Implantacja okienka obrazowania czaszki w modelu mysim: zabieg chirurgiczny polegający na wszczepieniu szkiełka nakrywkowego na bazie szkła w celu stabilnego dostępu optycznego do obszarów mózgu myszy

Streszczenie

Źródło: Alieva, M. et al. Podłużne obrazowanie śródżyciowe zachowania komórek guza mózgu w odpowiedzi na inwazyjną biopsję chirurgiczną.J. Vis. Exp.(2019 rok)

Ten film przedstawia zabieg chirurgiczny polegający na wszczepieniu okna czaszkowego w modelu mysim w celu zapewnienia stabilnego dostępu optycznego do różnych obszarów mózgu.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Implantacja komórek nowotworowych i przygotowanie okna obrazowania czaszki

1. Przygotowanie chirurgiczne
   1. Używaj dorosłych myszy (w wieku >6 tygodni) dowolnej odmiany i płci. Uspokoić mysz poprzez wstrzyknięcie fluanizonu [neuroleptyk] + fentanylu [opioidu]) (0,4 ml / kg) + benzodiazepiny środka uspokajającego (2 mg / kg) w dawce 1:1:2 w sterylnej wodzie. Oceń stan uspokojenia zwierzęcia za pomocą uszczypnięcia palca.
      nuta: W tym protokole wykorzystano zarówno samice, jak i samce myszy C57BL / 6 ze względu na to samo tło genetyczne linii komórek nowotworowych użytej w tych eksperymentach (GL261). Mysz pozostanie w pełni uspokojona przez 1,5 godziny. Alternatywnie można zastosować znieczulenie wziewne, takie jak izofluran (mieszanina 1,5%-2% izofluranu/_O2).
   2. Zamontuj mysz na ramie stereotaktycznej i zabezpiecz głowę za pomocą zacisku na nos i dwóch nauszników.
   3. Użyj lampy grzewczej, aby utrzymać temperaturę ciała. Lampa grzewcza powinna być używana ostrożnie, alternatywnie można użyć poduszek grzewczych z recyrkulacją wody.
   4. Nałóż maść do oczu, aby chronić rogówki myszy przed wysuszeniem.
   5. Użyj ostrych nożyczek, aby ogolić futro na czaszce (obszar grzbietowy od oczu myszy do podstawy czaszki) i zdezynfekuj odsłoniętą skórę 70% etanolem.
   6. Przetnij skórę w okrężny sposób ostrymi nożyczkami i zeskrob okostną pod spodem bawełnianym wacikiem. Nałóż kroplę lidokainy 1% + epinefryny 1:100 000 na 5 minut i usuń nadmiar wacikiem.
   7. Przyklej krawędzie skóry do czaszki za pomocą kleju cyjanoakrylowego.
   8. Umieść ramkę stereotaktyczną pod mikroskopem stereoskopowym o 4-krotnym powiększeniu.
   9. Wizualizuj czaszkę przez mikroskop preparacyjny i wywierć okrągły rowek o średnicy 5 mm nad prawą kością ciemieniową. Wykonaj ten krok ostrożnie i tylko powierzchownie, unikając jakiegokolwiek nacisku na czaszkę.
   10. Zastosuj kroplę buforu kory mózgowej (125 mM NaCl, 5 mM KCl, 10 mM glukozy, 10 mM buforu HEPES, 2 mM_MgSO4 i 2 mM CaCl₂ [pH 7,4]) i unieś płat kostny za pomocą cienkich kleszczy.
   11. W kolejnych krokach utrzymuj powierzchnię mózgu pokrytą buforem kory, chyba że wskazano inaczej.
   12. Pod mikroskopem preparacyjnym uwidocznij powierzchnię mózgu i usuń oponę twardą za pomocą zakrzywionej, zwężającej się, bardzo cienkiej pęsety. Jeśli na tym etapie wystąpi krwawienie, użyj wchłanialnej gąbki żelatynowej, aby je zatrzymać.

2. Przygotowanie okna obrazowania czaszki

1. Usuń bufor kory i umieść kroplę oleju silikonowego w miejscu kraniotomii, aby uniknąć pęcherzyków powietrza pod oknem.
2. Uszczelnij odsłonięty mózg szkiełkiem nakrywkowym o średnicy 6 mm. Nałóż klej cyjanoakrylowy między szkiełko nakrywkowe a czaszkę. Delikatnie dociśnij szkiełko nakrywkowe do czaszki za pomocą cienkiej pęsety, aby zapewnić minimalną odległość między mózgiem a szkiełkiem nakrywkowym.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Igły podskórne 25G x 16 mm	Mikrolanca BD
Wchłanialna gąbka żelatynowa	Pfizer	Numer katalogowy: 300600
Szkiełka nakrywkowe okrągłe 6 mm	VWR Polska		Pianka żelowa
Klej cyjanoakrylowy	Pattex (Kot Południowy	631-0168	Żel Pattex Ultra
Cement dentystyczny	Vertex Dental		Wierzchołek samoutwardzający
wiertarka	Dremel		Dremel 3000 (wiertło dentystyczne może być wygodniejsze) + 105 frez do grawerowania
Drobno zakrzywiona pęseta	Dumont
Olej silikonowy	Sigma Aldrich	Zobacz materiał AGT508
Ramka stereotaktyczna	Stoelting (Stoelting)	181838
Chirurgiczny mikroskop stereoskopowy	Olympus		Standardowy stereotaktyczny lab, szczur i mysz
Maść okulistyczna	Kela Veterinaria		Duodrops veter kela 10 m
Ksylokaina (lidokaina 1% + epinefryna 1:100 000) Znieczulenie miejscowe	Astrazeneca		Ksylokaina (lidokaina 1% + epinefryna 1:100 000)
Hipnorm	VetaPharma Sp. z o.o		Hypnorm (cytrynian fentanylu 0,315 mg/ml + fluanizon 10 mg/ml)
Midazolam	Actavis		Midazolam Actavis 5 mg/ml

) się powiedział: .