Krycie i ocena stopnia zaawansowania jaj: metoda generowania zarodków i sortowania ich według etapu rozwoju

Abstract

Źródło: Hostelley T.L., et al. Przygotowanie próbki i analiza danych o ekspresji genów opartych na RNASeq od danio pręgowanego. J. Vis. Exp. (2017)

Artykuł opisuje protokół generowania zarodków danio pręgowanego poprzez naturalne kojarzenie i sortowanie ich etapów rozwoju. Protokół jest dalej wykorzystywany do analizy komórek β trzustki przy użyciu ryb transgenicznych.

Protocol

1. Tworzenie embrionów poprzez naturalne krycie

1. Hodowla zarodków do 3 miesiąca życia, dojrzałość reprodukcyjna.
2. Oddziel dorosłe samce i samice ryb od pożądanego szczepu do podzielonych zbiorników godowych wieczorem przed pobraniem zarodków i dodaj 2 samce i 3 samice do każdego zbiornika.
   UWAGA: Zastosowanie transgenicznego fluorescencyjnego szczepu reporterowego insuliny2a:mCherry pozwoliło na analizę komórek β trzustki.
3. Przenieś ryby do zbiornika godowego ze świeżą wodą systemową i wyjmij przegrodę natychmiast po zapaleniu się świateł następnego ranka.
4. Pozwól ryb....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
ins2a:mWiśnia	ZIRC (Cyrk)	ZL1483
Zbiorniki łączące 1,0 l Zestaw zbiorników krzyżowych	Nurkowanie	ZHCT100
Mikroskop preparacyjny	Zeiss