dorosłych Drosophila. Każdy etap życia wymaga innej metodologii.

Abstract

Serce Drosophila pojawiło się ostatnio jako dobry system modelowy do badania genetycznych, komórkowych i molekularnych mechanizmów leżących u podstaw funkcji serc miogennych. Kluczowym krokiem w badaniu funkcji serca u muchy jest znalezienie sposobu na dostęp do serca w sposób, który zachowuje jego funkcję miogenną, jednocześnie umożliwiając obserwację i rejestrację bijącego narządu serca. Opisano tutaj dwie różne metody obserwacji i rejestrowania bicia serca zarówno u larw, jak i dorosłych Drosophila. Nasz półnienaruszony preparat z wykorzystaniem dorosłych much pozwala na wyraźną wizualizację serca w jamie brzusznej bez ingerencji ze strony pigmentowanego naskórka i pokrywających go ciał tłuszczowych. Aby zarejestrować bicie serca larw, konieczne jest unieruchomienie larwy, co minimalizuje ruchy ścian ciała, zmniejszając w ten sposób ruchy serca, które nie są związane ze skurczami mięśnia sercowego. Nasze metodologie pozwalają na uzyskanie stabilnych preparatów serca dorosłego i larwalnego, które mogą bić przez wiele godzin z częstotliwością 1-3 Hz.

Protocol

Zanim zaczniesz

Serca dorosłych

1. Świeżo przygotowany sztuczny roztwór hemolimfy (AH) zawierający 108mM Na⁺, 5mM K+, 2mM Ca²⁺, 8mM MgCl₂, 1mM NaH₂PO₄, 4mM NaHCO₃, 10mM sacharozy, 5mM trehalozy, 5mM HEPES (pH 7,1, wszystkie odczynniki firmy Sigma Chemicals). Sacharoza i trehaloza powinny być dodane do AH z chłodzonych roztworów podstawowych tuż przed użyciem, aby zapobiec skażeniu bakteryjnemu.
2. Doprowadź AH do temperatury pokojowej i natlenić roztwór przez bulgotanie powietrzem przez co najmniej 15 minut.
3. Pociągnij kilka drobnych naczynek (....

Discussion

Model Drosophila okazał się potężnym narzędziem genetycznym, które zostało wykorzystane do rozwiązania różnych problemów naukowych, od rozwoju embriologicznego po uczenie się i pamięć. Ostatnio ten wszechstronny organizm modelowy został wykorzystany do zbadania genetyki funkcji serca u muchy. Wiele prób ilościowego określenia fizjologii serca u dorosłych Drosophila opierało się na obserwacjach przeprowadzonych na nienaruszonych muchach przez naskórek brzucha. Większość z tych podejść opierała się na obserwacji wzrokowej .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nożyczki sprężynowe do mikro preparowania (zakrzywione)	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5611	Dobre do cięć brutto (krok 3)
Nożyczki sprężynowe do mikro preparacji (proste)	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5620
Kleszcze Dumont # 55	Narzędzia do nauki o nauce	11295-51
Kleszcze Dumont #5	Narzędzia do nauki o nauce	11295-10
Szklane kapilary, 100ul	VWR international	53432-921
Szklane kapilary, produkty do	nauki	precyzyjnej GB100T8P
Ściągacz do pipet	Sprzęt Sutter	P-97	Będą działać zarówno poziome, jak i pionowe ściągacze do pipet
Rurka plastikowa	Tygon	1/16” średnica wewnętrzna	dla 100μ l kapilary
Rurka plastikowa	Tygon	1/32” średnica wewnętrzna	do małych naczynek
Histoacryl® klej tkankowy	B. Braun Medical