Artykuł metodologiczny

Izolacja komórek macierzystych czerniaka: metoda uzyskiwania dodatnich i ujemnych komórek czerniaka CD133 za pomocą sortowania komórek aktywowanych magnetycznie

30 kwietnia 2023

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Welte, Y. et al. Hodowla komórkowa pochodząca od pacjenta i izolacja komórek macierzystych CD133+ przypuszczalnych nowotworów z czerniaka. J. Vis. Exp. (2013)

Ten film opisuje technikę izolowania komórek macierzystych czerniaka CD133 ujemnych i dodatnich z pierwotnej linii komórkowej czerniaka za pomocą sortowania komórek aktywowanego magnetycznie. CD133-dodatnie CSC czerniaka są dalej badane w celu zrozumienia mechanizmów nowotworzenia czerniaka.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Magnetyczne sortowanie komórek czerniaka CD133+ i CD133- za pomocą kolumn LS

  1. Przygotuj bufor MACS zawierający 2 mM EDTA i 5% FCS w PBS. Wymieszać przez odwrócenie i sterylny bufor filtratu za pomocą jednostki filtrującej Steritop-GP 0,22 μm. Schłodzić bufor do temperatury 4-8 °C i odgazować przed użyciem.
  2. Podgrzej pożywkę Accutase, PBS i Quantum 263 do 37 °C.
  3. Umyj 80% zlewających się komórek za pomocą PBS. Dodać odpowiednią ilość Accutazy i inkubować, aż komórki oderwą się od powierzchni hodowli. Zbierz komórki w probówce o pojemności 50 ml za pomocą pożywki Quantum 263.
  4. Określić liczb....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Dokładności PAA Laboratories GmbHL11-007
Sól disodowa kwasu etylenodiaminotetraoctowego odwodniona (EDTA) Sigma-Aldrich, Inc.E-7889
CD133/1 (W6B3C1)Miltenyi Biotec GmbHNumer katalogowy: 130-092-395
Pośredni zestaw mikrokulek CD133 dla ludzi Miltenyi Biotec GmbHNumer katalogowy: 130-091-895Zawiera: CD133/1(AC133)-biotynę, mikrogranulki anty-biotyny i odczynnik blokujący FcR
Kwantowy 263 PAA Laboratories GmbHU15-815
Separator MACS z wieloma podstawkami Miltenyi Biotec GmbHNumer katalogowy: 130-042-303
Kolumny separacyjne MACS 25 kolumn LS Miltenyi Biotec GmbHNumer katalogowy: 130-042-401
Separator QuadroMACS Miltenyi Biotec GmbHNumer katalogowy: 130-090-976
(wersja angielska)

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Macierzowe kom rki macierzyste czerniakakom rki CD133 dodatniekom rki CD133 ujemneizolacja nowotworowych kom rek macierzystychpierwotne kom rki czerniakabufor MACSmikrokulki antybiotynowekolumna LSodczyn blokuj cy FcR

Powiązane artykuły