Stymulacja limfocytów T ex vivo w guzie trzustki: metoda zwiększania produkcji cytokin w komórkach T

Streszczenie

Źródło: Spear, S., et al. Generacja ortotopowych guzów trzustki i charakterystyka ex vivo cytotoksyczności komórek T naciekających nowotwór. J. Vis. Exp. (2019).

Ten artykuł opisuje technikę stymulacji limfocytów T ex vivo w celu zwiększenia wewnątrzkomórkowego stężenia cytokin, takich jak interferon-gamma lub IFN-gamma i czynnika martwicy nowotworu-alfa lub TNF-alfa w limfocytach T. Cytokiny te pośredniczą w skutecznej odpowiedzi przeciwnowotworowej i mogą pełnić rolę terapeutyczną w guzie.

Protokół

1. Trawienie guzów trzustki

1. Umieść wypreparowany guz trzustki, guzy w miejscu przerzutów lub zdrową tkankę trzustki w lodowatym PBS i przechowuj na lodzie.
   1. Użyj kleszczy, aby przenieść guz na szalkę Petriego.
   2. Dodać 5,0 ml pożywki wytrawiającej (2 mg/ml kolagenazy, 0,025 mg/ml DNazy RPMI) do probówki o pojemności 50 ml; przechowywać na lodzie, aby zapobiec rozpoczęciu aktywności enzymów.
      nuta: W protokole tym wykorzystuje się kolagenazę typu V, która ma aktywność ≥1 jednostek/mg FALGPA i > 125 jednostek trawienia kolagenu (CDU)/mg ciała stałego. Podwielokrotności kolagenazy i DNazy można przechowywać w tempera....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Sitko do komórek o wielkości porów 70 μm	Fisher Naukowy	11597522
anty-CD107a PE (klon 1D4B)	Legenda biologiczna	121612	1:100 do pożywek hodowlanych
Albumina surowicy bydlęcej (BSA)	Sigma-Aldrich	A4503 (wersja angielska
Koktajl stymulacji komórek (500x) (12-mirystynian 13-octanu forbolu (PMA) i jonomycyna)	eBionauka	Numer katalogowy: 00-4970-03	x Stężenie końcowe PMA 0,081 μM, jonomycyna 1,34 μM
Ludzkie komórki białaczki monocytowej THP1	Kontroler ATCC (Kontroler T	TIB-202
Kolagenaza typu V z Clostridium histolyticum	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał C9263	2 mg/ml w pożywce
Sulfotlenek dimetylu (DMSO)	Sigma-Aldrich	D2650-100 ml
DNaza (dezoksyrybonukleaza I z trzustki bydlęcej typu II-S) 10 mg/ml w 0,15 M NaCl	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał D4513	Końcowe stężenie w pożywce wytrawiającej 0,025 mg/ml
Surowica cielęca płodu (FCS)	GE Opieka zdrowotna	A15-104	10% w RPMI
Strzykawka Hamilton seria 700, objętość 25 μl, końcówka igły o rozmiarze 22s	Fisher Naukowy	10100332
Penicylina/streptomycyna	PAA (Agencja Ochrony	15140122	100 jednostek/ml penicyliny, 100 μg/ml streptomycyny
Koktajl inhibitorów transportu białek (500x) (brefeldyna A i monesyna)	eBionauka	Numer katalogowy: 00-4980-03	1x Stężenie końcowe Brefeldin A 10,6 μM, monenzyna 2 μM
RPMI-1640 (zawiera 0,3 g/l glutaminy)	Sigma-Aldrich	Czynnik R8758
Ostrze skalpela chirurgicznego nr 10	Swann-Morton	Okręg wyborczy 501
Roztwór trypsyny-EDTA 10x	Sigma-Aldrich	594-18C	Trypsyna (0,1%) EDTA (0,4%) stężenie końcowe
Płytka mikrodołkowa 96 z dnem w kształcie litery U	Firma VWR	Nr kat. 734-2080

) powiedział: T TGL