Organotypowa hodowla plastrów mózgu szczura w 18. dniu embrionalnym (E18)

Streszczenie

Organotypowe hodowle skrawków z embrionalnych mózgów gryzoni są szeroko stosowane w badaniach nad rozwojem mózgu. Choć systemy in vivo często oferują pewne zalety, organotypowe hodowle skrawków umożliwiają przeprowadzenie szeregu manipulacji, które obecnie nie są możliwe do wykonania in vivo. Do tej pory organotypowe hodowle skrawków embrionalnego mózgu wykorzystywano do śledzenia pojedynczych komórek za pomocą mikroskopii time-lapse, manipulowania ekspresją genów w wypustkach zwojowych (regionie trudnym do ukierunkowania podczas elektroporacji in utero) oraz do badań farmakologicznych. W niniejszym protokole wideo demonstrujemy, jak przygotować organotypowe hodowle skrawków z embrionów szczura w 18. dniu rozwoju embrionalnego. Protokół obejmuje wypreparowanie embrionów, ich zatapianie na lodzie w agarozie o niskiej temperaturze topnienia, krojenie zatopionych mózgów na wibratomie, a na koniec przenoszenie skrawków na filtry w naczyniach hodowlanych. Niniejszy protokół w obecnej formie jest również możliwy do zastosowania przy tworzeniu organotypowych hodowli skrawków z różnych stadiów embrionalnych zarówno u szczurów, jak i myszy.