Sekcja tkanki podniebienia z dorosłego modelu mysiego: zabieg chirurgiczny polegający na pobraniu podniebienia twardego i miękkiego z jamy ustnej dorosłej myszy

Streszczenie

Źródło: Xuan Ngo, Y. et al. Izolacja i hodowla pierwotnych keratynocytów jamy ustnej z podniebienia dorosłej myszy. J. Vis. Exp.(2021)

Ten film pokazuje zabieg chirurgiczny polegający na wypreparowaniu tkanki podniebienia z mysiego modelu.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Sekcja tkanki podniebienia dorosłej myszy

1. Ofiarować dorosłą mysz C57BL/6J (samca lub samicę) przez zwichnięcie szyjki macicy zgodnie z przepisami zakładu dotyczącymi dobrostanu zwierząt.
   1. Usuń włosy wokół ust za pomocą golarki. Za pomocą nożyczek tnij od policzka w kierunku szczęki, po obu stronach.
      nuta: Mysz musi zostać znieczulona przed złożeniem ofiary. Stosuje się znieczulającą mieszaninę medetomidyny, midazolamu i butorfanolu (patrz tabela materiałów).
2. Użyj kleszczy, aby szeroko otworzyć usta i wchłonąć krew za pomocą bawełnianego wacika. Aby zdezynfekować podniebienie, przetrzyj wnętrze jamy ustnej bawełnianym wacikiem zawierającym 10% jodu powidonu.
3. Aby zebrać podniebienie myszy, najpierw użyj chirurgicznego ostrza skalpela, aby wykonać nacięcie brzeżne o pełnej grubości wzdłuż podniebienia zębów szczęki. Następnie dokładnie rozetnij całe podniebienie za pomocą raspatorium.
   nuta: Raspatorium to narzędzie służące do podnoszenia płata śluzówkowo-okostnowego (patrz tabela materiałów) (ryc. 1B).
4. Szybko przenieś tkankę podniebienia do 15 ml probówki zawierającej 4 ml kompletnego roztworu + antybiotykowo-przeciwgrzybiczego. Chusteczki należy przechowywać na lodzie, aż będą gotowe do inkubacji.
   nuta: W przypadku pobrania od wielu myszy tkanki podniebienia mogą być trzymane na lodzie do 4 godzin.

Wyniki

Rycina 1: Przegląd procedury preparacji i izolacji keratynocytów jamy ustnej myszy. (A) Schematyczne przedstawienie jamy ustnej myszy. (B) Instrumenty używane do preparowania podniebienia i izolowania keratynocytów jamy ustnej myszy. (C) Obraz podniebienia myszy w jasnym polu. Podziałka skali: 100 μm. (D) Streszczeni...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Nożyczki do tęczówki	Muromachi Kikai	Numer katalogowy 14090-09
Medetomidyna	Nippon Zenyaku Kogyo		Domitor
Midazolam	Astellas Pharma		Posypka
No.15 Skalpel jednorazowy	pióro	219AABZX00136000
Butorfanol	Meiji Seika Pharma		Vetorphale (Wieloryb)
Kleszcze półzakrzywione	Centrum Badawcze BRC Bio	PRI13-3376
Powidon-jod	Kwadrat Y	872612
Raspatorium #14	JAKO JEDNOŚĆ	Numer katalogowy: 8-4599-01
Cienkie kleszcze	Centrum Badawcze BRC Bio	PRI13-3374
Antybiotyk-Antybiotyk Przeciwgrzybiczy 100x	Gibco (firma Gibco)	15240062
15 ml sterylnej probówki stożkowej	sokół	352096
bawełna	JAKO JEDNOŚĆ	63-1452-97
EpiLife Suplement Zdefiniowany Wzrost (EDGS)	Gibco (firma Gibco)	Zobacz materiał S0120

powiedział: powiedział: