Echokardiografia myszy: nieinwazyjna technika oceny morfologii serca

Streszczenie

Źródło: Baudouy, D., et al. Echokardiograficzne i histologiczne badanie morfologii serca u myszy. J. Vis. Exp. (2017).

Ten film opisuje protokół wykonywania echokardiografii na myszy laboratoryjnej.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Echokardiografia

1. Określ masę ciała myszy za pomocą standardowej wagi laboratoryjnej, trzymając ją lekko za ogon, aby zapewnić prawidłowe ułożenie.
2. Znieczulić zwierzę przez dootrzewnowe wstrzyknięcie 50 mg/kg pentobarbitalu.
   nuta: Każdy inny rodzaj znieczulenia może być zastosowany, jeśli ten sam protokół jest stosowany przez cały czas trwania badania. Zalety i wady zostaną omówione poniżej.
3. Umieść mysz z powrotem w jej własnej klatce i poczekaj, aż przestanie reagować, zacznie oddychać równomiernie, a odruchy tylnej stopy nie będą odczuwalne. Aby to sprawdzić, lekko ściśnij stopę i obserwuj, czy noga nadal się chowa.
4. Ogol lewą stronę klatki piersiowej i lewą pachę za pomocą dostępnej w handlu golarki dla gryzoni.
   nuta: Zastosowanie dedykowanej golarki dla gryzoni pozwala na całkowite usunięcie cienkiego włoska myszy, aby uniknąć zakłóceń w pomiarze echokardiograficznym. Należy unikać komercyjnych kremów lub roztworów do depilacji, ponieważ są one zwykle perfumowane, co będzie przeszkadzać zwierzęciu po przebudzeniu. Unikaj nadmiernego golenia, ponieważ zwiększa to utratę ciepła.
5. Śpiące zwierzę ułożyć na ciepłej podkładce ustawionej na 40–42 °C w płytkiej pozycji lewostronnej, z głową na godzinie 12 i ogonem na godzinie 6. Przymocuj lewe ramię, lewą nogę i ogon taśmą.
6. Nałóż wstępnie podgrzany żel do echokardiografii na ogoloną klatkę piersiową i głowicę głowicy.
7. Umieść przetwornik przymostkowo w lewo, kierując go na prawą stronę szyi, aby uzyskać dwuwymiarowy (2D) widok przymostkowy w długiej osi na poziomie mięśnia brodawkowatego. Obróć przetwornik o 90° zgodnie z ruchem wskazówek zegara, aby uzyskać krótką oś view na poziomie mięśni brodawkowatych. Użyj minimalnego ustawienia głębi i powiększenia, aby zmaksymalizować jakość obrazu i liczbę klatek na sekundę. Ustaw prędkość zamiatania na maksimum.
   1. Aby uzyskać te ustawienia, można użyć różnych opcji ustawień powiększenia i głębi, w zależności od urządzenia i oprogramowania. Nagrywaj obrazy w trybie M z przewodnikiem 2D w widoku krótkiej osi. Patrz rysunek 1A i B.
      nuta: Uważaj, aby nie wywierać nadmiernego nacisku na klatkę piersiową, ponieważ może to spowodować bradykardię.
8. Nagraj co najmniej 3 serie po 3 pętle cine bicia serca dla każdego zwierzęcia.
   nuta: W przypadku oprogramowania echokardiografu używanego w tym badaniu należy nacisnąć przycisk "Pobierz/Zapisz" tylko raz. Ta metodologia jest specyficzna dla echokardiografu z tym konkretnym oprogramowaniem. Inne pakiety oprogramowania mogą być używane z różnymi maszynami.
9. Po udanych nagraniach zetrzyj żel echokardiograficzny z klatki piersiowej myszy, poduszki grzewczej i przetwornika. Usuń taśmę z kończyn i ogona.
10. Pozostaw mysz pod obserwacją na poduszce grzewczej, przykrytą chusteczką, aby uniknąć niepotrzebnej ekspozycji na światło i utraty ciepła, aż się obudzi.
11. Umieść zwierzę z powrotem w klatce.
