Model kardiomiopatii danio pręgowanego: kardiotoksyczność wywołana lekami

Streszczenie

Źródło: Ma X., et. al. Model kardiomiopatii wywołanej doksorubicyną u dorosłych ryb danio pręgowanego. J. Vis. Exp. (2018).

Ten film opisuje technikę tworzenia modelu kardiomiopatii danio pręgowanego z minimalnymi różnicami między grupami eksperymentalnymi, a w próbie tworzymy model kardiomiopatii danio pręgowanego przy użyciu leku doksorubicyna.

Protokół

1. Wstrzyknięcie DOX u dorosłych ryb

1. Umieść czystą szalkę Petriego o średnicy 100 mm z gąbką w środku pod mikroskopem preparacyjnym, a następnie wyreguluj ostrość. Wytnij gąbkę, aby zrobić wgłębienie o długości około 4 cm, aby pomieścić rybę. Zrób dłuższą jamę dla większej ryby.
2. Przygotować igłę o pojemności 34 g z mikrostrzykawką o pojemności 10 μl. Przepłukać igłę 1x buforem HBSS, aby usunąć wszelkie pęcherzyki i bloki ze strzykawki i rurki.
3. Znieczulić dorosłe ryby w wodzie z zarodkami zawierającej 0,16 mg/ml trikainy przez 2 min.
   UWAGA: Przedłużone znieczulenie trwające ponad 5 minut, po którym następuje wstrzyknięcie DOX, może łatwo spowodować śmierć ryb.
4. Namoczyć gąbkę w wodzie z zarodkami z trickainą i przenieść rybę na gąbkę w celu wstrzyknięcia.
5. Wykonaj wstrzykiwanie IP DOX za pomocą jednej z dwóch metod opisanych poniżej.
   1. Klasyczne wstrzykiwanie IP
      1. Umieść rybę brzuchem do góry we wnęce gąbki. Szybko włóż igłę pod kątem 45° do ciała ryby w linię środkową między płetwami brzusznymi i wbij się na około 1-2 mm. Powoli uwalniaj cały roztwór DOX. Odczekaj 5 sekund przed wyciągnięciem igły. Sprawdź dostawę DOX po widocznym czerwonym kolorze w brzuchu ryby.
   2. Alternatywne wstrzykiwanie IP
      1. Ułóż rybę bokiem na gąbce przodem po prawej stronie. Lewą ręką delikatnie ustabilizuj rybę za pomocą kleszczy z końcem, a prawą ręką przytrzymaj mikrostrzykawkę.
      2. Umieść igłę poniżej linii bocznej nad płetwą brzuszną, skosem skierowanym do góry. Wskazując na pozycję godziny 7 pod kątem 45°, włóż igłę 3-4 mm do jamy ryby znajdującej się między płetwą miedniczą a odbytową, a następnie powoli wciśnij tłok. Sprawdź dostawę DOX po widocznym czerwonym kolorze w brzuchu ryby.
6. Szybko przenieś wstrzykniętą rybę do czystego zbiornika krzyżowego wypełnionego świeżą wodą systemową, aby umożliwić rybom powrót do zdrowia. Przepłukać igłę raz 1x buforem HBSS między wstrzyknięciami.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Czołg przejazdowy	Nurkowanie	ZHCT100	Hodowla ryb
Chlorowodorek doksorubicyny	Sigma	D1515-10MG
Zrównoważony roztwór soli Hanka (HBBS)	Rybak termiczny	14025076	Pojazd dla DOX
Szalka Petriego 100 mm	sokół	431741
Mikrostrzykawka 10 μl NanoFil	Wskaźnik WPI	NANOFIL	Do wstrzykiwań
Igła o rozmiarze 34	Wskaźnik WPI	Zobacz materiał NF34BV-2	Do wstrzykiwań
Trikaina	srebrny		Znieczulenie ryb