Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Hybrydyzacja sondy i wzmocnienie sygnału w hybrydyzacji RNA in situ: technika wykrywania określonych sekwencji RNA w skrawkach tkanek

3.2K wyświetleń

30 kwietnia 2023

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Outh-Gauer, S. et al. Chromogeniczna hybrydyzacja in situ jako narzędzie do diagnozowania raka głowy i szyi związanego z HPV. J. Vis. Exp. (2019 rok)

Ten film opisuje strategię sekwencyjnej hybrydyzacji, która polega na hybrydyzacji sond mRNA do określonego docelowego mRNA. Po hybrydyzacji sondy przeprowadza się wzmocnienie sygnału w celu zwiększenia rozdzielczości poprzez zmniejszenie stosunku sygnału do szumu podczas RNA-CISH próbek histologicznych.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem ludzi zostały przeprowadzone zgodnie z instytucjonalnymi, krajowymi i międzynarodowymi wytycznymi dotyczącymi dobrobytu ludzi i zostały sprawdzone przez lokalną komisję rewizyjną instytucji.

1. Przeprowadzanie testu

UWAGA: Nie pozwól, aby sekcje wyschły pomiędzy etapami inkubacji.

  1. Hybrydyzacja sondy HPV
    UWAGA: Upewnij się, że sondy są wstępnie ogrzane, aby rozpuścić wszelkie opady przed użyciem. Na tym etapie zamiast sondy HPV można również zastosować izomerazę peptydylo-prolilową B (PPIB) do kontroli pozytywnej l....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Piekarnik HybEZ (110v) Zaawansowana diagnostyka komórkowa Inc. Numer katalogowy: 321710
Stojak przesuwny HybEZ Zaawansowana diagnostyka komórkowa Inc. 300104
Odczynniki do wykrywania RNAscope 2.5 HD-BROWNZaawansowana diagnostyka komórkowa Inc.Numer katalogowy: 322310Ten zestaw zawiera odczynniki do amplifikacji AMP1, AMP2, AMP3, AMP4, AMP5 i AMP6 oraz odczynniki do wykrywania DAB-A i DAB-B
Sonda kontroli ujemnej RNAscope 3-plex Zaawansowana diagnostyka komórkowa Inc.320871DAPB (Polskie Biuro Prasowe)
Sonda kontroli pozytywnej RNAscope 3-plex Zaawansowana diagnostyka komórkowa Inc.320861Protokół PPIB
Sonda RNAscope - HPV16/18 Zaawansowana diagnostyka komórkowa Inc.311121
Odczynniki buforowe do płukania RNAscopeZaawansowana diagnostyka komórkowa Inc.310091Bufor do płukania 50X x4

Tagi

Sondy RNA w kszta cie litery Zroztw r preamplifieramieszanina odczynnik w wzmacniaj cychbufor do hybrydyzacjiroztw r do p ukaniaanaliza przekroj w tkankowychdetekcja sond HPV