Method Article

Badania przesiewowe śmierci komórki za pomocą barwienia DAPI: metoda szybkiego badania przesiewowego klonogennej śmierci komórek wywołanej podczerwienią w liniach komórek nowotworowych

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Kobayashi, D. et al. Jednoetapowy protokół oceny sposobu śmierci komórek klonogennych wywołanej promieniowaniem za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej. J. Vis. Exp. (2017)

Ten film demonstruje metodologię badania głównych profili śmierci komórek w liniach komórek nowotworowych wywołanych promieniowaniem jonizującym (IR) za pomocą testu barwienia DAPI. Jądra barwione DAPI komórek docelowych przechodzących śmierć komórkową wykazują odrębną morfologię i można je łatwo zidentyfikować za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Przygotowanie materiałów

  1. Szkiełka nakrywkowe w autoklawie
    1. Umieść szkiełka nakrywkowe w szklanej zlewce.
    2. Przykryj szklaną zlewkę folią.
    3. Autoklaw w temperaturze 121 °C przy ciśnieniu 15 psi przez 20 min.
    4. Suszyć w temperaturze 50 °C. Przechowywać w temperaturze pokojowej w okapie hodowlanym.
  2. Przygotuj roztwór utrwalający: 3% paraformaldehydu + 2% sacharozy w soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS)
    1. Do szklanej butelki o pojemności 1 000 ml dodaj 700 ml PBS i 30 g paraformaldehydu.
      ostrożność: Paraformaldehyd jest, należy nosić....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Szkiełko nakrywkowe MatsunamiC013001
Paraformaldehyd Sigma-Aldrich Zobacz materiał P6148-1KG
sacharoza Sigma-Aldrich84097-250G
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami Cosmo BioNumer katalogowy: 16232000
skalpel Kai MedycznyNr 20, 520-A
Naczynie do hodowli komórkowych 35 mm sokół353001
mikroskop z odwróconymi fazami Shimazu114-909
Promiennik promieniowania rentgenowskiego Faksitron BiopticsFaks RX-650
kwadratowe naczynie hodowlane CorningNumer katalogowy: 431110
szkło przesuwne MatsunamiZawody Pro-11
Odczynnik do barwienia DAPI Sygnalizacja komórkowa Zobacz materiał 8961S
Mikroskop fluorescencyjny Nikon ZAĆMIENIE Ni
mikroskop fluorescencyjny filtr DAPI NikonU-FUW, BP340-390, BA420IF, DM410
soczewka mikroskopu fluorescencyjnego (20×) NikonPlan Apo λ 20X/0.75
soczewka mikroskopu fluorescencyjnego (60×, olej) NikonOlej Plan Apo λ 60X/1.40
olej OlympusN5218600
Kamera CCD NikonDS-Qi2
oprogramowanie do akwizycji obrazów cyfrowych NikonDokument dotyczący elementów bezpieczeństwa
środek do czyszczenia soczewek Olympus OT0552 (Kanał OT0552
chloroform WakoNumer katalogowy: 035-02616
powiedział: powiedział: i informacji )

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell Death ScreeningDAPI StainingIonizing RadiationClonogenic Cell DeathFluorescence MicroscopyApoptosis DetectionMitotic CatastropheSenescence AnalysisCancer Cell LinesFixation Protocol

Related Articles