Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Chirurgia implantacji słupka głowy
UWAGA: Upewnij się, że używasz sterylnych narzędzi i organizuj operację oraz rekonwalescencję w różnych strefach. Raz opanowany zabieg implantacji trwa około 30 minut.
- W przypadku analgezji 30 minut przed rozpoczęciem zabiegu należy wstrzyknąć podskórnie buprenorfinę (0,05 mg/kg) i umieścić zwierzę z powrotem w klatce domowej.
nuta: Działanie przeciwbólowe buprenorfiny utrzymuje się przez około 12 godzin, długo po zakończeniu zabiegu. Z naszego doświadczenia wynika, że myszy nie wykazują żadnych oznak niepokoju związanych z tą interwencją, ale zalecana jest kolejna dawka 0,05 mg/kg buprenorfiny 24 godziny po zabiegu.
- Znieczulić zwierzę w komorze z 2,5%-3% izofluranem. Odczekaj 3 minuty i sprawdź, czy mysz jest odpowiednio znieczulona, obserwując oddychanie i brak ruchu wewnątrz komory. Przenieś mysz do stożka nosowego na stole operacyjnym z poduszką grzewczą i poprzez międzypalcowe szczypanie sprawdź, czy nie ma odruchu odstawienia i obniż poziom izofluranu do 1,5%.
- Ogol głowę myszy za pomocą elektrycznej maszynki do golenia. Aby uzyskać sterylne środowisko, przetrzyj ogolony obszar roztworem jodu, a następnie 70% alkoholem. Powtórz tę procedurę jeszcze dwa razy.
- Wstrzyknąć chlorowodorek lidokainy (2%, 2 mg/kg) pod skórę głowy w celu znieczulenia miejscowego i odczekać 5 minut, aby zaczęły się efekty. Aby uniknąć uszkodzenia oczu z powodu suchości, zakryj oczy myszy miejscową maścią okulistyczną weterynaryjną.
- Za pomocą kleszczy chwyć skórę z tyłu głowy, a za pomocą nożyczek (lub skalpela) wykonaj podłużne nacięcie o długości około 1,5 cm, aby odsłonić czaszkę.
- Za pomocą skalpela podrap okostną. Uważaj, aby nie drapać zbyt mocno, ponieważ mocowanie słupka głowy może zostać naruszone, jeśli czaszka zacznie lekko krwawić.
- Nałóż kroplę zielonego aktywatora (patrz Tabela Materiałów) na środek czaszki. Poprawi to utrwalenie cementu poprzez zwiększenie przepuszczalności kości.
- Przygotuj cement: zmieszaj jedną łyżkę (patrz tabela materiałów) polimeru z pięcioma kroplami monomeru i jedną kroplą katalizatora. Za pomocą pędzla nałóż dużą ilość mieszanki cementowej między punkty orientacyjne czaszki lambda i bregma.
- Szybko umieść słupek na cemencie ruchem przesuwającym, przechodząc od lambda do bregma. Po umieszczeniu słupka na głowę ponownie nałóż więcej cementu wokół dolnej części, aby upewnić się, że sztyca prawidłowo przylega do czaszki. Aby zagwarantować prawidłowe mocowanie, upewnij się, że cement jest obficie nałożony i wyschł przed przejściem do następnego kroku.
nuta: Dzięki tej procedurze mocowania sztyca nie odpadnie i pozwoli na długotrwałe, powtarzające się testy; W naszych rękach usunięcie sztycy wynosi <10%.
- Przygotuj mieszankę żywicy, nakładając stosunek proszku do cieczy, który umożliwia uzyskanie gładkiej konsystencji mieszanki. Żywicę należy nakładać w miejscu, w którym został nałożony cement, a także wokół słupka głównego, aby zabezpieczyć jego powierzchnię.
- Odczekaj 3 minuty, aż żywica wyschnie i zamknij skórę z tyłu uszu szwem monofilamentowym. Za pomocą bawełnianego wacika nanieść rozcieńczony (10%–20%) roztwór jodu na operowany obszar.
nuta: Upewnij się, że skóra nie przykleja się do żywicy.
- Wyłącz znieczulenie i umieść zwierzę pod czerwonym, ciepłym światłem, aby uniknąć hipotermii. Umieść zwilżoną karmę i hydrożel lub inne źródło wody na bazie żelu w podłodze klatki. Nie pozostawiaj myszy bez opieki, dopóki nie odzyska przytomności. Gdy tylko zwierzę w pełni wyzdrowieje po zabiegu (zwykle od 30 minut do 1 godziny po), umieść je w klatce z grupami po trzy lub cztery, aby stymulować interakcje społeczne.