12. Analizuj zarejestrowane obrazy w trybie M z widoku krótkiej osi przymostkowej, aby określić wymiary i funkcję lewej komory (LV). Zmierzyć grubość przedniej ściany lewej komory w skurczu i rozkurczu (LVAW i LVAWd), wewnętrzną średnicę końca skurczowego i końcoworozkurczowego lewej komory (LVIDs i LVIDd) oraz grubość tylnej ściany lewej komory (LVPW) w skurczu i rozkurczu (LVPWs i LVPWd), identyfikując granicę faz tkanka-krew na przechowywanych obrazach.
13. Zmierzyć wymiary rozkurczowe w czasie pozornych maksymalnych wymiarów rozkurczowych LV i wymiarów skurczowych LV w czasie najbardziej wysuniętego do przodu skurczowego wychylenia tylnej ściany lewej wysokości. Dotknij ekranu dotykowego ikony "Analizuj", a następnie ikony "LVAWd". Umieścić suwmiarkę elektroniczną na styku prawej jamy komorowej z przednią ścianą lewej komory w rozkurczu.
14. Umieść suwmiarkę elektroniczną na styku między przednią ścianą lewej komory a jamą lewej wysokości, aby uzyskać rozkurczową grubość przedniej ściany lewej komory; oprogramowanie bezpośrednio przełączy się na wewnętrzny pomiar końca rozkurczowego LV.
15. Umieść suwmiarkę na granicy faz między wnęką lewej komory a tylną ścianą lewej komory, aby uzyskać wewnętrzną średnicę końcoworozkurczową lewej komory; oprogramowanie przełączy się na pomiar grubości tylnej ściany lewej komory.
16. Umieść suwmiarkę na granicy między tylną ścianą lewej komory a osierdziem, aby uzyskać rozkurczową tylną ścianę lewej komory. W przypadku wymiarów skurczowych LV dotknij ekranu dotykowego ikony "LVAWs" i ustaw suwmiarkę elektroniczną na styku między prawą jamą komorową a przednią ścianą lewej komory w skurczu.
17. Ustawić suwmiarkę elektroniczną na granicy faz między przednią ścianą lewej komory a jamą lewej komory, aby uzyskać skurczową przednią ścianę lewej komory. Powtórz proces opisany powyżej dla wewnętrznej średnicy końca skurczu lewej komory i grubości tylnej ściany skurczowej lewej lewej wysokości. Skorzystaj z najnowocześniejszej konwencji przyjętej przez Amerykańskie Towarzystwo Echokardiografii, aby prześledzić granice wsierdzia i nasierdzia.
    nuta: Parametry funkcji kurczliwości LV zostaną automatycznie obliczone na podstawie poprzednich pomiarów. Skrócenie ułamkowe LV (FS) definiuje się jako FS (%) = [(LVIDd - LVIDs)/LVIDd] x 100. Frakcję wyrzutową lewej komory (EF) oblicza się za pomocą zmodyfikowanego wzoru Teicholza, gdzie EF (%) = [(LVIDd³ - LVIDs³)/LVIDd³] x 100¹². Patrz rysunek 1A, B.
18. Przechowuj dane na płytach kompaktowych lub pamięciach USB i twórz kopie zapasowe.
19. Importuj, analizuj i eksportuj dane za pomocą odpowiedniego oprogramowania.

Wyniki

Rycina 1: Echokardiografia o standardowej rozdzielczości (>10 MHz) w celu pomiaru wymiarów skurczowych i rozkurczowych lewej komory oraz czynności serca u myszy z rozszerzonym przerostem serca po zawale mięśnia sercowego w porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi. Reprezentatywne zapisy echokardiograficzne od prawidłowych, zdrowych myszy (A) i zwierząt z rozszerzenie...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Żel do transmisji ultradźwięków; Żel Aquasonic 100	Parker
Liniowa sonda ultradźwiękowa; L15-7IO	Philips Opieka zdrowotna
Echokardiograf; Przeglądarka IE33 xMATRIX	Philips Opieka zdrowotna
Golarka dla gryzoni	Aparatura Harvarda	Numer katalogowy: 34-0243

TGL