Generowanie mysiego modelu raka jelita grubego PDOX: badanie progresji raka jelita grubego w modelu mysim

Streszczenie

Źródło: Moret, R. et al. Ortotopowe modele ksenoprzeszczepów pobrane od pacjenta dla ludzkiego raka urotelialnego i raka jelita grubego, wzrostu guza i spontanicznych przerzutów. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film opisuje protokół generowania mysiego modelu ortotopowego ksenoprzeszczepu jelita grubego pochodzącego od pacjenta do badania progresji komórek raka jelita grubego u myszy bez otyłości z cukrzycą/ciężkim złożonym niedoborem odporności (NOD/SCID). Ten mysi model pomaga w zrozumieniu wzorca wzrostu guza pierwotnego i przerzutów.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące zwierząt zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Hodowla linii komórkowych

1. Hoduj komórki HK w kompletnym pożywce RPMI-1640 uzupełnionej 10% płodową surowicą bydlęcą, 2 nM glutaminą, 100 U/ml penicyliny G i 100 mg/ml streptomycyny w temperaturze 37 °C w 5% nawilżanym inkubatorze_CO2.
   nuta: Komórki HK są normalnymi ludzkimi pęcherzykowymi komórkami dendrytycznymi i mogą być hodowane i namnażane przez ≤ 15 pasaży in vitro.

2. Znakowanie i wzbogacani....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
RPMI-1640 Średni	Kolekcja kultur typu amerykańskiego	110636
Izofluran	Henry Schein Zdrowie zwierząt	108333
D-lucyferyna (150 mg/kg)	Perkin Elmer	122796
glutamina (2 nM)	Fisher Naukowy	35050061
Luc/RFP-lentiwirus	Od naszych współpracowników. Patrz odniesienie 13: Gills, J. et al. Ortotopowy model ksenoprzeszczepu uzyskany od pacjenta umożliwiający implantację, wzrost, angiogenezę i przerzuty ludzkiego raka urotelialnego o wysokim stopniu złośliwości guza pęcherza moczowego. Oncotarget. 9, 32718-32729, doi:10.18632/ oncotarget.26024 (2018).
penicylina/streptomycyna 100 ml (100 j./ml)	Fisher Naukowy	Rozdział 15140-122
gaz
100% tlenu	Airgas Inc	OX USP200
100% emisjiCO2	Airgas Inc	Płyta CD USPE
Myszy
6-8 tygodniowe myszy NOD/SCID (samica)	Laboratorium Jacksona	1303
Narzędzia
Rurka stożkowa 15 ml	Sarstedt	Numer katalogowy: 11799
Naczynie do hodowli tkankowych 150 mm	USA Scientific Inc	CC7682-3614
Kleszcze	Symetria chirurgiczna Inc	Numer katalogowy: 06-0011
Nożyczki chirurgiczne	Symetria chirurgiczna Inc	02--2011
sprzęt
Inkubator nawilżany 5% CO2	Thermo Scientific	Numer katalogowy: 3110
Maszyna do obrazowania bioluminescencyjnego (BLI)	Perkin Elmer	CLS136334
Oprogramowanie maszyny do obrazowania BLI	Perkin Elmer	CLS136335
Suwmiarka cyfrowa	Narzędzia i instrumenty Fowler	54-115-330
Mikroskop preparacyjny	Instrumenty precyzyjne Sp. z o.o	Tel. 504) 228-0076
Komora indukcyjna izofluranu	Perkin Elmer	119038

szt. powiedział: powiedział: .