Transformacja DNA plazmidowego do E. coli metodą szoku termicznego

Streszczenie

Transformacja plazmidowego DNA do E. coli z wykorzystaniem metody szoku termicznego jest podstawową techniką biologii molekularnej. Polega ona na wprowadzeniu obcego plazmidu lub produktu ligacji do bakterii. Niniejszy protokół wideo opisuje tradycyjną metodę transformacji z użyciem komercyjnie dostępnych bakterii chemicznie kompetentnych firmy Genlantis. Po krótkiej inkubacji w lodzie mieszaninę chemicznie kompetentnych bakterii i DNA umieszcza się w temperaturze 42°C przez 45 sekund (szok termiczny), a następnie ponownie przenosi do lodu. Dodaje się pożywkę SOC, a transformowane komórki inkubuje się w temperaturze 37°C przez 30 min z wytrząsaniem. Aby zapewnić izolację kolonii niezależnie od wydajności transformacji, na płytki wysiewa się dwie ilości transformowanych bakterii. Ten tradycyjny protokół może być z powodzeniem stosowany do transformacji większości komercyjnie dostępnych bakterii kompetentnych. Komórki TurboCells firmy Genlantis mogą być również wykorzystane w nowym, 3-minutowym protokole transformacji opisanym w instrukcji obsługi.