Test metylotiotiazolylotetrazolium lub MTT: test kolorymetryczny do pomiaru oporności na leki poprzez określenie aktywności metabolicznej w komórkach rakowych

Streszczenie

Źródło: Sciarrillo, R. et al. Wykorzystanie sekwencjonowania RNA do wykrywania nowych wariantów splicingu związanych z opornością na leki w modelach raka in vitro. J. Vis. Exp. (2016)

Ten film opisuje test kolorymetryczny, test metylotiozolo-tiazolowy (MTT), do pomiaru cytotoksyczności wywołanej lekiem w komórkach rakowych i określenia ich aktywności metabolicznej. Test ten opiera się na metabolicznej przemianie soli tetrazolowych w kolorowe produkty, odzwierciedlające aktywność mitochondrialną komórek.

Protokół

1. Test MTT dla komórek białaczkowych

1. Przygotować wcześniej roztwór MTT: Rozpuścić 500 mg formazanu MTT w 10 ml PBS i mieszać (chronić przed światłem) mieszadłem magnetycznym przez około 1 godzinę. Wysterylizować roztwór filtrem 0,22 μm.
   nuta: Roztwór można przechowywać w 10 ml podwielokrotnościach w temperaturze -20 °C. Po rozmrożeniu chronić przed bezpośrednim światłem.
2. Przygotować wcześniej zakwaszony izopropanol: Dodać 50 ml 2 M HCl do 2,5 l izopropanolu.
   nuta: Przed użyciem należy przechowywać roztwór przez co najmniej miesiąc w temperaturze pokojowej. Jeśli izopropanol nie zos....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
CCRF-CEM	ATCC, Manassas, Wirginia, Stany Zjednoczone	ATCC CCL-119 (Kontroler ATCC) CCL-119
Przekaźnik RPMI-1640	Gibco, Karlowe Wary, Kalifornia, Stany Zjednoczone	11875093
Surowica płodowa bydlęca i cielęca	Greiner Bio-One, Frickenhausen, Niemcy	758093
siarczan streptomycyny penicyliny G	Gibco, Karlowe Wary, Kalifornia, Stany Zjednoczone	15140122
Tris(hydroksymetylo)-aminometan	Sigma Aldrich	252859
CELLSTAR Kolby do hodowli komórkowych 25 metrów kwadratowych	Greiner Bio-One, Frickenhausen, Niemcy	82051-074
Formazan MTT	Sigma Aldrich	Zobacz materiał M2003
Anthos-Elisa-lektor 2001	Labtec, Heerhugowaard, Holandia		Spektrofotometr UV-Vis z 96-dołkową płytką
Greiner CELLSTAR 96-dołkowe płytki	tes Greiner/Sigma	Zobacz materiał M0812-100EA
sól fizjologiczna buforowana fosforanami (NaCl 0,9%)	B.Braun Melsungen AG, Niemcy	tel. 362 3140
Roztwór trypsyny/EDTA 100 ml	Lonza, Bazylea, Szwajcaria	Zobacz materiał CC-5012