Opisano montaż bliskiego pola mikroskopu na podczerwień do obrazowania agregatów białkowych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Montaż, strojenie i wykorzystanie bezaperturowego mikroskopu w bliskim polu podczerwieni do obrazowania białek
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Celem niniejszej pracy jest przeprowadzenie czytelnika przez proces montażu i obsługi podczerwonego mikroskopu bliskiego pola do obrazowania poza limitem dyfrakcyjnym. Bezaperturowy mikroskop bliskiego pola jest instrumentem typu rozproszeniowego, który dostarcza widm podczerwieni z rozdzielczością około 20 nm. Przedstawiono pełną listę komponentów oraz szczegółowy protokół użytkowania. Omówiono typowe błędy popełniane podczas montażu i strojenia instrumentu. Zaprezentowano reprezentatywny zestaw danych obrazujący strukturę drugorzędową włókna amyloidowego.
Protokół
Wstęp:
Bezaperturowa blisko-polowa mikroskopia IR oferuje obrazowanie o wysokiej rozdzielczości przestrzennej. Jest to stosunkowo nowa technika, w której padająca wiązka podczerwieni jest rozpraszana przez ostrą igłę mikroskopu sił atomowych (AFM), oscylującą z częstotliwością rezonansową wspornika w bliskiej odległości od próbki. Detektor IR zbiera rozproszone światło, które jest demodulowane z tą częstotliwością rezonansową lub jej harmonicznymi. W ten sposób można zredukować rozproszenie tła skupionej wiązki lasera padającej na pozostałą część powierzchni próbki i osiągnąć rozdzielczość przestrzenną znacznie przekraczającą limit dyfrakcyjn....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Podziękowania
Wyrażamy wdzięczność za wsparcie finansowe NSF, NSERC, NIH oraz ONR.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Bibliografia
- Mueller, K., Yang, X., Paulite, M., Fakhraai, Z., Gunari, N., Walker, G. C. Chemical imaging of the surface of self-assembled polystyrene-b-poly(methyl methacrylate) diblock copolymer films using apertureless near-field IR microscopy. Langmuir. 24, 6946-6951 (2008).
- Lahrech, A., Bachelot, R., Gleyzes, P., Boccara, A. C.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
