Wizualizacja ekspresji białek w oparciu o CUBIC: procedura wizualizacji ekspresji białek w biopsjach skóry myszy o pełnej grubości

Abstract

Źródło: Liang, H. et al. Protokół CUBIC wizualizuje ekspresję białek w rozdzielczości pojedynczej komórki w preparatach skóry z całego wierzchowca. J. Vis. Exp (2016)

Ten film opisuje technikę wizualizacji opartą na CUBIC, technikę obrazowania zależnej od oczyszczania tkanek do wizualnej oceny ekspresji białka w biopsjach skóry z całego montażu w rozdzielczości pojedynczej komórki w 3D. Ten prosty technicznie protokół pozwala na wizualizację białek skóry bez przygotowywania skrawków skóry.

Protocol

Wszystkie procedury dotyczące zwierząt zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Przygotowanie przezroczystej tkanki skóry myszy

UWAGA: Wszystkie myszy użyte w tym badaniu miały podłoże genetyczne C57BL/6

1. Pobieranie tkanki skórnej myszy.
   1. Humanitarna eutanazja myszy przez zwichnięcie szyjki macicy.
   2. Ostrożnie usuń włosy z odpowiedniego obszaru skóry za pomocą trymera, uważając, aby nie zranić skóry.
   3. Umyj skórę w celu odkażenia 70% etanolem w roztworze soli fizjologicznej bufo....

Results

Rysunek 1: Przygotowanie komory obrazowania. Odp.: Materiały eksploatacyjne wymagane do przygotowania komory obrazowania to niebieska tack, ciastolina lub podobne oraz 2 szkiełka nakrywkowe (24 x 50 mm). B: Przygotować dwa cienkie paski niebieskiego szkiełka (średnica około 2 mm x 2 cm) i dwa szkiełka nakrywkowe. C: Umieść niebieskie paski przyklejające się na jedny.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Paraformaldehyd	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał P6418
Etanol 96% (niedenaturowany)	Zaopatrzenie w chem-supply	UN1170
4',6-diamidyno-2-fenyloindol (DAPI)	Roche	10236276001
N,N,N',N'-tetrakis (2-hydroksypropylo)etylenodiamina	Merck Millipore	Numer katalogowy: 821940
Eter mono-p-izooktylofenylowy glikolu polietylenowego	Merck Millipore	648462
Tryton X-100	Merck Millipore	648462
sacharoza	Sigma-Aldrich	S0389
Optymalna temperatura cięcia Panie przewodniczący, panie i panowie! Związek	Tka tkankowa	Numer katalogowy: 4583
przeciwciało anty-Keratyna14	Covance (Kot)	PRB-155P
przeciwciało anty-Ki67	Księga Abcam	ab16667
Osioł anty-królik Alexa 594	Technologie życiowe	Nr kat. A21207
Dimetylosulfotlenek	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał D2650
mocznik	Merck Millipore	Numer katalogowy: 66612
2,2′,2′'-nitrolotriethanol	Merck Millipore	137002
Mikroskop konfokalny	Nikon Instruments Inc	Nikon A1 - Mikroskop konfokalny
cruZer6 Trymer do twarzy	Braun	Braun cruZer6 Twarz
Azydek sodu	Sigma-Aldrich	438456