Test pierścienia aortalnego

Summary

Angiogeneza, kiełkowanie naczyń krwionośnych z wcześniej istniejących naczyń krwionośnych, jest związane zarówno z naturalnymi, jak i patologicznymi procesami. Tutaj demonstrujemy test pierścienia aortalnego, który umożliwia bezpośrednie dodawanie wzmacniaczy i inhibitorów angiogennych do pierścieni aortalnych w hodowli. Kiełkowanie i przerost naczyń nowych można określić, sprawdzając pierścienie aortalne przez okres 6-12 dni.

Abstract

Angiogeneza, czyli kiełkowanie naczyń krwionośnych z wcześniej istniejących naczyń krwionośnych, jest związana zarówno z naturalnymi, jak i patologicznymi procesami. Różne testy angiogenezy obejmują badanie pojedynczych komórek śródbłonka w warunkach hodowli (1). Test pierścienia aortalnego jest modelem angiogenezy opartym na hodowli narządów. W tym teście naczynia angiogenne wyrastają z odcinka aorty (zmodyfikowanego z (2)). Krótko mówiąc, wycina się aortę piersiową myszy, usuwa się warstwę tłuszczu i przydankę, a następnie przygotowuje się pierścienie o długości około 1 mm. Poszczególne pierścienie są następnie osadzane w małej solidnej kopule z ekstraktu z macierzy podstawowej (BME), odlewanej w indywidualnych dołkach 48-dołkowej płytki. Czynniki angiogenne i inhibitory angiogenezy mogą być bezpośrednio dodawane do pierścieni, a mieszana kohodowla pierścieni aortalnych i innych typów komórek może być stosowana do badania parakrynnych efektów angiogennych. Kiełkowanie obserwuje się przez inspekcję pod mikroskopem stereoskopowym przez okres 6-12 dni. Ze względu na dużą zmienność spowodowaną nieprawidłowościami w odcinkach aorty, zdecydowanie zaleca się eksperymentowanie z 6-plicate. Przerost naczyń nowonaczyniowych jest monitorowany przez cały czas trwania eksperymentu i obrazowany za pomocą mikroskopii fazowej, a supernatanty są zbierane w celu pomiaru odpowiednich czynników angiogennych i antyangiogennych, markerów śmierci komórek i azotynów.

Protocol

Dzień przed eksperymentem:

1. Pozostawić BME (zredukowany czynnik wzrostu, Cultrex, Trevigen) do rozmrożenia na lodzie lub w temperaturze 4°C; po rozmrożeniu przechowywać na lodzie, aby zapobiec ponownemu zestaleniu.

Dzień eksperymentu:

1. Myszy (w wieku 6-7 tygodni) należy znieczulić i wykrwawić.
2. Wyjmij aortę piersiową na szalkę Petriego wypełnioną zimnym, sterylnym PBS.
3. Wykonaj mechaniczne czyszczenie z otaczającej tkanki tłuszczowej. Uwaga, należy unikać wysuszenia aorty w dowolnym momencie.
4. Za pomocą ostrza chirurgicznego pokrój aortę równomiernie na pierścienie o średnicy 1 m....

Discussion

Test pierścienia aortalnego jest korzystnym narzędziem na drodze do oceny czynników angiogennych i antyangiogennych. Naczynia, które wyrastają z pierścieni aortalnych, rekrutują komórki mięśni gładkich i perycyty do łączenia się z rurką komórkową śródbłonka, co oznacza, że są anatomicznie podobne do naczyń nowotworowych in vivo. Co więcej, test pierścienia aortalnego myszy ma przewagę w postaci szerokiej gamy narzędzi transgenicznych dostępnych dla tego gatunku. Istnieje jednak kilka wad testu pierścienia aortal.......