Ustanowienie trójwymiarowego modelu kohodowli mysich zwojów korzenia grzbietowego i komórek rakowych: model in vitro do badania inwazji okołonerwowych komórek rakowych

Streszczenie

Źródło: Huyett, P. et al. Model inwazji okołonerwowej w raku płaskonabłonkowym głowy i szyi. J. Vis. Exp. (2017)

W tym filmie demonstrujemy procedurę tworzenia modelu inwazji komórek raka okołonerwowego in vitro poprzez wspólną hodowlę zwoju korzenia grzbietowego myszy i komórek raka neurotropowego. Model może być wykorzystany do przeprowadzania testów na raka, uzyskując szybkie i powtarzalne wyniki.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie półstałych kropelek matrycy (< 1 min na płytkę)

1. Umieść wstępnie schłodzoną szklaną płytkę denną na bloku lodu pod mikroskopem operacyjnym. Upewnij się, że podwielokrotność matrycy pozostaje na lodzie przez cały czas.
2. Umieścić kroplę matrycy o wielkości 1,5 μl w każdym z czterech rogów płytki ze szklanym dnem za pomocą mikropipetera o pojemności 2 μl lub 10 μl, pozostawiając odległość co najmniej równą samej k....

Wyniki

Rysunek 1. Test matrycowy DRG. Prawidłowe umieszczenie zwoju korzenia grzbietowego w kropli macierzy, pokazane za pomocą mikroskopii jasnego pola przy 4X. Podziałka liniowa odpowiada 1 mm.

Rysunek 2. Wyrost

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
DMEM/F-12 50/50 Mieszanka z L-glutaminą i 15 mM HEPES	Corning Cellgro	10-090-CV	Manassas, Wirginia
Surowica bydlęca płodu	Leki biologiczne w Atlancie	S11150	Kwiecista gałąź, GA
0,25% Trypsyna-EDTA (1x)	Korporacja Technologii Życiowych	25200056	Grand Island, Nowy Jork
Solanka fizjologiczna buforowana fosforanami 1x	Corning	21-040-CM	Manassas, Wirginia
Matrigel mysz hESC-Qualif	Corning Incorporated	354277	Bedford, Massachusetts
Napromieniowane promieniami gamma 35-milimetrowe szklane płytki hodowlane	Korporacja MatTek	P35G-1.5-14-C	Ashland, Massachusetts
Mikroskop operacyjny SteREO Discovery.V8	Mikroobrazowanie Carla Zeissa	Numer telefonu 495015-0021-000	Thornwood, Nowy Jork
Źródło światła Schott ACE I	Schott	A20500	Niemcy
Śledzenie komórek	Korporacja Technologii Życiowych	Zobacz materiał C2925	Karlowe Wary, Kalifornia
Igła BD PrecisionGlide 21 g	Bd	305195	Franklin Lakes, Nowy Jork

powiedział: