Montaż agarowy: podstawowa metoda montowania żywych zarodków danio pręgowanego do długotrwałego obrazowania

Streszczenie

Źródło: Hagedorn E. J., et al. Generowanie parabiotycznych zarodków danio pręgowanego przez chirurgiczną fuzję rozwijających się blastuli. J. Vis. Exp. (2016).

Ten film opisuje krok po kroku instrukcje dotyczące montażu żywych zarodków danio pręgowanego na 6-dołkowej płytce przy użyciu niskotopliwej agarozy. Zapewnia również proces pozyskiwania obrazów żywych zarodków i analizowania ich za pomocą oprogramowania.

Protokół

1. Konfiguracja mikroskopu, akwizycja, przetwarzanie i analiza obrazu

1. Przygotuj 0,8% agarozy o niskiej temperaturze topnienia (LMP): Dodaj 0,8 g agarozy LMP do 100 ml E3 i podgrzewaj aż do całkowitego rozpuszczenia. Na gorąco podamy 1 ml agarozy LMP do 1,5 ml probówek do mikrofuge w bloku grzewczym o temperaturze 37 °C. Agaroza LMP pozostanie stopiona w temperaturze 37 °C. Dodać 40 μl 4 mg/ml (25x) pH 7,0 tricainy do każdej 1 ml podwielokrotności agarozy LMP w temperaturze 37 °C. UWAGA: W przypadku pracy ze szczepem pigmentowanym dodaj 20 μl 0,15% (50x) PTU do każdej podwielokrotności 1 ml.
   1. Pozostałą agarozę LM....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Agaroza LMP (ultraczysta agaroza LMP)	Invitrogen	16520100
Trikaina (proszek) (Trikaina Methanesulfonato, Tricaine-S)	Western Chemical Inc (firma Western Chemical	Zobacz materiał MS 222
Płytki 6-dołkowe ze szklanym dnem używane do obrazowania	MatTek	P06G1.5-20-F
Pompka do pipet 10 ml (zielona) (Pipeta Pump Pipettor)	Novatech Międzynarodowy	F37898-0000

) Inc powiedział: