Elektrofizjologia dorosłego danio pręgowanego: metoda pomiaru zewnątrzkomórkowej aktywności elektrycznej neuronów in vivo

Streszczenie

Źródło: Johnston, L., et al. Zapis elektrofizjologiczny w mózgu nienaruszonego dorosłego danio pręgowanego. J. Vis. Exp. (2013)

Protokół opisuje procedurę wykonywania elektrofizjologii u dorosłych ryb danio pręgowanych. Metodę tę można wykorzystać do pomiaru aktywności neuronalnej in vivo.

Protokół

1. Elektrofizjologia

1. Zakręcić kurek odcinający intubację i szybko odłączyć blokadę Luer łączącą podstawę intubacyjną z kroplówką trykainową.
   1. Przenieś nienaruszony zestaw do intubacji do mikroskopu elektrofizjologicznego i podłącz do systemu perfuzyjnego.
   2. Włącz wodę w siedlisku i perfuzjuj z szybkością 1 ml/min przez ~1 godzinę, aby wypłukać tricainę.
2. Za pomocą mikromanipulatora pod kontrolą wzrokową ustaw elektrodę wtórną tak, aby końcówka elektrody mogła zostać wprowadzona do nozdrza zwierzęcia lub do zagłębienia za górną szczęką.
3. Włóż igłę elektrody pierwotnej do otworu kraniotomii. Wbić igłę w tkankę tak, aby końcówka była umieszczona dość powierzchownie w tekturze wzrokowej.
   1. Jeśli elektroda jest zbyt głęboka, sygnał elektryczny może być mały.
4. Zbierz i przeanalizuj różnicę elektryczną zarejestrowaną między pierwotną i wtórną elektrodą odniesienia. Proces ten pozwoli na uzyskanie nagrań zewnątrzkomórkowych.
   1. Zbieraj dane w trybie bez przerw z częstotliwością próbkowania 5 kHz, z filtrem dolnoprzepustowym 0,1 kHz i filtrem górnoprzepustowym 1 Hz.
   2. Nie rozpoczynaj rejestrowania aktywności elektrofizjologicznej, dopóki woda w siedlisku nie będzie upływać przez co najmniej 45 minut.
   3. Zapisuj wartość wyjściową rodzimej aktywności przez co najmniej 15 minut przed dodaniem eksperymentalnych leków. Rozpocznij perfuzję z wybranymi eksperymentalnymi lekami i nagrywaj przez żądany czas. W zdrowych preparatach możliwe jest rejestrowanie aktywności neurologicznej przez 2-3 godziny.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Woda siedliskowa			pH 7,0-7,4, przewodność 400-450 μS; utrzymywany przez Instant Ocean i Wodorowęglan sodu
0,4% trikainy buforowanej trisem	Sigma-Aldrich	E10521	pH 7,2-7,4; przechowywane w temperaturze -20 oC
Probówki strzykawkowe Luer Lock 60 ml	Becton, Dickinson i spółka	309653
Kranki 3-drogowe z przyłączami Luer
0,010 cala Srebrny drut	A-M Systems, Inc.
Uchwyt elektrody serii Q
Fisherbrand 100 mm x 15 mm szalka Petriego	Fisher Naukowy	NC9299146
34 G igła skośna	Światowe instrumenty precyzyjne, Inc.	NF34BV
37 cm x 42 cm Kimwip	Kimberly-Clark Profesjonalistka	TW31KEM
Rura o średnicy 1/8 cala
Rurka o średnicy 1 mm
Mikroskop (Leica MZ APO)	Można użyć innego mikroskopu

powiedział: