Montaż agarowy: podstawowa metoda montowania żywych zarodków danio pręgowanego do długotrwałego obrazowania

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Hagedorn E. J., et al. Generowanie parabiotycznych zarodków danio pręgowanego przez chirurgiczną fuzję rozwijających się blastuli. J. Vis. Exp. (2016).

Ten film opisuje krok po kroku instrukcje dotyczące montażu żywych zarodków danio pręgowanego na 6-dołkowej płytce przy użyciu niskotopliwej agarozy. Zapewnia również proces pozyskiwania obrazów żywych zarodków i analizowania ich za pomocą oprogramowania.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Konfiguracja mikroskopu, akwizycja, przetwarzanie i analiza obrazu

Przygotuj 0,8% agarozy o niskiej temperaturze topnienia (LMP): Dodaj 0,8 g agarozy LMP do 100 ml E3 i podgrzewaj aż do całkowitego rozpuszczenia. Na gorąco podamy 1 ml agarozy LMP do 1,5 ml probówek do mikrofuge w bloku grzewczym o temperaturze 37 °C. Agaroza LMP pozostanie stopiona w temperaturze 37 °C. Dodać 40 μl 4 mg/ml (25x) pH 7,0 tricainy do każdej 1 ml podwielokrotności agarozy LMP w temperaturze 37 °C. UWAGA: W przypadku pracy ze szczepem pigmentowanym dodaj 20 μl 0,15% (50x) PTU do każdej podwielokrotności 1 ml.
1. Pozostałą agarozę LM....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article

Name

Company

Catalog Number

Comments

Agaroza LMP (ultraczysta agaroza LMP)

Invitrogen

16520100

Trikaina (proszek) (Trikaina Methanesulfonato, Tricaine-S)

Western Chemical Inc (firma Western Chemical

Zobacz materiał MS 222

Płytki 6-dołkowe ze szklanym dnem używane do obrazowania

MatTek

P06G1.5-20-F

Pompka do pipet 10 ml (zielona) (Pipeta Pump Pipettor)

Novatech Międzynarodowy

F37898-0000

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission