Fluorescencyjny ortotopowy model myszy: wszczepianie GFP z ekspresją komórek rakowych do myszy w celu oceny progresji guza in vivo

Streszczenie

Źródło: Moreno, J. A., et al. Fluorescencyjny ortotopowy mysi model raka trzustki. J. Vis. Exp.(2016)

Ten film demonstruje protokół ortotopowego wszczepiania komórek raka trzustki z ekspresją białka zielonej fluorescencji do trzustki myszy. Ortotopowy model myszy pomaga w badaniu skuteczności nowych terapii w przypadku guzów pierwotnych i przerzutowych.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami i komisję rewizyjną Jove Veterinary Review Board.

1. Implantacja chirurgiczna

UWAGA: Upewnij się, że wszystkie materiały chirurgiczne i narzędzia są sterylne. Przez cały czas stosuj techniki aseptyki.

1. Połóż poduszkę grzewczą na stole i przykryj sterylną zasłoną. Ustaw aparat do znieczulenia i upewnij się, że wszystkie materiały są w zasięgu ręki.
2. Umieść pysk zwierzęcia w masce anestezjologicznej i ustaw znieczulenie na 1 l/min tlenu i 2,5% izofluranu.
3. Delikatnie wyszoruj bok zwierzęcia jodem i spłucz 70% etanolem. Powtórz trzy razy.
4. Upewnij się, że zwierzę jest w pełni znieczulone, szczypiąc tylną łapę. Zwierzę jest w pełni znieczulone i gotowe do operacji, jeśli nie zaobserwuje się żadnej odpowiedzi. Jeśli jednak zwierzę się wzdrygnie, upewnij się, że w waporyzatorze jest wystarczająca ilość znieczulenia i daj zwierzęciu więcej czasu na całkowite znieczulenie.
5. Załadować około 200 μl zawiesiny komórek do strzykawki o pojemności 1,0 ml z igłą 18 G (uprzednio schłodzoną). Zastąp igłę igłą 27 G i wróć do lodu, aż będzie gotowa do użycia.
6. Zlokalizuj ogólny obszar śledziony (lewy górny kwadrant brzucha) i za pomocą kleszczy uszczypnij skórę na szczycie tego obszaru. Za pomocą nożyczek chirurgicznych wykonaj nacięcie o długości około 1,0 cm, aby utworzyć kieszonkę. Podobnie uszczypnij mięśnie gładkie na szczycie śledziony i przetnij, aby uzyskać dostęp do jamy otrzewnej.
7. Delikatnie chwyć ogonowy koniec śledziony i wyciągnij go z ciała. Trzustka zostanie przyczepiona do śledziony. Rozłóż trzustkę za pomocą mokrej, sterylnej końcówki higienicznej i zlokalizuj ogon trzustki.
8. Wstrzyknąć 50 μl do końcówki trzustki, pozostawić igłę w środku na 10 sekund i powoli obrócić igłę z trzustki. Udana implantacja będzie wyglądała jak powierzchowna bańka bez żadnych przecieków.
9. Wróć trzustkę i śledzionę do jamy otrzewnej. Najpierw obejmij mięsień, a następnie osobno obejmij skórę. Użyj szwu lub zszywki 6-0, aby zamknąć nacięcie. Aby uniknąć bólu u zwierzęcia, ketoprofen należy podawać podskórnie (SC) (5 mg/kg) przez 24 godziny. Alternatywnie, buprenorfinę podskórnie (0,05 - 0,1 mg/kg) należy podawać co 12 godzin przez okres 36 godzin.
10. Odzyskaj zwierzę ze znieczulenia i włóż je z powrotem do klatki. Monitoruj również ból. Zwierzęta muszą mieć zapewnioną ulgę w bólu w czasie (lub nawet przed – prewencyjnym) zabiegiem chirurgicznym. Zwierzętom, które odczuwają ból, należy zapewnić dodatkową ulgę w bólu zgodnie z protokołem IACCUC lub zgodnie z zaleceniami lekarza weterynarii lub osoby wyznaczonej.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Alcare lub spieniony antyseptyczny środek do dezynfekcji rąk	Steris powiedział:	Numer katalogowy: 639680
Strzykawka TB 27 g 1/2	Becton Dickinson	Numer katalogowy: 305620
Izofluran	Blutler Schein	Numer katalogowy: 50562
Ketoprofen	Zdrowie zwierząt w Fort Dodge
Nożyczki chirurgiczne, 5,5" prosty majonez	Henryk Schein	22-1600
Linia komórkowa PANC-1 GFP	Przeciwnowotworowe, Inc
System obrazowania małych zwierząt: iBox Scientia	UVP, LLC. Wyżyna, Kalifornia.		System obrazowania małych zwierząt do obserwacji guza fluorescencyjnego u żywych zwierząt
SutureVet PGA 6-0 PGA	Henryk Schein	Numer katalogowy 39010
Linia komórkowa PANC-1 GFP	Przeciwnowotworowe, Inc
DPBS (sól fizjologiczna buforowana fosforanami Dubelcco)	Thermo Ficher Sci	21300025

powiedział: