Ocena właściwości sygnalizacyjnych nabłonka ektodermalnego podczas rozwoju twarzoczaszki

Summary

Ten artykuł opisuje technikę przeszczepu tkanek, która została zaprojektowana w celu przetestowania właściwości sygnalizacyjnych i wzorcowych powierzchniowej ektodermy głowowej podczas rozwoju twarzoczaszki.

Abstract

Dostępność ptasich embrionów pomogła eksperymentalnym embriologom zrozumieć losy komórek podczas rozwoju oraz rolę interakcji tkankowych, które regulują wzorce i morfogenezę kręgowców (np. ^{1, 2, 3, 4}). W tym miejscu ilustrujemy metodę, która wykorzystuje tę dostępność do testowania właściwości sygnalizacyjnych i wzorcowych tkanek ektodermalnych podczas rozwoju twarzy. W tych eksperymentach tworzymy chimery piskląt przepiórczych ⁵ lub piskląt myszy ⁶, przeszczepiając powierzchniową ektodermę głowową, która pokrywa górną szczękę przepiórki lub myszy, do tego samego regionu lub regionu ektopowego zarodków piskląt. Wykorzystanie przepiórki jako tkanki dawcy do przeszczepu pisklętom opracowano w celu wykorzystania markera jąderkowego obecnego w komórkach przepiórczych, ale nie w komórkach kurcząt, umożliwiając w ten sposób badaczom rozróżnienie tkanek gospodarza i dawcy ⁷. Podobnie, powtarzalny element jest obecny w genomie myszy i ulega ekspresji wszechobecnej, co pozwala nam rozróżnić tkanki gospodarza i dawcy w chimerach piskląt myszy ⁸. Zastosowanie ektodermy myszy jako tkanki dawcy znacznie poszerzy naszą wiedzę na temat tych interakcji tkankowych, ponieważ pozwoli nam to przetestować właściwości sygnalizacyjne ektodermy pochodzącej z różnych zmutowanych zarodków.

Protocol

1. Przygotowanie tkanki dawcy

1. Przygotuj pożywkę hodowlaną, naostrz szklane szpilki, naostrz igły wolframowe.
2. Zbierz zarodek ze skorupy, umyj w lodowatym PBS.
   1. Za pomocą strzykawki o pojemności 10 ml i igły o rozmiarze 18 usuń 1,0 ml albuminy ze spiczastego końca skorupki jajka.
   2. Zrób mały otwór na górze skorupy za pomocą nożyczek, a następnie wytnij okrągły otwór, aby odsłonić zarodek
3. Zdejmij głowę i umieść w DMEM (bez surowicy, temperatura pokojowa)
4. Wypreparuj wyrostek czołowo-nosowy z zarodka (lub innego miejsca dawczego, takiego jak wyrostek szczękowy lub żuchwowy)
5. Trawić w 2,....

Discussion

Zastosowanie tej metody przeszczepu pozwoliło nam ustalić, że ektoderma zawiera informację sygnalizacyjną, która reguluje polaryzację grzbietowo-brzuszną i proksodywne przedłużenie górnej szczęki. Podobieństwo wyników przy użyciu ektodermy przepiórczej lub myszy oraz zachowanie sygnałów molekularnych w tej tkance wśród wielu gatunków ^6,11 wskazuje, że jest to wysoce konserwatywne centrum sygnalizacyjne wśród kręgowców. Co więcej, inni badacze zastosowali podobne techniki do przetestowania właściwości sygnaliza.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Tektronix, Inc.
DMEM	Uniwersytet Kalifornijski - San Francisco	CCFDA003
BSA	Sigma-Aldrich	A7906
Dispase	GIBCO, firmy Life Technologies	17105-041
Szalka Petriego 35x10 mm	Falcon BD	1008
No. 5 Kleszcze Dumont	Narzędzia do nauki precyzyjnej	11252-20
Nożyczki	Fine Science Tools	14058-11
Nożyczki sprężynowe	Fine Science Tools	15010-11
Uchwyt na igłę	Fine Science Tools	26016-12
Igła wolframowa	Fine Science Tools	26000
Rurka mikrokapilarna	Drummond Scientific	3-000-225-G
Pipety Pasteura	Fisher Scientific	13-678-6B
Nożyczki sprężynowe	Fine Science Tools	15010-11
Uchwyt ostrza	Fine Science Tools	10052-11
Żyletka	Fine Science Tools	10050-00