Guzy pęcherza moczowego u myszy żeńskich indukuje się w sposób małoinwazyjny poprzez cewnikowanie, lokalną kauteryzację oraz następującą po niej adhezję komórek raka do miejsc oparzeń.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Ortotopowy model mysiego raka pęcherza moczowego
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
W tej prostej procedurze guzy pęcherza moczowego są indukowane u samic myszy C57 poprzez cewnikowanie, lokalną kauteryzację i następującą po niej adhezję komórek. Po cewnikowaniu przezcewkowym i opróżnieniu pęcherzy moczowych, zwierzęta są ponownie cewnikowane, aby umożliwić wprowadzenie platynowego drutu do pęcherzy bez uszkadzania cewki moczowej lub pęcherza. Cewniki wykonane są z teflonu, który służy jako izolator drutu przewodzącego prąd elektryczny do pęcherza w celu wywołania oparzenia. Urządzenie do elektrokoagulacji jest wykorzystywane do dostarczenia mocy 2,5W do odsłoniętego końca drutu, co prowadzi do wypalenia warstw zewnątrzkomórkowych i stworzenia miejsc przyczepienia dla komórek raka, które są wprowadzane do pęcherza w zawiesinie podczas kolejnego cewnikowania. Komórki pozostają w pęcherzu przez 90 minut, po czym cewniki są usuwane, a pęcherze opróżniają się w sposób naturalny. Rozwój guza jest monitorowany za pomocą ultradźwięków. W dołączonym materiale wideo szczególną uwagę poświęcono technice cewnikowania.
Protokół
1. Zwierzęta
- Samice myszy C57BL/6J (Mus musculus) są weryfikowane przez dostawcę przed wysyłką pod kątem braku zaraźliwych ektopasożytów, endopasożytów z grupy helmintów oraz przeciwciał przeciwko 17 wirusom mysim. Myszy są utrzymywane w akredytowanym przez AAALAC domu zwierząt Uniwersytetu Tulane zgodnie z wytycznymi Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.1
- W szczególności myszy są utrzymywane grupowo (4-5 myszy/klatka) w indywidualnie wentylowanych klatkach poliwęglanowych z filtrami mikroizolacyjnymi w pokrywach, na ściółce z twardego drewna. Mają do dyspozycji wodę z kranu oraz peletowaną karmę dla ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Tę małoinwazyjną metodę tworzenia ortotopowych guzów pęcherza u samic myszy można zastosować również w przypadku innych typów komórek niż MB49, choć należy spodziewać się odmiennych wyników. W przypadku użycia mniej agresywnych komórek nowotworowych, niewielkie zwiększenie mocy (w przyrostach 0,5 W w celu ustalenia nowego optimum) pozwoli uzyskać obszar bardziej podatny na przyleganie komórek nowotworowych, a dłuższy czas inkubacji wstrzykniętych komórek w pęcherzu spowoduje zwiększenie stopnia przylegania komórek w miej.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Doświadczenia na zwierzętach przeprowadzono zgodnie z wytycznymi i przepisami ustalonymi przez Institutional Care and Use Committee Uniwersytetu Tulane.
Podziękowania
Praca ta była finansowana z grantu National Science Foundation CAREER award (CBET-0846395) oraz przez Department of Comparative Medicine na Tulane University.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Myszy C57Bl/6J | Jackson Laboratory | 000664 | 3-5-tygodniowe |
| Klatki z poliwęglanu i wentylowany regał | Lab Products | Super Mouse 750 | 327mm x 190mm x 143mm |
| Ściółka z twardego drewna | Harlan Laboratories | SaniChips klasy laboratoryjnej – | |
| Karma dla gryzoni | Harlan Laboratories | Rodent Diet 2019 | |
| Kaniula do żył (IV) | MWI Veterinary Supply | 009231 | 24 G x ¾ in. |
| Urządzenie do elektrokoagulacji | Bovie Medical Corporation | Aaron 900 | |
| Urządzenie do USG | Sonosite | 180 Plus (Vet) | |
| Linia komórkowa MB49 | Wake Forest University Baptist Medical Center | N.D. | |
| DMEM | Invitrogen | 21063-029 | |
| Płodowa surowica bydlęca | Gemini Bio Products | 100106 500A57B | |
| Penicylina-Streptomycyna | Invitrogen | 15140-163 |
Bibliografia
- Institute of Laboratory Animal Resources. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , National Academies Press. Washington, DC. (1996).
- Gunther, J. H., Jurczok, A., Wulf, T., Brandau, S., Deinert, I., Jocham, D. Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49). Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).
- Zha....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
