Tworzenie odwracalnego modelu cholestazy u szczura

Podsumowanie

Cholestaza jest stanem klinicznym często spotykanym zarówno w praktyce chirurgów, jak i gastroenterologów. Stworzenie odwracalnego modelu cholestazy u szczura może być trudne ze względu na niewielki rozmiar oraz specyficzną anatomię hepatopankreatobiliarnej tych zwierząt. Niniejszy artykuł wideo prezentuje sposób stworzenia odwracalnego modelu cholestazy.

Streszczenie

Cholestaza jest stanem klinicznym często spotykanym zarówno w praktyce chirurgów, jak i gastroenterologów. Cholestaza może powodować różnorodne zmiany fizjologiczne oraz wpływać na stan odżywienia i wyniki chirurgiczne. Badanie zmian patofizjologicznych zachodzących w wątrobie i innych narządach jest istotne. W tym celu przeprowadzono liczne badania na szczurzych modelach cholestazy.

W naszym ostatnim badaniu dotyczącym roli metyloprednizolonu w uszkodzeniu reperfuzyjnym wykorzystaliśmy odwracalny model cholestazy u szczurów. Opisano różne techniki tworzenia odwracalnego modelu cholestazy. Stworzenie odwracalnego modelu cholestazy u szczurów może być trudne ze względu na ich mniejszy rozmiar oraz specyficzną anatomię układu wątrobowo-trzustkowo-żółciowego. Niniejszy artykuł wideo demonstruje sposób tworzenia odwracalnego modelu cholestazy.

Model ten może być wykorzystywany w różnorodnych badaniach, takich jak analiza zmian żywieniowych, fizjologicznych, patologicznych, histologicznych i immunologicznych w przewodzie pokarmowym. Model ten może również służyć do badania skutków cholestazy oraz różnych interwencji terapeutycznych przy głównych operacjach wątroby.

Protokół

1. Anatomia dróg żółciowych szczura

Średnica i długość przewodu żółciowego wynosiły odpowiednio 1 mm i 29 mm. Średnia odległość między odźwiernikiem a brodawką dwunastniczą wynosiła 28 mm. Wyróżnia się dwa główne przewody trzustkowe uchodzące do przewodu żółciowego – przewód przedni otwiera się po lewej stronie, a przewód tylny po prawej stronie. Oprócz tych głównych przewodów, do przewodu żółciowego uchodzi szereg mniejszych przewodów odprowadzających treści ze wszystkich trzech części trzustki.⁶

2. Technika

Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi Narodowych Instytutów Zdrowia (National Institutes of Health) dotyczącymi etyki badań i zostały zatwierdzone przez Komisję Badawczą oraz Komisję ds. Opieki nad Zwierzętami danej instytucji. Do prezentacji wykorzystano samce szczurów rasy Sprague-Dawley w wieku 8 tygodni. Szczury pochodziły z laboratorium Charles River Laboratories w Wilmington, MA i wszystkie ważyły ponad 300 g. Szczury miały dostęp do standardowej diety laboratoryjnej i były utrzymywane razem w standardowych warunkach laboratoryjnych.

Szczury zostały wstępnie znieczulone izofluranem, a podczas operacji utrzymywano znieczulenie za pomocą maski z izofluranem. Wykonano cięcie w linii środkowej o długości 2 cm, zaczynając od wyrostka mieczykowatego. Po otwarciu powięzi płaty wątroby odsunięto kranialnie za pomocą rozwieraka Sena, a dwunastnicę odsunięto kaudalnie za pomocą patyczków higienicznych. Przewód żółciowy zidentyfikowano jako strukturę rurkowatą wchodzącą do dwunastnicy. Przewód żółciowy napięto i częściowo rozcięto. Użyto sterylnej rurki polietylenowej o długości 5 cm, średnicy wewnętrznej 0,6 mm i średnicy zewnętrznej 0,9 mm. Jeden koniec rurki został zgrzany na gorąco, a drugi delikatnie ścięty pod skosem. Ścięty koniec wprowadzono do przewodu żółciowego. Zabezpieczono go w miejscu montażu za pomocą szwów Nylon 8-0, zarówno proksymalnie, jak i dystalnie względem otworu w przewodzie żółciowym. Pozostałą część rurki wraz z zamkniętym końcem umieszczono w jamie otrzewnowej. Pole operacyjne przemyto solą fizjologiczną. Brzuch zamknięto dwuwarstwowo szwem Polyglactin 4-0. Brzuchy (linea alba) zamknięto szwem ciągłym, a następnie wykonano przerwane szwy skórne. Na skórę nałożono klej tkankowy. Szczurom pozwolono na rekonwalescencję w standardowych warunkach laboratoryjnych przy codziennym monitorowaniu masy ciała w celu zapewnienia prawidłowego nawodnienia.

W celu przeprowadzenia operacji cofnięcia cholestazy szczury zanestezjowano izofluranem zgodnie z wcześniejszym opisem. Brzuch otwarto w miejscu poprzedniego cięcia. Zidentyfikowano rurkę i wyjęto ją z jamy otrzewnej. Zrosty sieciowe wokół rurki usunięto za pomocą tępej i ostrej dyssekcji. Następnie wyznaczono miejsce w dwunastnicy, które pozwoli na wygodne umieszczenie rurki do duodenostomii. W miejscu tym wykonano szew przetokowy o średnicy 2-3 mm, używając nici Nylon 8-0. Następnie dwunastnicę otwarto w obrębie tego szwu. Zamknięty koniec rurki przycięto do odpowiedniej długości. Upewniono się, że żółć przepływa swobodnie. Koniec rurki wprowadzono do dwunastnicy, a następnie zaciśnięto szew przetokowy. Jamę brzuszną przepłukano i zszyto warstwowo.

W poprzednim badaniu, w którym przeprowadzono choledochoduodenostomię z zastosowaniem innej techniki, szczury przeżyły 12 tygodni i w tym okresie pozostawały zdrowe. Badanie to potwierdziło również odwrócenie zmian biochemicznych i histologicznych po choledochoduodenostomii u szczurów poddanych niedrożności przewodu żółciowego przez okres 2 tygodni.⁷

Dyskusja

Cholestaza prowadzi do szeregu zmian w układzie pokarmowym. Przeprowadzono badania analizujące zmiany w układzie odpornościowym oraz stanie odżywienia organizmu.^1-3 Cholestaza może wpływać na wyniki operacji wątroby. Wykonano badania mające na celu poprawę wyników zabiegów chirurgicznych wątroby w obecności cholestazy.^4-5 Wraz z postępem medycyny i badań zostaną przeprowadzone dalsze analizy nad cholestazą. Dlatego konieczne jest posiadanie dobrego modelu cholestatycznego. Szczur jest preferowanym z...