Artykuł metodologiczny

Mikrodysekcja laserowa: technika izolowania inwazyjnych komórek raka jelita grubego z modelu hodowli organotypowej 3D

30 kwietnia 2023

W tym artykule

Streszczenie

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Bullock M. et al., Profilowanie molekularne inwazyjnego mikrośrodowiska guza w trójwymiarowym modelu komórek raka jelita grubego i fibroblastów ex vivo. J. Vis. Exp. (2014).

Film opisuje laserową sekcję 3D organotypowego modelu współhodowli z precyzją na poziomie mikronów. W modelach organotypowych 3D składniki zrębu, takie jak fibroblasty, są trójwymiarowo współhodowane z komórkami nabłonka nowotworowego. Model 3D służy jako narzędzie eksperymentalne, które umożliwia badanie inwazji i interakcji rak-zrąb w warunkach zbliżonych do fizjologicznych.

Protokół

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Przygotowanie organotypowe:

Przygotowanie żelu organotypowego impregnowanego fibroblastami:

  1. Przygotować zawiesinę komórek fibroblastów zawierającą 5 x 105 komórek na organotyp w DMEM, uzupełnioną 10% FCS i 292 μg/ml L-glutaminy.
  2. Żele organotypowe przygotować na lodzie w następujących proporcjach:
    • • 7 tomów Kolagenu ze Szczurzego Ogona: Matrigel mix (1:1)
    • • 1 objętość filtrowanego 10x DMEM
    • • 1 objętość SKO
    • • 1 objętość zawiesiny komórek fibroblastów zawierająca 5 x 105 fibroblastów
      Na 9 żeli (1 ml na żel) przygotuj 10 ml i del....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Linie komórkowe raka jelita grubego - przykład pokazany SW480Kontroler ATCC (Kontroler TKontroler ATCC CCL-228
kolagenBD Nauki biologiczne354265
MatrigelBD Nauki biologiczne354234
Membrana nylonowaMerck MilliporeVVLP01300
Metalowa siatkaFirma MeshZobacz materiał WSS20-A4themeshcompany.com
Laserowa platforma do mikrodysekcjiMikrosystemy LeicaLeica AS LMD
Prowadnice membranoweUrządzenia molekularne
Fiolet kresylowyMerck Millipore1052350025

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Tr jwymiarowa hodowla organotypowakrojenie tkanekzatapianie w parafiniebarwienie fioletem krezglowymprotok mikrosekcjifront inwazji nowotworubufor do lizy kom rekszkie ka z membrany

Powiązane artykuły