Model resekcji jelita krętego u myszy: badanie metabolizmu żółci wywołanego ileektomią w modelu mysim

Streszczenie

Źródło: Zhang, R., et al. Nadmierna akumulacja żółci w jelicie myszy wywołana ileektomią. J. Vis. Exp. (2017)

Ten film opisuje szczegółowy protokół resekcji jelita w modelu mysim. Technika ta zapewnia wgląd w zaburzenia wchłaniania żółci wywołane ileektomią, nadmierną akumulację i toksyczność w jelicie myszy.

Protokół

1. Ileektomia i zespolenie

1. Znieczulenie myszy izofluranem (2 - 3%) w komorze inkubacyjnej dla małych zwierząt. Określ odpowiednie znieczulenie za pomocą techniki szczypania palców u stóp, gdy zwierzę jest na izofluranie.
2. Usuń włosy z brzucha, nakładając produkty do depilacji i wytrzyj włosy za pomocą gąbek chirurgicznych, zachowując znieczulenie. Umieść mysz na stole chirurgicznym dla małych zwierząt z kontrolowaną temperaturą (Rysunek 1A), aby utrzymać temperaturę ciała na poziomie 37 °C. Utrzymuj znieczulenie izofluranem (1 - 2%) przez maskę na twarz. Potraktuj oczy myszy maścią do oczu.
3. Oczyść skórę za pomocą jodu powidonu i 70% alkoholu i przykryj operowaną powierzchnię brzucha sterylną gazą chirurgiczną (ryc. 1B).
4. Wykonaj nacięcie brzucha w linii środkowej za pomocą skalpela chirurgicznego, gdy znieczulenie jest już aktywne. Użyj aplikatora z bawełnianą końcówką, aby chronić jelito i pociągnij mięsień brzucha myszy za pomocą retraktorów, aby całkowicie otworzyć i odsłonić jamę brzuszną (ryc. 1C).
5. Zlokalizuj jelito ślepe. Zaczynając od jelita ślepego, ostrożnie przesuń połączone jelito kręte i część jelita czczego z jamy brzusznej (ryc. 1D).
   nuta: Jelito ślepe można łatwo zidentyfikować ze względu na jego duży rozmiar nawet po poście.
6. Podwiązać górną gałąź tętnicy krezkowej górnej za pomocą jedwabnego szwu 7-0, aby zatkać krew zaopatrującą odcinek jelita krętego, który ma zostać wycięty. Kolor jelita krętego zmienia się z różowego na ciemnofioletowy po podwiązaniu. (Rysunek 1E - F).
7. W zależności od celu eksperymentu, za pomocą nożyczek, wyciąć i usunąć 50% lub 90% jelita krętego.
   nuta: W przypadku operacji pozorowanej nie należy wykonywać podwiązania tętnicy krezkowej górnej i nie usuwać jelita krętego.
8. Przepłukać światło obu końców jelita krętego 0,9% solą fizjologiczną.
   nuta: Ponieważ pozostała nienaruszona jelito kręte nadal otrzymuje normalny dopływ krwi z tętnicy krezkowej górnej, niewielka ilość krwi zostanie wypłukana podczas procesu. Wskazuje to również, że dopływ krwi do końców jelita krętego jest prawidłowy i zapewnia brak niedokrwienia podczas procedury zespolenia (ryc. 1G).
9. Zlokalizuj krezki po stronie obu końców jelita krętego. Wyrównaj krezki i zszyj końce jelita krętego razem za pomocą 8-0 szew (ryc. 1G - H).
10. Zszyj przeciwległą stronę jelita krętego, aby utrzymać zespolenie jelita krętego w naturalny sposób (ryc. 1I).
11. Zszyj górną i dolną stronę między dwoma oryginalnymi szwami, aby dokładnie połączyć ze sobą dwa końce jelita krętego (ryc. 1J).
12. Upewnij się, że nie ma wycieku z miejsca zespolenia po zakończeniu trzyetapowej procedury szycia (ryc. 1G-I). Zwróć jelito ślepe i jelito cienkie do jamy brzusznej do pierwotnego położenia anatomicznego. Umyj obszar operacji ciepłą solą fizjologiczną o sile fizjologicznej 0,9% za pomocą igły. (Rysunek 1K).
13. Zamknij nacięcie warstwy mięśni brzucha szwem 6-0. Wyrównaj nacięcie skóry brzucha za pomocą kleszczy i zszyj skórę brzucha, aby ułatwić optymalne gojenie się ran (ryc. 1L).

2. Opieka pooperacyjna

1. Przenieś myszy pooperacyjne na oddział intensywnej terapii w celu rekonwalescencji. Umieść je w klatce z papierowej pościeli na poduszce grzewczej o kontrolowanej temperaturze, aby kontynuować rekonwalescencję po operacji przez noc. Podawaj myszom miękki pokarm oprócz zwykłego jedzenia i wody.
2. Podawać buprenorfinę (0,05 - 0,1 mg/kg) we wstrzyknięciu podskórnym co 8-12 godzin w celu znieczulenia.
   nuta: Poddaj myszy eutanazji za pomocą CO_{2 w} przypadku ciężkiej choroby.
3. W punkcie końcowym należy złożyć ofiary myszy za pomocą przedawkowanego izofluranu i w razie potrzeby pobrać próbki (sekcja 3).

3. Ocena nadmiernej akumulacji żółci wywołanej ileektomią

1. Zważ i wypreparuj myszy jeden dzień po resekcji 0% (pozorowane), 50% lub 90% jelita krętego.
2. Wyjmij przewód pokarmowy i zważ go. Oblicz stosunek masy przewodu pokarmowego do masy ciała, aby ocenić nasilenie złego wchłaniania i nadmiernej akumulacji soli żółciowych.
3. Przenieś odcinki przewodu pokarmowego do stożkowych probówek o pojemności 15 ml i pokrój je na krótkie segmenty za pomocą nożyczek. Po pokrojeniu odwirować przy 3 000 x g przez 10 min. Przenieść supernatant (płyn żołądkowo-jelitowy zawierający sole żółciowe) do czystej probówki.
4. Zmierz całkowitą objętość i masę płynu żołądkowo-jelitowego i oblicz stosunek masy płynu do masy przewodu pokarmowego, aby dokładniej ocenić nadmierną akumulację żółci w przewodzie pokarmowym.
5. Oznaczyć całkowitą ilość żółci w supernatencie za pomocą testu kwasów żółciowych.

Wyniki

Rycina 1: Zabiegi chirurgiczne ileektomii. (A) Utrzymuj temperaturę ciała za pomocą stołu chirurgicznego dla małych zwierząt o kontrolowanej temperaturze. (B) Przykryj obszar operacyjny sterylnymi gazami po przygotowaniu skóry brzucha. (C) Odsłonić jelito cienkie przez nacięcie w linii środkowej brzucha. (D) Kątnica (zaznaczona białą przerywaną linią) jest oznaczona, aby zlokalizować jel...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Zobacz materiał C57BL/6J	Laboratorium Jacksona
Mikroskop preparacyjny	Olympus	SZ61	Do zabiegu chirurgicznego
Regulator temperatury zwierząt	Physitemp Instruments, Inc	TCAT-2LV	Do kontroli temperatury ciała
Waporyzator znieczulający izofluran	Wyposażenie weterynaryjne	911104	Do znieczulenia
Kleszcze preparacyjne	Narzędzia Fine Science Tools, Inc.	Rozdział 11274-20	Do zabiegu chirurgicznego
nożyczki	Narzędzia Fine Science, Inc	Numer katalogowy 14084-08	Do zabiegu chirurgicznego
Uchwyt na igłę	Narzędzie chirurgiczne Roboz Co.	Złącze RS-7882	Do zabiegu chirurgicznego
Mikro noże - ostrze igły	Fisher Naukowy	Numer katalogowy 10318-14	Do zabiegu chirurgicznego
6-0 szew monofilamentowy	Etyka	1698 GB	Do zamykania skóry brzucha
7-0 szew jedwabny	Etyka	Zobacz materiał 766G	Do podwiązania
Szew monofilamentowy 8-0	Etyka	1714G	Na zespolenie
Gąbki chirurgiczne	Dynarex Corp.	3333	Do zabiegu chirurgicznego
Małe aplikatory z bawełnianą końcówką	Fisher Naukowy	23-400-118	Do zabiegu chirurgicznego
Izofluran	Piramal Healthcare Sp. z o.o.	Nr kat. 66794-013-25	Do znieczulenia
Chlorowodorek buprenorfiny	Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals	Numer katalogowy: 12496-0757-1	Na przeciwbóle
0,9% chlorek sodu do wstrzykiwań	B. Braun Medical Inc.	Numer katalogowy: 0264-7800-10	Do mycia/iniekcji
Roztwór do przygotowania jodu powidonu	Dynarex Corp.	1413	Do przygotowania skóry
Maść weterynaryjna Puralube	Produkty weterynaryjne Dechra	Numer katalogowy: 17033-211-38	Do ochrony oczu
Balsam do depilacji	Church & Dwight Co., Inc.		Do przygotowania skóry
Oddział intensywnej terapii	Opieka termomedyczna	FW-1	Do rekonwalescencji pooperacyjnej
Zestaw do oznaczania całkowitej zawartości kwasów żółciowych	Diagnostyka Genzyme	DZ042A-K01	Do oznaczania kwasów żółciowych

TGL szt.