Pasaż poprzecznego łuku aorty w modelu mysim: minimalnie inwazyjna technika u myszy do indukcji wysokiego ciśnienia w lewej komorze

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Zaw, A. M. et al. Minimalnie inwazyjne poprzeczne zwężenie aorty u myszy. J. Vis. Exp. (2017)

W tym filmie demonstrujemy eksperymentalny protokół minimalnie inwazyjnego poprzecznego zwężenia aorty u myszy w celu zbadania niewydolności serca wywołanej przeciążeniem ciśnieniem.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie miejsca operacji

Zdezynfekować miejsce operacji 75% alkoholem izopropylowym. Dostosuj temperaturę poduszki grzewczej do 37 °C, aby uniknąć zmian w częstości akcji serca i oddechu badanego zwierzęcia.
Używać narzędzi chirurgicznych wysterylizowanych w grawitacyjnym sterylizatorze wyporowym w temperaturze 121 °C przez 30 min lub innymi odpowiednimi metodami.
Weź 2-4 igły o rozmiarze 30 i wyginaj je za pomocą uchwytu na igłę, jak pokazano na rysunku 1, aby stworzyć narzędzie do podwiązania i separacji tkanek oraz do użycia jako retraktor. Zamontuj teraz zakrzywioną igłę na bawełnianym aplikatorze do użytku w chirurgii.
Stępić igłę o rozmiarze 27 i wygiąć ją pod kątem 90º za pomocą uchwytu igły. Wygładź końcówkę, pocierając twardą powierzchnię, aby uzyskać przekładkę 0,4 mm na etapie podwiązywania.

2. Przygotowanie zwierząt

Znieczulenie 2-miesięcznego samca myszy C57BL/6N o gramaturze 22–25 g należy znieczulić odpowiednią mieszaniną ketaminy i ksylazyny w stosunku do masy ciała: 100 mg/kg + 10 mg/kg i.p. Potwierdzić znieczulenie ujemnym odruchem szczypania ogona.
Usuń włosy z przedniej części szyi i klatki piersiowej, nakładając krem do depilacji na 2 do 3 minut. Usuń krem ciepłą wodą i bawełnianym aplikatorem.
Nałóż maść lub żel okulistyczny na oczy zwierzęcia, aby zapobiec wysuszeniu rogówki.
Ułóż zwierzę na poduszce grzewczej w pozycji leżącej na plecach i prowadź monitorowanie śródoperacyjne, pamiętając o prowadzeniu odpowiedniej dokumentacji co 15 minut.
Użyj papierowej taśmy chirurgicznej, aby przymocować kończyny do poduszki grzewczej, aby utrzymać zwierzę we właściwej pozycji podczas operacji.
Zdezynfekuj skórę na przemian trzykrotnie alkoholem i roztworem jodu powidonu.
Użyj sterylnej serwety z odsłoniętym polem operacyjnym, aby zapobiec zanieczyszczeniu. Używaj nowych sterylnych rękawiczek dla każdej myszy i w razie potrzeby.

3. Procedura podwiązania

Otwórz skórę myszy w pozycji środkowej szyi i klatki piersiowej za pomocą skalpela.
Pociągnij tarczycę w kierunku głowy, delikatnie oddzielając tkanki łączne nożyczkami.
Oddziel warstwę mięśni na tchawicy na linii środkowej w kierunku obu stron za pomocą zakrzywionych igieł.
Za pomocą nożyczek przetnij mostek do drugiego żebra (około 5 mm). Otwórz cięcie za pomocą retraktora lub zakrzywionych kleszczy.
Oddziel płaty grasicy od siebie i dolną ścianę klatki piersiowej, oddzielając tkankę łączną zakrzywioną igłą; w tym miejscu wyraźnie widoczny będzie poprzeczny łuk aorty i dwie tętnice szyjne
Umieść zakrzywioną igłę pod łukiem i przebij między ścianą naczynia a tkanką łączną po drugiej stronie, wypychając zakrzywioną główkę.
Za pomocą zakrzywionej igły przeciągnij szew monofilamentowy 6-0 pod łukiem aorty.
Umieść przekładkę w pętli i przymocuj szew za pomocą podwójnego węzła. Delikatnie zdejmij przekładkę.
Potwierdź udane zwężenie z pozycją węzła i odetnij końce szwu.
Zamknij ścianę klatki piersiowej za pomocą jedwabnego szwu 6/0 z prostym przerywanym wzorem szwów. Zamknij skórę szwem monofilamentowym 6/0 w ciągłym wzorze szwów.

4. Opieka pooperacyjna

Nałóż roztwór jodu powidonu na miejsce szwu i umieść zwierzę we wstępnie ogrzanej klatce w celu rekonwalescencji i monitorowania pooperacyjnego.
Buprenorfinę należy wstrzykiwać (0,05–0,1 mg/kg s.c. co 12 godzin) po odzyskaniu przytomności przez zwierzę w celu złagodzenia bólu i dostarczenia myszy odpowiedniego miękkiego pokarmu.
Po pełnym wyzdrowieniu zwierzę należy umieścić w pomieszczeniu z 12-godzinnym cyklem jasnym/ciemnym.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Rysunek 1: Proces formowania pożądanych haczyków igły poprzez zginanie końcówki igły o rozmiarze 1 cal i rozmiarze 30. (A) Oryginalna końcówka igły o rozmiarze 1 cala i rozmiarze 30. (B) Chwycić końcówkę igły za pomocą uchwytu igły i zegnąć mniej więcej w połowie jej długości. Zegnij igłę w pętlę, używając uchwytu na igłę i rąk, jeśli to konieczne...